Способ определения активности пищевого пепсина Советский патент 1952 года по МПК G01N33/02 G01N31/10 

При определении активности иищевого иепсииа иримоняется следующий метод. В два химические стакана отмеривают по 100 мл сборного натурального молока, которое подогревают до 35°. В первый стакан с подогретым молоком вливают 1 мл 1%-ного раствора испытуемого порошкообразного иеисипа, а во второй- 1г 1%-иого раствора эталона (сычужного фермеита). По секундомеру отмечают начало свертывания моло ка в каждом стакане. Активность пепсина вычисляют по известпоГг формуле.

Недостатком этого метода является то, что примененпе в качестве среды для свертывания натурального молока, химический состав которого является очень изменчивым, дает неодинаковые показатели активности пепсина для одной и той же партии при проверке в разных местах или даже в одном месте на разном молоке. Это приводит к невозможности унифицировать оценку качества выиускаемого разными предприятиями пепсина.

Описываемый способ отличается тем, что натуральное молоко, как среду для. свертывания пепсипа, заменяют искусственным молоком, изготовленным путем растворения сухого казеииа в растворе гидрата окиси кальция (известковой воде). Активность исследуемого nencinia определяется по специально разработанной шкале.

Способ определения активности пищевого пепсппа состоит из: а) приготовления искусствепного молока; б) проверки ircKyccTueimoj-o молока на створаживание сычужным ферментом; в) опреде.ченпя активности пищевого пепсина.

Способ осуп1ествляется следуюп1,им образом.

Приготовление искусственного молока. Готовят 10%-пый раствор окиси кальция (известковой воды), который выдерживают не isenee 24 час. Раствор гидрата окиси кальция можно хранить в течение годи в герметически закрытом сосуде. Перед употреблением раствор гидрата окиси кальция фильтруют через плотную фильтровальную бумагу.

:Vo 94014- 2 Казеин растирают н ступке, просеивают через марлю, после чего отвешивают 15 г и растворяют в 400 мл профильтрованного 10%-1юго растпора гидрата окиси кальция- Растворение казенна нроводят в течение 24 час. г. колбе, закрытой резнновон нлн корковой пробкой. В течение иерв,ых H-iecTH часо1 растворение ведут нрн нагреваннн, для чего, колбу ста1,ят в термостат, иред арнтельно нагретый до 30°.

Г1рп, температуре 30 выдерживают два часа. Затем ностененно ио,1 Ы1иают темиературу до 50. Для лучшего растворения через каждые 30 мин. иеремеиимииот и растирают 1;азенн в колбе стеклянной иалочjvoii с )ези 1овым наконечником. После шестнчасового растворения при темиературе казеин в известковой воде выдерживают нрн |;()миатиой темиературе еще 18 час., а затем нроводят фильтрацию через ч(тыре слоя марли.

Г1олученн1 1и фильтрат является искусственным молоком, который нсиользуют для анализа ниничюго непсина в течение 24 часов с момента изготовления его.

(лхчержаине окисн кальция в нем должно находиться в нределах 0,0()fi i),6l г.

Проверка искусственного молока иа створаживание сычужным ферментом. Правильность нриготовлення искусственного молока ироверяют но () способности створа/кнваться от сычужного фермента.

Для нроверки готовят раствор сычужного фермента следуюнцхм оо)азом: 0.25 г сычужного ферлгента актитпюстью 85 нлн, 100 тыс. ед. растворяют п 100 мл дистиллированной воды и выдерживают 15 - 20мик. в водяной баие ири темнературе 35°. Приготовленный раствор сычужного фермента переносят в бюретку на 25 миллиметров, капилляр которой подбирают с таким расчетом, чтобы три кайли составляли 0,1 деления бюретки и скорость иадення каилн равнялась одной кайли в секуиду.

. Перед нроверко на створаживание к искусственному молоку осторожно, каплями (ирн ностоянном перемешивании, во нзбежанне выпадения хлопьев казеина), прибав.тгяют 0,1 N раствор соляной кислоты до получения ;ислотности молока, равной 6-9,5° Т- Обычно на 200 мл, молока требуется 18-26,5 мл кнслоты. Кислотность молока в отдельных пробах онределяют титрованием его 0,1 N раствором NaOH. Молоко с требуемой кис,лотностью наливают в две пробирки по 10 мл и иоме1цают 1 водяную баню с температурой до 40°, где пробирки дол/кны находиться па протяжении всего анализа.

Из бюреткн, занолненной доверху раствором сычужного фермента, наливают в одну нробирку с молоком 3 кайли, через 15 сек. во вторую пробирку 4-канли раствора сычужного фермента. После ирнбавления фермента содержимое пробирок тн1,атольно перемешивают и по секундомеру засекают время с момепта внесения в первую пробирку последней каилн сычужного раствора.

