Способ выделения комплекса протеолитических ферментов из морепродуктов Советский патент 1983 года по МПК C12N9/64 

00

о

4

О

СО

Изобретение относится к технолоии получения протеолитических ферентов и может быть использовано в ерментной, химической и пищевой про- , ышпенностях в частности для ускореия процессов созревания соленой про-Н укции из рыб и производства консеров.

В настоящее время ферментные преараты находят широкое применение в азличных отраслях промышленности О ля гид|)олиза белковых субстратов з сырья животного и растительного происхождения.,

Возросшие потребности народного хозяйства в ферментных препаратах 15 обуславливают необходимость поиска новых источников сырья для их получения и разработки эффективных способов производства-ферментов.

Известны способы получения фер- 20 ментных препаратов преимущественно из сырья животного происхождения LI }

Такие способы, основанные на обработке измельченного сырья из органов животных, выделении ферментов 25 путем осаждения и многостадийной очистки ферментной фракции,/являются экономи ски невыгодными из-за низкого выхода ферментных препаратов из дорогостоящего сырья.

Известны более дешевые способы получения протеолитических ферментов из микробиологического сырья, основанные на выращивании высокопродуктивных штаммов микроорганизмов и выделении из них ферментов путем осаждения белков, их фракционировании и очистке ферментных фракций {2J.

Однако получаемые этим способом комплексы пригодны только для проведения более глубокого гидролиза бел- 40 ков (до аминокислот), а не до низкомолекулярных пептидов,; что ограничивает их применение при получении рыбных продуктов.

Наиболее близкимпо технической 45 сущности к предлагаемому способу является способ выделения комплекса протеолитическихферментов из морепродуктов, включакнций гомогенизацию гепатопанкреаса кальмара тихрокеан- ; гп ского и криля новозеландского в вод- ном растворе при соотношении ткань;вода, равном (1:1) - (1:1,3); Очистку полученной жидкой фазы от примесей путем введения сульфата амиония до насыщения 0,8; отделение осадка трифугированием при 8000 об/мин; растворение ермедаов в дистиллированной, воде; диализ и лиофилизацию целевого продукта СЗ.:

Недбстатком известного способа 60 является недостаточно высокий выход целевого продукта. В процессе выделения теряется часть ферментов и ухудшается качественный состав получаемого ферментного комплекса. Кро- 65

ме ТЪго, необходимость заготовки сырья далеко в море и его длительная транспортировка вызывают потерю активности фермента.

Целью изобретения является расширение сырьевой базы, увеличение выхода ферментов, входящих в комплекс и облсодающих широким спектром действия. .

Поставленная цель достигается тем что согласно способу выделения комплекса протеолетических ферментов из морепродуктов путчем гомогенизации сырья и осаждения ферментов, в качестве сырья используют пилорические придатки камбалы, а ферменты осаждают ацетоном при соотношении гомогенат: ацетон 1: (1-2,3). .

Использование в качестве сырья для .осуществления предлагаемого способа отходов морепродуктов - пилорических придатков камбалы экономически выгодно, так как оно имеется в достаточном количестве в связи с планами рыбной промышленности СССР и работой рыбкомбинатов страны.

Установлено, что выделяемый комплекс представляет собой ценный набор ферментов, в частности щелочную, нейтральную и кислую протеиназы, аминопептидазы и карбоксипептидазы.

Совокупность указанных условий позволяет получить из отходов морепродуктов по простой технологии ферментный комплекс, имеющий ценный набор ферментов, сохранивших свою нативную активность с высоким выходом.

П ри м е р 1. в качестве исходного сырья используют пилорические. придатки камбалы вида HyjSpoglosoides alassodon. 1 кг выделенных из свежей камбалы придатков гемогенизируют на микроизмельчителе тканей . РГ-2(МРТУ-42-1505-бЗ) со скоростью 5000 об/мин при 2°С до получения однородной массы.

К 1 кг охлажденного материала добавл дют два объема (2 л) ацетона, охлажденного до , при быстром перемешивании. . .

Через 15 мин полученный материал тщательно отжимают и высушивают при , удаляя следы ацетона.

Из 1 кг пилорических придатков камбалы получают 200 г препарата. Выход по казеинолитической активности - 60%.

Удельная активность, выраженная в ед/мг белка, равна: 514(субстрат БТМЭ-бензоил-Ь-тирозин метиловы эфир); 222(субстрат БЯЭЭ-бензоил-Lаргинин этилоТвый эфир); 0,76 (субстрат казеин).

