присутствующих в сыворотке, которую предстоит обработать. Для полного о мена анионов и катионов необходимо использовать достаточное количество смешанной ионообмен юй смолы, а также контролируют рН. Величина рН соответствует изоэлектрической точке липопротеинов, обычно присутствующих в сыворотке.. Для достижения снижения величины рН, вызывающего осаждение липопротеинов из сыворотки одновременно с ионным обменом, необходимо использовать избыток катионообменной смолы т.е. необходимо, чтобы в используемую смешанную анионо- катионообмен-, ную смолу был введен избыток катионобменной смолы. Это избыточное коли чество катионообменной смолы определяют путем титрования данного объема сыворотки, например 25 мл, разбавленной (1,ООЛ) соляной кислотой до рН . Объем кислоты, пошедшей на титрование, обозначают как титр сыворотки и, зная этот титр, используют соответствующее количество катионообменной смолы. Для получения делипилизированной /сыворотки используют замороженную человеческую сыворотку. Ей дают оттаять, при 32 - 37 С, используяводя ную баню. Оттаявшую сыворотку осмат ривают, нет ли в .ней .видимых призна ков липемии или гемолиза, т.е. сыво ротка должна быть прозрачной и прак тичеЬки бесцветной. Если сыворотка визуально выглядит красной или розо вой по цвету или мутной на просвет, то эта сывор5отка непригодна для использования. Кроме того, сыворотка не должна содержать патогенных микроорганизмов. При смешении ионообменной смолы и сыворотки осуществляют -постоянный контроль за изменениями величины рН В первые несколько минут после прибавления смолы к сыворотке величина рН увеличивается по сравнению с первоначальной до 9,0 - 10,3- Для снижения рН и удаления ионов из сыворотки обычно используют избыток смешанной ионообменной смолы с тем, чтобы компенсировать некоторое умень шение эффективности смолы, вызванное отложением липопротеинового осадка на поверхности гранул смолы в процес се преципитации липопронтеинов. При необходимости к сыворотке добавляют в 1,,15 раз больше по сравнению с теоретически вычисленным количество смешанной ионообменной смолы., После того, как рН достигает 5,21:0,3 (это обычно занимает 8 15 мин|, перемешивание смеси ионообменной смолы и сыворотки прекращают и надосадочную сыворотку (суперна-. тант) отделяют от смолы и выпавших в осадок липопротеинов. Отделение супернатанта от осадка осуществляют любым известным способом, таким как фильтрование, декантация, отсасывание надосадочной сыворотки. Величину рН сыворотки, отделенной от осадка, доводят затем до 4,0 t1,0 добавлением соляной кислоты, чтобы обеспечить низкую ферментативную активность в сыворотке. Желательно, чтобы активность фермента креатинкиназы (КК не превышало 3 МЕ/л. Для этого сыворотку выдерживают при рН А, О to, 2 в течение длительного времени, чтобы обеспечить полное завершение денатурации. Этот процесс контролируют, периодически проводя анализ сыворотки для определения активности КК. Эту сыворотку можно оставить на ночь ,на хранение при конечном значении рН, если хранить ее при k С, рН сыворотки доводят до конечного значения, равного 7,,3, путем добавления подходящего буферного раствора, такого как 2-амино2-оксиметил-1,3 пропандиола. Эту делипилизированную сыворотку можно хранить длительное время в замороженном состоянии или при в течение 48 ч (без добавления микробных ингибиторов). Эту сыворотку можно использовать дЛя клинических анализов. П р и м е .р. Приготовление смешанной анионо-катионообменной смолы. Универсальную высокоемкую сильнокислотную катионообменную смолу Дуолйт б-РС-301 и высокопористую сильноосновную анионообменную смолу ДуолитGPC-316 смешивают между собой, полученную смесь тщательно перемешивают с целью гомогенизации в смесителе до получения гомогенной смеси, которую можно хранить в герметично закрытых сосудах или контейнерах для предотвращения изменения воздушно-сухого веса и нежелательного взаимодействия с атмосферной двуокисью углерода.