По истечении 4 мин. молоко проверяют на створаживаемость. Если оно свернулось во второй пробирке от четырех капель в интервале между четвертой минутой и десятой секундой нятой минуты, а в нервой пробирке, от трех канель-iro истеченнн пяти минут, то искусственное молоко считают приготовленным нравильно и его нспользуют для определения активности нищевого ненсина.

Если молоко в первой пробирке свернулось раньше нятой минуты, то такое молоко следует считать непригодным для определения активности нин1,евого иенснна вследствие новышенной кислотности его.

В атом случае необходимо взять новую порцию молока, нодкислип его меньшим количеством кнслоты.

Если же во второй ироблркс молоко ие снернулось к указаниоо время, то к молоку слодзет лрпбавпть кислоты. Добавлсмию кислоты ле должно превышать кпслоттюстл молока, i)aBHoii 9,5° 1.

В том случае, Koi7i,a сычужный фермсм1т нмеет активность 100 тыс. ед., то проверку створажпнаемостн молока осуществляют с.иедующп.м образом: в одну пробирку с нагретым молоком наливают 2 капли, в другую через 15 сек.-3 каплп раствора сычу/киого фермента.

Еслн молоко свернулось в пробирке от трех капель в интервале мсНчДу четвертой минутой и десятой секундой пятой минуты, а в нробирко. от двух капель-по истечеппи пяти мппут, то молоко счптают прпготовленным правильноОпределение активности пищевого иепспиа. llnnuBoii пепсин, подлежащий нснытанпю, растирают в стунке, после чего отвещпвают 0,25 г и переносят в колбу емкостью на 100 мл. в которую наливают 70 мл дистиллированной воды и перелгеиптвают. loc;ie этого ко.чбу ногружают в водяную баню с темиературо 40°, где )ыдержмвают 20-30 лии. ирп периодическом неремешиванни.

По окончанпн Harpeiiainut раствор пепсина ох.маждают п доводят дистиллированной водой до метки, тп aтeльпo встряхивают и фильтруют через плотпый бумажпыт ф гльтр.

В 9 пробирок наливают по 10 мл пскусствепиого молока, подкисленного II проверенного па створажи1 ап1ге сычужпым ферментом.

Из бюреткн в каждую пробпрку иаливают раствор исиытуемого нпщевого ненсина в следуюн(ем норядке: в зпрвую пробпрку налпвают одну каплю, после этого содержимое пробпркп тгеремепигпают п по С(кундомеру засекают время.

Через 15 сек. налтпшют пз бшрет1л1Г lio вторую пробирку две каплГ раствора пепсина, через следующие 15 сек. наливают is третью пробпрку три каплп раствора п так включительпо до девятой пробиркиНа иротяженнп всего апализа, как п в случае проверки мо.юка иа створаживаемость, все пробирки выдержп1 ают в 1юдяног1 бане npir темнературе 40°.

По пртеченин 4 мпп. после добавлеппя раст1юра пепсина к первую нробирку производят просмотр всех пробирок для определения образования хлопьев створажнваемости нутем легкого 1 стряхивапия.

Просмотр пробирок начинают с первой пробиркп, через 15 сек. просматривают вторую нробпрку. затем через 15 сек. третью пробирку и т. дОтмечают номер пробирки, в которой образовались хлопья в интервале между четвертой мииутой н десятой секундой пятой минуты, и по следующей таблице устанавливают актпвность испытуемого пенсина.

Шкала для перевода номеров пробнрок на актпвностн ннщевого

1

пепсина.

№ 94614- 4 -

Предмет изобретения

1.Способ определения актлиности пип евого пепсина путем фиксации начала свертывания казеина под де11ствием испытуемого ненсина о т л и ч а ю UJ, и и с я тем, что, к целях достижеиия большей точности-определения, в качестве среды для свертынания нрименяют вместо натурального молока нодкисленгпли jxacTiiop cyxoio казеина i гидрате окиси кальция.

2.Прием Быиолиеппя способа по i. 1, о т :i п ч а ю щ ни ся тем, что нриготов:геиный раствор сухого казеина в гидрате окиси ivajibii,jm разливают в 9 пробирок, в которые при температуре 40° добавляют исиытуемый иепсип, иостеиеинно увелпчи шя его количество li каждой иробирко от одной до девяти капель и ио порядковому номеру дфобнрки, где произошло свертыванне искусственного молока, в зависимости от количества прибавленных канель ио сиециально разработанной ишале определяют активность пепсина в ирииятых единицах.