При сушке протеолитическая активность ферментного препарата сохраняется полностью. Пример 2. В качест:ве сырья используют пилорические придатки камбалы вида Cleisthenes herzenstein 1 кг пилорических придатков камбалы гомогенизируют при 6000 об/мин при до получения однородной массы. . , К 1 кг охлажденного гомогената до бавляют 2,3 л охлажденного до -20 С ацетона при перемешивании. Через 20 мин осадок отжимают, а затем высушивают при 25°С, удаляя следы ацетона.. Полученный комплекс ферментов содержит щелочную, нейтральную и кислую протеиназы аминопептидазы, карбоксипептидазы. Из 1 кг пилорических придатков камбалы 210 г препарата. Выход по казеинолитической активности составляет 66%. Примерз. В качестве сырья используют пилорические придатки кам балы вида Limanda herzensteini. . 1 кг пилорических придатков камбалы гомогенизируют при 5500 об/мин при до получения однородной массы. К 1 кг охлажденного гомогената добавляют 2,0 л охлажденного до -15 С ацетона при перемешивании. Через 15 мин осадок отжимают и высушивают при 25°С. Полученный комплекс ферментов содержит щелочную, нейтральную и протеиназы, аминопе птидазы, кар-, боксипептидазы.. . Из 1 кг пилорических придатков камбалй получают 205 г препарата. Выход по казеинолитической активности составляет 65%. Проведены сравнительные испытания активности ферментного препарата, полученного из пилорических придатков камбалы, предлагаемым и известным способами. Выход препарата по общей казеинолитической активности доказан в таблице.

СПОСОБ ВЫДЕЛЕН КОМПЛЕКСА ПРОТЕОЯИТИЧЕСКИХ ФЕРМЕНТОВ ИЗ МОРЕПРОДУКТОВ путем гомогенизации сьфья и осаждения ферментов, отличающийся тем, что, с целью расшнрения сырьевой базы и повышения выхода целевого продукта, в качестве сырья использ т пилорические придатки камбалы, а осаждение ферментов ведут ацетонсм при соотношении гомогенат ацетон 1:

Из пилорических придатков камбалы (по предлагаемому спосрб 200 15200:12600 Из гепатопанкреаса кальмара и криля (по 1120 ,1575 известному способу) 28 Полученные результаты свидетельствуют о том, что из 1 кг исходного сырья (пилорические придатки камбалы) можно получить протеолитический комплекс, у которого ферментная активность на порядок выше (протеолитической - рН 7,8; 6,0; 3,0), на .несколько порядков.выше (эстёразной : химотрипсин- и трипсинподобный; пептидазных) по сравнению с известньм способом получения комплекса протеолитических ферментов. Комплекс протеолитических ферментов из пилорических придатков каМбалы содержит кромег трипсин- и химотрипсинподобных протеиназ (субстраты - казеин - рН 7,8/0,76 белка); БАЭЭ-М-бензоил-с6-аргинин-этиловый эфир (22 ед/мг белка); БТМЭ-flбензоил-оС-тйрозин-метиловый эфир (514 ед/мг белка); нейтральные проте иназы (рН 6,0), в составе которых могут проявляться трипсин и химотрип 705010794000 4662000 588000 378000 107243176 23320 8400 следы син (субстрат гемоглобин - 0,60 ед/мг белка); кислые протеиназы - субстрат гемоглобин (рН 3,0) - 0,35 ед/мг белка; инопептидазы - .субстрат лейцил-гл,ицил-глицин (23 ед/мг белка); карбоксипептидаэы - субстрат-N-Kapбобензокси-глицин-лейцин (18 ед/мг белка). Предлагаемый способ отличается простотой, он позволяет при использовании небольшого количества этапов получить протеолитический комплекс, обладаихций цённьол набором ферментов, что особенно эффективно при испольэОвании их в практике. Из 1 кг сырья получено 200 г препарата (20,6 г белка), содержащего 152000 ед. общей казеинолитической активности, а по известному способу активность составляет 1120 ед. Крометого, химотрипсин- и трипсиноподобная активность выше, чем

51030409

при известном способе получения ком- Благодаря использованию ацетона

плекса протеолитических ферментов.достигается более полное удаление

Фе{ 1енТный препарат при сушкелипидов, тем самым улучшается товарпрактически не теряет казеинолитичес-ный вид ферментного препарата,устракую-активность.,няется специфический рыбный запах.