(54) СПОфОБ ОЧИСТКИ МИКРООРГАНИЗМОВ
Изобретение относится к микробиоло Гии и Может быть использовано для получения бактериальной массы высокой степени чистоты для дальнейшего приготовления из нее специфических антиГенов. Известен способ очистки микроорганизмов путем отделения биомассы от жидкой фазы с помощью физикеского фактора 1. Ойнако известный способ не позволяе достичь полной очистки микроорганизмов от щзимесей, например культуральной жидкости и ее составляющих. Целью изобретения явпяется повышение степени очистки. Эта цель достигается тем, что соглас ho способу очистки микрюорганизмов путем отделения биомассы от жидкой . фазы с помощью физического фактора от- деление биомассы от жидкой фазы осуществляют с помощью электрофореза при силе тока 24-25 мА и нащ)яжении 1ОО12О В в течение 18О-2ООмин. . Предложенный способ осуществляют с помощью устройства. На фиг. 1 изображена верхняя камера, общий вид; на фиг. 2 - то же, вид сверху; на фиг. 3 - нижняя камера, общий вид, разрез; на фиг. 4 - то же; вид сверху. Устройство состоит из верхней 1 (фиг. 1) и нижней 2 (фиг. 3) камер, стенки которых выполнены из оргстекла. Обе камеры содержат по два платиновых электрода 3 с выведенными из камер клеммами 4 для подключения тока. Верхняя камера 1 снабжена угловыми опсфами 5. Ко дну верхней камеры с внещней стороны под {фямым углом одна к другой прикреплены четыре пластины 6, образующие стенки емкости. Между пластинами 6 формируется 7%.ный попиакриламидный гель. Между основаниями пластин дно камеры снабжено прорезью 7, в которую заливают реактивы, формирующие гелевый блок. 3 Зазор между пластинами определяет толщину гелевого блока, а высота пластин - его длину. Пример. Гелевый блок формирую следующим образом. К нижней части пластин 6 приклеива ют полоску лейкопластьфя, образующую днище емкости гелевого блока. Емкость заполняют через прорезь 7 35 мл мономера геля (реактивы стандартные). Затем наслаивают воду для формирования ровной поверхности геля, что исключает доступ кислорода, препятствующего поли меризации геля. Полимеризацию осущест ляют 45-6О мин. Конец полимеризации определяют по образованию четкой грани цы раздела между фазами. Лейкопластьфь снимают, сливают воду. На поверхность сформированного 7%ного полиакриламидного геля наносят 2 мл бактериальной массы в ввде суспе зии. Бактериальная масса представляет собой культуру лептоспир штамма Patos выращенную в жидкой питательной среде с добавлением в качестве примеси кроличьей сыворотки. Камеры 1 и 2 заполняют трисглици- новым буферным раствором, рН 8,9. Верхнюю камеру 1 помещают над нижней камерой 2, устанавливая ее так, чтобы угловые опоры 5 встали на стенки нижней камеры 2. Прибор клеммами 4 электродов 3 включают в электрическую сеть через выпрямитель переменно- го тока. Электрофорез геля с нанесенно на его поверхность бактериальной массой ведут 18О-2ОО мин током 24-25 м щж напряжении 10О-120 В. Под действием электрического тока примесь кроличьей сыворотки проникает в гель, а на поверхности остаются бактерии лептоспир высокой степени чистоты. 9 По истечении времени элeктpoфqpeзa с поверхности геля снимают механическим путем, например соскребанием, отделенные и неразрушенные жизнеспособные бактерии. . Антиген, полученной из взвеси лептоспир, очищенный предложенным способом в реакции преципитации и иммуноэлектрофореза с истощенной от тфимесей ан- тисывороткой дает одну линию. Это является следствием того, что получены бактерии высокой степени частоты, в то время как антиген, очищенный известным способом, в подобной реакции дает 5-7 линий, 4-6 из которых приходятся на 1фимесь кроличьей сыворотки. Иммунизация животных антигенами, полученными из культуры, очищенной предложенным способом, приносит желаемые результаты. Антигены высокой степени чистоты вырабатьшают в живом организме только специфические антитела, что позволяет своевременно выявлять инфекционные и бактериальные заболевания. Кроме того, предложенный способ позволяет значительно снизить трудоемкость гфоцесса очистки микроорганизмов от примесей. изобретения о р м у л Способ очистки микроорганизмов ду- тем отделения биомассы от жидкой фазы с помощью физического фактора, о т л и чающийся тем, что, с целью повыщения степени очистки, отделение биомассы от жидкой фазы осуществляют с помощью электрофореза при силе тока 24-25 мА и напряжении 1ОО-120 В в течение 18О-200 мин. , Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Фробишер М. .Основы микробиологии. М., Мир, 1965, с. 337-3.38.
(pue.f
фа г. 2.
фиг.З
№
