Способ выявления фракции хондроитинсерных кислот Советский патент 1985 года по МПК G01N33/48 

§

СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ФРАКЦИИ ХОНДРОИТИНСЕРНЫХ КИСЛОТ путем электрофоретического разделения гликозаминогликанов в полиакриламидном геле с последующим окрашиванием, отличающийся тем, что, с целью сокращения времени, прокрашивание электрофореграмм проводят в 0,010,2 н. растворе риванола в течение 40-10 с соответственно.

СТЪ 00 QD 00

Изобретение относится к медицинской химто и касается электрофоретического исследования гликозаминогликанов в биологических жидкостях в клинике, а также в других областях народного хозяйства, где применим аналитический электрофорез в геле.

Цель изобретения - сокращение времени.

П р и м е р 1. Выявление фракции хондроитинсерных кислот мочи. Применяют отечественный прибор для электрофореза ПЭФА-1. В качестве разделяющего носителя берут 10%-ный полиакриламидный гель, приготовленный по еледующей прописи: раствор акриламида (акриламид 28 г, бисакриламид 0,735 г вода до 100 мл) - 3 ч;Трие -соляный буфер рН 8,9 (трмс 36,6 г; 1 н. НСб 48 мл; ТЕМЕД 0,2 3 мл ; диет. вода до 100 мл) - 1 ч; вода - t ч; персульфат аммония 0,14%-ный - 4 ч. Полимеризацию гелей проводят под лампой дневного света в течеяие 30-40 мин в стеклянных трубках размером 100 мл X 5 .мм. Вместо разделяющего геля берут сефадекс G-200 по 5 мг на трубку Сверху наслаивают 0,3 мл нативной мочи, а на нее электродный трис -глицИновый буфер рН 8,3 с Ионной силой 0,02. Состав .буфера: трис 0,75 г; глицин 3,6 г; диет, вода до 1000 мл. Электрофорез проводят S течение 1,52 ч при силе тока 2-2,5 мА на одну трубку или по достижении пигментной полоски мочи 20 мм от нижнего края трубки. После окончания разделения столбики геля извлекают из трубок

и помешают в 0,01 н. раствор риванолана40 с, после чего появляется белое окрашивание в том месте, где находится фракция хондроитинсерных кислот, примерно 10-15 i от нижнего края геля. Другие гликозаминогликаны не определяются.

При«ер2. Выявление фракции хондроитинсерных кислот в лекарственном препарате Румалон (СФРЮ) Применяют отечественный прибор для электрофореза ПЭФА-1. В качестве разделяющего носителя берут 10%-ный полиакриламидный гель, приготовленный по следующей прописи: раствор акриламида (акриламид 28 г, бисакриламид 0,735 г вода до 100 мл) - 3 части; трис -соляный буфер рН 8,9 (трис 36,6 г; 1 н. НСР 48 мл; ТЕМЕД 0,23 мл; диет, вода до 100 мл) - 1 ч.; вода - 1 ч; персульфат аммония 0,1А%-ный - 4 ч. Полимеризацию гелей проводят под лампой дневного света в течение 3040 мин в стеклянных трубках размером 100x5 мм. Вместо разделякадего геля берут сефадекс С-200 5 мг на трубку. Сверху наслаивают 0,01-0,02 мл препарата Румалон (СФРЮ). Далее сверху наслаивают трмс -глициновш буфер рИ 8,3 с ионной силой 0,02 и в этом же буфере проводят электрофорез в течение 1,5-2 ч при силе тока 2-2,5 мА на одну трубку. Затем гели извлекают из трубок и помещают в 0,1 н. раствор риванола на ЗО с, после чего появляется белое окрашивание, хондроитинсерных кислот в to мм от нижнего края . геля.