СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА ПЕПСИНА Советский патент 1968 года по МПК C12Q1/38 

Известен способ определения количества пепсина в препаратах, его содержащих, согласно которому готовят раствор эталона и раствор испытуемого препарата и этими растворами (порознь) воздействуют на пробу молока, предварительно стабилизированную ацетатным буфером (водным раствором смеси ледяной уксусной кислоты и едкого натра), замеряя при этом продолжительность свертывания молока и определяя расчетным путем количества фермента (в условных единицах).

Для определения количества пепсина в весовых единицах и упрощения способа раствор испытуемого препарата и раствор эталона перед воздействием на пробу молока стабилизируют ацетатным буфером, при этом в раствор эталона одновременно со стабилизатором вводят глицерин. В качестве раствора эталона следует использовать раствор аморфного пепсина.

Способ состоит в следующем.

Готовят ацетатный буфер из 92 г ледяной уксусной кислоты и 45 г едкого натра, для чего их растворяют в дистиллированной воде, доводя общий объем до 1000 мл. Хранят приготовленный раствор в закрытом виде. Затем из 20 мг чистого аморфного пепсина, который помещают в 200 мл колбу, приготовляют раствор. Для этого приливают 50 мл ацетатного буфера и 50 мл дистиллированной воды. Растворяют пепсин, приливают 80 мл глицерина, размещивают и доводят до метки дистиллированной водой. В 1 мл приготовленного раствора содержится 0,1 мг чистого свиного пепсина. Раствор эталона стоек при хранении в темноте и на холоде.

Готовят молочно-ацетатную смесь, т. е. пробу свежего коровьего молока, которую смешивают пополам с ацетатным буфером (рН не должен быть ниже 5) и ставят на хо- лод. После отстоя сливок смесь сливают сифоном. Срок хранения этой смеси на холоде около двух недель. Затем приготавливают раствор испытуемого препарата.

В зависимости от вида препарата пепсина (сывороточного, пищевого или медицинского) меняется методика приготовления раствора. Так, препарат сывороточного пепсина отвешивают в количестве 1 г, растворяют в колбе литрового объема, приливая в нее 100 мл ацетатного буфера, после чего дистиллированной водой объем содержимого доводят до метки.

Концентрация приготовленного раствора составляет 0,1 %.

Приготовление раствора препаратов пищевого пепсина и медицинского отличается дозировкой этих препаратов, соответственно составляющей 2 г и 5 г, что в свою очередь обеспечивает получение растворов 0,2 и 0,5%ной концентрации.

От растворов эталона и испытуемого препарата отливают в пробирки по 0,1 мл, причем температура растворов должна быть равна 25°С. В другие пробирки наливают по о мл молочно-ацетатной смеси. Затем раствор эталона и раствор испытуемого препарата порознь приливают в пробирки с молочной смесью. Замечают время начала испытания и время появления на стенках пробирок едва заметных хлопьев казеина. Продолжительность свертывания молока в параллельных определениях может отличаться на 2-3 сек. Затем расчетным путем определяют содержание пеисина в испытуемом препарате.

Для этого полученные данные подставляют в формулу

Ya.

Х b

где X - количество пепсина в 1 мл испытуемого раствора, в мг;

У - количество пепсина в растворе эталона в мг;

а - продолжительность створаживания

молока под действием эталона в сек;

b - продолжительность створаживания

молока под действием испытуемого

раствора в сек.

Пример 1. Анализировали препарат сывороточного пепсина. При этом получили а - 70 сек, b - 88 сек. Если У 0,1%, то

А 0,0795 мг/мл. 88

Так как готовили 0,1%-ный испытуемый раствор, то содержание пепсина в сухом препарате составляет 7,95%.

Пример 2. Анализировали препарат медицинского пепсина. Полученные данные составили а - 70 сек, b - 140 сек; так как У 0,1%, то

А:

: : 0,05 мг/мл . 140

Содержание пепсина в сухом препарате (был приготовлен 0,5%-ный раствор) равно 1%.

Предмет изобретения

1.Способ определения количества пепсина в препаратах его содержащих путем раздельного воздействия раствора эталона и раствора испытуемого препарата на пробу молока,

стабилизированного ацетатным буфером (водным раствором смеси ледяной уксусной кислоты и едкого натра), с последующим замером продолжительности свертывания молока и расчетом количества пепсина, отличающийся тем, что, с целью определения количества пепсина в весовых единицах (миллиграммах) и упрощения способа, раствор испытуемого препарата и раствор эталона перед воздействием на пробу молока стабилизируют ацетатным буфером, при этом в раствор эталона одновременно со стабилизатором вводят глицерин.

2.Способ по п. 1, отличающийся тем, что, в качестве раствора эталона используют раствор аморфного пепсина.