Способ определения радиоактивности вещества по восстановленному серебру авторадиограммы Советский патент 1983 года по МПК G01T1/167 

со со чают непосредственно при элюции, ко торую проводят путем обработки 0,10,5 Н водным раствором азотной кисл ты в течение 20-30 мин., и раэведеHJfteM его 0,5 Н раствором серной кис лоты, затем добавляют 0,15-0,25 М раствор дитизона в хлороформе, отде ляют органическую фазу, фотометриру ют и после фотометрировани подсчит вают количество восстановленного се ребра, которое соответствует количеству радиоактивности. Сущность предложенного способа поясняется примерами егО осуществлени Пример. Проводят определение радиоактивн сти С-убихинона неомываемой фракции печени крыс после введения им, 1 м Си 14С-ацетата за 6 часов до забо Разделение компонентов, неомыляемой фракции печени крыс -осуществляют известным методом с использовани методов тонкослойной и бумажной хром тографии. . . Полученные хроматограммы помещаю Вкамеры, экспонируют в течение 2030 дней в темноте с наложенной рент ген-пленкой РМ-1. Время экспонирования подбирают предварительно в зависимости от радиоактивности раствора, который наносят на хроматографичесую пластинкуили бумагу. Коэффидиент контраст ности участков пленки должен быть меньше 1. Полученные авторадиограмм проявляют. Потемневшие и контррльны участки одинаковой геометрической формы вырезают из авторадиограммы, взвешивают, измельчают и помещают в колбу Къельдалян, в которой содержится 5мл 0,5 Н раствора азотной кислоты.Элюцию восстановленного серебра авторадиограмм проводят при в течение 20 мин. Затем элюенты охлаждают, переносят в мерные колбы на 50-100 мл и разбавляют 0,5 Н раствором серной кислоты. Окра-иивание восстановленного .с ребра проводят, помещая аликвоты исследуемых растворов в длительные воронки с 5 мл 0,15 М раствора дити зона в хлороформе. После встряхивания в течение 30 сек, отделяют окрашенную органическую форму, содержащую дитизонат серебра и фотометрируют на Spekol при 620 М мк против контроля, (экстракты с контрольных участков пленки получают по аналогии с исследуемыми с соблюдени разведения кислотами и добавлением 5 мм 0,15М раствора дитизона в хлороформе). Радиоактивность исследуемого вещества определяют по формуле: p-lil lL . к где: R - радиоактивность (имп/мин), EDzAg - показатель экстинкции раствора дитизона серебра, .Kf - коэффициент молярной экстикции дитизона серебра, R; - коэффициент пересчета 68,4.10, выведенный эмпирически по графику зависимости САд KR. Радиоактивность С - убихинона . соответствовала 5б±4 имп/мин. Для проверки -полученных данных про водят ЭЛЮЦИЮ изучаемых веществ хро- матограмм с. помощью 15 мл серного эфира. Полученные элюенты наносят на филь тры и измеряют радиоактивность на счетчике SL - 30. Ошибка определения, радиоактивности изучаемых соединений предложенным методом составляет 2%, а -С применением счетчика SL - 30 - 5 Пример2. Аналогично проводят определение радиоактивности С-убихинона неомыляемой фракции печени крыс после введения им 1 м Си и С - ацетата за 6 часов до забоя- Разделение компонентов фракции по методу тонкослойной и бумажной хроматографии, экспонипование хроматограмм с рентгенпленкой, проявление авторадиограмм проводят аналогично методике, описанной в примере 1. Потемневшие контрольные участки одинаковой геометрической формы вырезают из авторадиограмм, взвешивают измельчают и помещают в колбу Къель-. даля с 10 мл раствора 0,3 азотной кислоты. Элюцию восстановленного серебра авторадиограмм проводят при в течение 25 мин. Затем элюенты охлаждают, переносят в мерные колбы на 50-100 мл и разбавляют 0,5 Н раствором серной кислоты. Окрашивание восстановленного серебра проводят, помещая аликвоты исследуемых растворов в делительные воронки .с 10 мл 0,25 М раствора деризона в хлороформе. После встря- ; хивания в течение 30 сек. отделяют окрашенную органическую Фазу, содержащую дитизонат серебра, фотометри.руют на Spekol при 620 ммк против контрольных участков, радиоактивность которых определяют анало-. гичио. Ращиоактивность С-убихинона определяют по формуле 1. R 55t4 икш/мин. Полученные данные проверяют путем элгоцин изучаемого вещества с хроматограммы с помощью 15 мл серного эфира. Радиоактивность элюентов, наносипехх на фильтре,измеряют на счёт,чике SL - 30. Ошибка определения радиоактивности излучаемых соединеНИИ согласно предложенной методике составляет 2%, а при использовании счетчика SL - 30 - 5%. Примерз. Все операции по определению радио активности с-убихинона неомьшяемой фракции печени крыс осуществляк т в соответствии с последовательностью, описанной в примерах 1 и 2. Обработк участков пленки проводят в 5 мл раст вора 0,1 азотной кислоты в колбах Къельдаля при в течение 30 мин После разбавления 0,5 Н раствором серной кислоты окрашивают восстановгленное серебро в делительных воронках С,5 мл 0,3 М раствора- дитизоНа в хлороформе. Радиоактивность .бихинона определяют по формуле: R 36 ± 7 имп/мин. Примеры 4-10. Проводят определение радиоактивности Ч С-убнхроменола, С-сквалена С-холестёрина, (никотиновой кислоты), (никотинамида), С-НАД (иикотинсшидадениндинукдеотид) и С-НАДФ (никотинамидадениндинуклеотидфосфата) аналогично определяют радиоактивности С-убихинона. Результаты оп ;$еделения радиоактивности И сведены в таблицу. Проверяют полученные данные путем элюции изучаемых веществ с хррматограмм с помощью 5 мл серного зфир. После нанесения элюентов на фильтры измеряли их радиоактивность на счетчике SL - 30. Как в примерах 1-3, ошибка определения радиоактивности изучаемых соединений предложенным методом составляла около 2%, а с применением счетчика SL - 30 до 5%. Таким образом использование изобретения позволяет повысить точность и чувствительность измерений по определению радиоактивности вещества.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ РАДИОАК-I ТИВНОСТИ ВЕЩЕСТВА ПО ВОССТАНОВЛЕННОМУ СЕРЕБРУ АВТОРАДИОГРАММЫ, включающий проявление авторадиограммы, подготовку к-элюции, элюцию исследуемого вещества, его фотометрирование, подсчет количества восстановленного серебра и определение величины радиоактивности, отличающийся тем, что, с целью повьшения точности и чувствительности при одновременном упрощении способа, при элюции получают восстановленное серебро путем обработки 0,1-0,5 Н водным раствором азотной кислоты в течение 20-30 мин., и разведения его 0,5 Н раствором серной кислоты, затем добавляют 0,15-0,25 М раствора дитизона в хлороформе, отделяют органическую фазу и после фотометрирования, подсчитывая количество восстановленного серебра, § определяют величину радиоактивности (Л вещества.

С- С-хо- С-НК 1 Субихросквален лeqтepин менол

R (имп/мин) 241+5 218+5 163+7

32±8 110+12 259+23 168+10 С-НАД С-НАДФ