(5Ю ИММУНОСОРБЕНТ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛЕЙКОЗНО-ИЗМЕНЕННЫХ ЛИМФОЦИТОВ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Штамм культивируемых гибридных клеток животных МUSмUSсULUS L - продуцент моноклональных антител против В-лимфоцитов крупного рогатого скота | 1988 |
|
SU1645295A1 |
| КОМПЛЕКСНАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ИММУНОФЕРМЕНТНОГО АНАЛИЗА (ИФА) ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ УРОВНЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСНЫМ РЕСПИРАТОРНЫМ ЗАБОЛЕВАНИЯМ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2008 |
|
RU2371726C1 |
| СПОСОБ ЛЕЧЕНИЯ ЛЕЙКОЗА С АУТОИММУННЫМИ ПРОЯВЛЕНИЯМИ, ИНДУЦИРОВАННОГО В ЭКСПЕРИМЕНТЕ | 1993 |
|
RU2085215C1 |
| Способ получения вакцин против лейкоза крупного рогатого скота | 1977 |
|
SU820015A1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛИКЛОНАЛЬНОЙ МОНОСПЕЦИФИЧЕСКОЙ СЫВОРОТКИ ПРОТИВ СЕКРЕТОРНОГО ИММУНОГЛОБУЛИНА А ЧЕЛОВЕКА - SIgA | 2012 |
|
RU2499605C1 |
| Способ постановки реакции иммунофлюоресценции для диагностики лейкоза крупного рогатого скота | 2023 |
|
RU2810589C1 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ СТАНДАРТНОЙ ПОЛОЖИТЕЛЬНОЙ ПАНЕЛИ СЫВОРОТОК КРОВИ ДЛЯ КОНТРОЛЯ КАЧЕСТВА ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ К ВИРУСНЫМ РЕСПИРАТОРНЫМ ИНФЕКЦИЯМ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ ОРГАНИЗМА КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА | 2008 |
|
RU2392331C2 |
| СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭСТРОГЕНСВЯЗЫВАЮЩЕГО БЕЛКА, АССОЦИИРОВАННОГО СО ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫМИ НОВООБРАЗОВАНИЯМИ | 2012 |
|
RU2489440C1 |
| Способ определения иммуноглобулинов человека | 1982 |
|
SU1025430A1 |
| КОМПЛЕКСНЫЙ АНТИГЕН ВИРУСА КОРИ, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ В КАЧЕСТВЕ КОМПОНЕНТА ИММУНОФЕРМЕНТНОЙ ТЕСТ-СИСТЕМЫ ДЛЯ ДИАГНОСТИКИ АНТИТЕЛ К ВИРУСУ КОРИ | 2010 |
|
RU2441666C1 |
I . . Изобретение относится к ветерина рии, а именно к ветеринарной иммунологии, и может быть использовано при препаративном выделении лейкемически лимфоцитов для морфологических, биохимических и. иммунологических исследований. Известно выделение лимфоцитов из крови .лейкозом животных путем центрй|)угирования в градиенте плотности фиколизопака по методу A.Boyum tn. Однако этот метод является трудоемким и требует сложного оборудования. Наиболее близким к изобретению является иммуносорбент для разделения Т,В и О клеток, содержащий активированный BrCN-oM сефадекс G-200, покрытый анти-Р(аЬ)|2 антителами. Соотношение осевшего неактивированного геля (мл) с анти-РСаЬ), антителами (мг) 3:1 Г23, , Однако известный иммуносорбент не позволяет выделить отдельную популяцию лейкозных лимфоцитов. Целью изобретения является повышение селективности в отношении лейкознр-измененных клеток. Поставленная цель достигается тем, что в качестве белка используют у-глобулиновую фракцию, содержащую антитела, выделенные из сыворотки лошадей, иммунизированных, лимфоцитами крови больных лейкозом коров, А также тем, что соотношение осевшего неактивированного сефадекса G-200 (в мл) с .-глобулиновой фракцией (в мг) составляет 1:8 - 1:6, Пример. Для получения лошадиной антилимфоцитарной сыворотки против лимфоцитов больных лейкозом коров АС-Л(ЛЛ) иммунизируют лошадей лимфоцитами, выделенными из крови больных лейкозов коров. Полученную сыворотку подвергают определенным адсорбциям.
Для приготовлений иммуносорбента берут 60 мл I осевшего сефадекса G-200 сухого геля 2 г, размером част.иц kO - 120 мкм)f который активируют бромцианом (100 мг BrCN на 1 мл осев шего геля). Активированный сефадекс G-200 инкубируют ч при комнатной температуре с 480 мг у -глобулина, выделенного из лошадиной антилимфоцитарной сыворотки АС-Л(ЛЛ). Избыток белка отмывают 0,1 М баротным буфером рН 8,5. Активные группы геля блокируют 1 М этаноламина рН 9 в течение 2 ч. Блокирующий агент отмывают 0., 1 М боратным .буфером рН 8,5. Полученный конъюгат отмывают несколько раз поочередно 0,1 М боратным буфером рН 8,5 с 0,5 М NaCl и 0,1 М ацетатным буфером рН t,0 с 0,5 М NaCl.
Колонки размером 1,5 х 10 см заполняют иммуносорбентом, предварительно отмытым 0,01 М фосфатным буфером рН 7,2,Заполненные колонки промывают средой 199 (среда 199 на растворе Хенкса рН 7,2 культур клеток, АМН СССР, Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов, Москва, ), обогащенной 5% фетальной сывороткой крупного рогатого скота и % пенициллина, 1% стрептомицина.
На каждую колонку наносят по 2 X 10 клеток из крови больных лейКак видно из данных табл. 1, основная масса лимфоцитов больных лейкозом животных задерживалась на колонке,, что указывает на способность иммуносорбента специфически связывать лейкозные клетки.
Для подтверждения того, что выделенные лимфоциты являются лейкозными, подвергали их исследованию в цитотоксическом тесте (ЦТТ) с лошакозом коров, суспендированных в 5 10 мл среды 199 с добавлением 5% фетальной сыворотки. Клетки в колонке инкубируют при комнатной температуре в течение 30 мин.
Для элюирования клеток, связанных с антителами на колонке, используют 1%-ный раствор бычьего -глобулина в среде 199 с 5%-ной фетальной сывороткой (100 мл). Содержимое колонки
0 помешивают пастеровской пипеткой. Элюированные клетки 3 раза промывают средой 199 и проверяют их жизнеспособность 0,05% раствором трипанного синего.
5
Для контроля через колонку, заполненную иммуносорбентом, пропускают лимфоциты крови здоровых коро%. Элюцию лимфоцитов проводят средой того
0 же состава при той же скорости. Как и при фракционировании клеток из крови больных лейкозом коров,
Все клетки, не обладающие сродством к иммуносорбенту, проходили
5 не задерживаясь (I фракция), а клетки, обладающие сродством к иммуносор,бейту, сорбировались на колонке (II фракция).
В табл 1 представлены результаты разделения лимфоидных клеток крови больных лейкозом и здоровых животных методом аффинной хроматографии.
Таблица 1
диной АС-Л(ЛЛ), кроличьей АС-К(ЛЛ) и бычьей АС-Б(ЛЛ) антисыворотками, приготовленными против лимфоцитов крови больных лейкозом коров.
Получили характеристики фракционированных клеток.
В табл. 2 представлена цитотоксичность антисывороток на лимфоциты крови крупного рогатого скота.
Таблица 2
