I
Изобретение относится к микробио логии, а именно к изучению энтонопатогенных бактерий, используемых в про|изводстве бактериальных инсектицидных препаратов. Оно может быть использовано как в научно-исследовательских целях при селекции высокопродуктивных штаммов Bacillus thuringiensis, так и в практической работе, при производстве инсектицидных препаратов из культур этого вида.
Культуоальные признаки бактерий Bacillus thuringiensis при выращивании их на различных питательных средах весьма ограничены и по характеру колоний нельзя отличить клоны, образующие и не образующие кристалловидные токсины.
Имеются данные о дифференциации по морфологическим особенностям колоний 11.
Однако связи характера колоний с наличием или отсутствием кристаллов в культуре не отмечается.
Известно также выявление кристаллообразования разными способами микроскопического исследования в световом и электронном микроскопах t21.
Однако определение известными способами в культурах Вас. thuringiensis кристаллообразования, и тем. более, численного соотношения в .ней кристаллообразующих и бескристальных клонов затруднено трудоемкостью
10 микроскопических исследований с большой затратой рабочего времени. Последнее ограничивает возможности проведения больших объемов исследований, требующих учета кристаллообразования
«5 у отдельных колоний, в частности, при массовых анализах на производст: ве.
Цель изобретения - ускорение процесса дифференциации культур Bacilгоlus thuringiensis.
Цель достигается тем, что соглас-, но способу дифференциации культур, SaclUus thuringiensis культивиру- ,
ют на яичножелтковой агариэованной среде, а колонии отбирают по розовому окрашиванию.
Способ заключается в использовании установленной прямой корреляции пигмеитообразования некоторых разновидностей Вас. thur ing iensis с образованием энтомоцидных кристаллов. Колонии, образующие кристаллы, дифференцируют от колоний, не образующих кристаллы, визуально, по культу ральному признаку, а именно: пигменту розового цвета на эмуль,сии яичного желтка в физиологическом ipacTSope с 3% агар-агара. Яичный желток из асептически вскрытого яйца добавляют в растопленный и остуженный до 0-50С стерильный физиологический раствор с агаром. После тщательного перемешивания среду разливают в чашки Петри, на которые рассевают суспензию исследуемой культуры. Инкубация проводится при 28 30°С в течение 2 сут.
Кристаллообразующие колонии дифференцируются визуально по их розовому цвету, в отличие от беловатой пигментации колоний, не образующих кристаллов.
Дифференциацию кристаллообразования пигментированных культур осуществляют с обязательной индивидуальной микроскопией каждой колонии.
Установленная между кристаллообрэзованием и пигментообразованием корреляция подтверждена при исследовании рассевов пигменторбразующих культур Вас. thur Ing i ens 5 на вьпиеуказенной питательной среде.
Пример 1. Культуры разновидности caucasicus состоят из штаммов, различных по составу пигментных и апигментных клонов. Одни культуры состоят полностью из пигментных клонов, другие - из апигментных, третьи - из их смеси.
Корреляция образования кристалловидных токсинов с пигметообразованием у культур Вас.thurlngiensis v cancasicus приведена в табл. 1.
Таблица 1
Как видно из табл. 1 данные микроанализа выявляют связь образования кристаллов с пигментообразованием.
Серологические исследования показывают, что выделение из культур . кристаллофоров разновидности саиcasicus штаммы апигментных некристаллофоров (2 штамма) оказываются гомологичными caucasicus по Нантигену. Это устраняет предположение о возможности наличия в культуре посторонних Вас.сеreus.
Пример 2. Коррекляция образования кристалловидных токсинов с пигментообразованием у культур серо пита А Bac.thurmgiensls . приведена в табл. 2.
Таблица
