Способ получения комплекса протеолитических ферментов Советский патент 1982 года по МПК A61K35/60 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ КОМПЛЕКСА ПРОТЕО ШТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ

I

Изобретение относится к ферментной промьшшенности, а именно к технологии получения протеолитических ферментов.

Известен способ получения комплекса протеолитических ферментов путем гомогенизации животной ткани водных организмов, осаждения ферментов с последующим аьвделением целевого продукта..

Однако известный способ не обеспечивает высокого выхода целевого продукта (выход препарата составляет 20 г из 1 кг сырья).

Целью изобретения является повышение выхода и расширение сырьевой базы.

Указанная цель достигается , способом получения комплекса протеолитических ферментов, включак щим гомогенизацию животной ткани водных организмов, осаждение ферментов с последукнцим выделением целевого продукта, отличакидегося от извест-

ного тем, что гомогенизации подвер- гают отходы окуня-терпуга Sebastolobus maerohis, Pleurogrammus monopterlgiur при температуре 2-4 C далее ферменты оса;кдают охлажденным до -15 т (-20°с) ацетоном при соотношении сырья к ацетону 1:2,21:2, полученный осадок через 2030 мин отжимают и удаляют ацетон при температуре 20-25 С.

to

Пример. 1кг гепатопан- креаса, вьщеленного из свежего окуня-терпуга Sebastolobus maerohis, гомогенизируют на микроизмельчителе

«5 тканей РТ-2 со скоростью 5000 об/мин при до получения однородной массы.

К 1 кг охлажденного гомогената добавляют 2 объема (2 литра) аце20тона, охпажденного до при быстром перемешивании. Через 20 мин . полученный осадок отжимают на Путч- фильтре, высушивают при 20 С, удаляя следы ацетона продуванием воздуха.

Комплекс ферментов, полученный по предложенному способу, содержит щелочную, нейтральную и кислую протеиназы субстраты: казеин рН 7,8; гемоглобин рН 6,0;3,0%, аминопептидазы,(лей-гли-гли рН 7,8), карбоксипептидазы (карбобензокси-глицнлглицин, рН 7,8). Из 1 кг гепатопанкреаса окуня-терпуга получают в среднем 225 г препарата (25,8 г белка) , что составляет 23% от ИСходного сырья. Выход по казеинолитической активности в среднем 65,770%. Удельная активность, выраженная в ед/мг белка, равна 309 / субстрат БТЮ - бензоил-2 тирозин метиловый эфир), 192 ( субстрат БАЭЭ бензоип-2-аргинин этиловый эфир), 0,4 ( субстрат казеин). Гепатопанкреас это совокупность внутренних органов рыб с преобладанием элементов желудочно-кишечного тракта, содержащих гепатопанкреас.

Пример2. 1кг гепатопанкреаса окуня-терпуга Pleurograramus monopterigiur гомогенизируют при 4,5 тыс. об/мин при до поАцетоновый препарат из водного экстракта

Ацетоновый препарат из гомоге- ната

Результаты показали, что предло женный способ позволяет получить из гепатопанкреаса окуня-терпуга по простой технологии ферментный комплекс с высоким выходом и имеющий набор ценных ферментов. Общая протеолитическая активность ацетоновых препаратов, полученных из водных экстрактов (см. табл.) по сравнению с протеолитическим комплексом, полученным по предложенному способу, значительно ниже: на казеине - в 3,5 раза, БАЭЭ - в 3,1 раза

33097 -4

лучения однородной массы. К I кг охлажденного гомогената добавляют 2,2 л охлажденного до ацетона при перемешивании. Через 30 мин 5 осадок отжимают на Нутч-фильтре, высушивают при 25С, удаляя следы ацетона, .в вакууме сушильного шкафа.

Комплекс ферментов, полученный

10 по описанному способу, содержит

щелочную, нейтральную и кислую протеиназы, аминопептидазы, карбоксипептидазы. Из 1 кг гепатопанкреаса окуня-терпуга получают 248 г

JS препарата (28 F белка), что составляет 25% от исходного сырья. Выход по казеинополитической актив ности составляет 70%. Удельная активность, выраженная в ед/мг белка,

20 равна 309 ( субстрат БТМЭ - бензоШ1-7-тирозин метиловый эфир, 192 (субстрат БАЭЭ - бензоил- -аргинин этиловый эфир) , 0,4 субстрат казеин).

В таблице представлены сравнительные данные по выходу и активности комплекса протеолитических ферментов.

11000 5.337.600 8.590.200

БТЮ - в 4,5 раза. При известном способе выход препарата составляет 20 г из 1 кг сырья. В предлагаемом способе выход составляет 225-250 г

препарата из 1 кг сырья или в расчете на белок в препарате - 2628 г белка. Из 10 кг сырья получен препарат, содержащий 20 г химотрипсина и 24 г трипсина, в то время,

как из 10 кг поджелудочной железы крупного рогатого скота можно получить 3 г кристаллического фермента. 5 93 Формула изобретеш1я Способ получения комплекса протеолитических ферментов путем гомогенизации животной ткани водных организмов, осаждения ферментов с последующим выделением целевого продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода и расширения сьфьевой базы, гомоге30976низации подвергают отходы окунятерпуга Sebastolobus maerohls, Pleurogrammus monopterlglur при , далее ферменты осаящают ох5 лажденным до (-15)-(-20)с ацетоном при соотношении сырья к ацетону 1:2,2-1:2, полученный осадок через 20-30 мин отжимают и удалянпацетон при 20-25С.