Способ хранения культур метанокисляющих микроорганизмов Советский патент 1983 года по МПК C12N1/04 

со

00

00 05 Изобретение относится к микробиологической промышленности, а именно к спо собам хранения культур метанокисляющих микроорганизмов. Известен спрсоб хранения культур танокислягощих микроорганизмов (Предусматривающий добавление к суспензии мик роорганизмов минеральных солей и поддер жание температуры 3-1 . Используют соли, входящие в состав питательной сред в концентрациях, в 10 - 100 раз лревьпн ющихихконцентраииивисходнойсреде flj. Недостаткйми способа являются сложность, подготовки суспензии к хранению, г.ак как необходимо,взвешивать и расгво рять от 6 до 15 солей, являющихся комп . лентами известных питательных сред для метанокйсляющих микроорганизмов. Испытанный срок хранения по известному способу с .сохранением жизнес11особности клеток 1,5 года, при этом после засева культур в ферментер наблюдалась длительная (20-30 ч) лагфаза. Цель изобретения - упрощаете спосо-ба и увеличение срока сохранности метан кисляющих. микроорганизмовУказанная цель достигается тем, что в способе хранения культур меганокисляющих микроорганизмов, предусматриваю щем добавление к суспензии микроорга-.:НИ..ЗМОВ минеральных солей и.поддержание температуры 3 - , в качестве, минеральной соли нспользутот cjoibijaT аммония в количестве 3 - мае. Способ осуществляют следующим обрааом. В водную суспензию метанокисяяюших микроорганизмов, в частности таютх,. к.ак Methylococeus capsulatus, Methylosinu ,sporiumj Methylosinus trichosporium Halobacterium gasotipicum добавляют .сульфат аммония в количестве до 5 мас.%. .Сульфат аммония добавлять к суспензии в виде концентрированного рас вора таким образом, чтобы концентрация сульфата в суспензии составляла 3 - 5 мае. %. Концентрация сульфата а гмония 35 мае. % в суспензии выбрана экспериментальным путем. При содержании супъ та аммония менее 3Niac.% клетки микроор ганиэмов сохраняются в жизнеспособном состоянии не более нескольких месяцев.Рри содержании сульфата аммония более 5 мас.% . в суспензии клетки микроорганизмов хоро шо сохраняются длительное время, но . продолжительность лагфазы увеличивается до нескольких суток. Суспензию хранят при температуре 3 15 С. При добавлетши сульфата аммония в суспензию микроорганизмов происходит осаждение клеток, что позволяет после окончания хранения легко отделить клетки от культуральной жидкости, содержащей избыточное количество азота, являющегося консервантом, который может ингибировать ост клеток при засеве культуры после хранения. Культуральная жидкость, содержащая сульфат аммония, может быть использована в качестве источника азота для - роста микроорганизмов . при засеве. Пример1.В1л -суспензии: культуры метанокйсляющих микрорганизмов Methylococeus capsulatus,выращенной в непрерывном режиме со скоростью потока ,2 на минеральнойсреде любого Известного состава, добавляют 30 г сульфата аммония,этосоставляет 3мас.%сопи в суспензии, перемещивают, закрывают ватной пробкой. При добавлении сульфата аммония в суспензию микроорганизмов клетки осаждаются на дно. Смесь оставляли хранить при в. течение трех лет. Через 3 года отделяют культуру от |культуральной жидкости и в виде осадка ;засевают в ферментер для культивирования в тех же условиях, при которых она была получена ранее. Клетки начинали расти через 18 ч после засева со скоростью роста (Ц 0,2 ч . Отделенную от осадка микроорганизмов культуральную жидкость с избыточным содержанием суль фата аммония используют в качестве источника азота в процессе культивирования.. П р и м е р 2. В суспензию той же, культуры,,что и в примере 1, добавляют, сульфатаммония в количестве 4 мас.% хранят 2:,5 года при 15С. Далее способ осуществляют по примеру 1. Клетки начинают р&сти через 20 ч со скоростью роста Ш О, 2 ч. ПримерЗ.В суспензию культуры Methylosinus s рог ium добавляют сульфат аммония в количестве 5 мас.% и хранят в течение двух лет при 3 С. Далее с пособ. ocyщe 0твляют по примеру 1. Клетки начинают расти через 24 ч со скоростью И 0,2 ч . Прим 4. Для хранения уберут культуру Methylos inus trichosporium. Способ осуществляют по примеру 1 с получением аналогичных результатов. ,

3938б1в;4

Таким образом, применение описанного личений срока хранения снизить на 2Ъ% способа мегонокисляюших микроорганиэ-длигельность лагфазы, т.е. позволит со- мов позволяет увеличипь срок хранениякратить на несколько часов время от з секлеток до трех лет, т.е. в 2 раза пова культуры ио начала ее роста. Культусравнению с известным способом, и зна-. 5тральная жидкость содержащая амчительно упростить метод хранения -мония, полностью используется как ЯСточИспользование в качестве консервато- ник азота для роста микрооргвииэра сульфата аммония позволяет при уве-мрв.

СПОСОБ ХРАНЕНИЯ КУЛЬТУР МЕТАНОКИСЛЯЮЩИХ МИКРООРГАНИЗМОВ, предусматривающий добавление к cycnejHSHH микроорганизмов минеральных солей и поддержание температуры 3-15 С, отличающийся тем, что, с целью упрошетш способа и увеличения срока сохранности метанокисляксгих микроорганизмов, в качестве минерсшьной соли используют сульфат аммония в количества 3-5 мае. % от веса cjcnenзии