на с последующим расчетом активности по математической формуле. При этом в качестве субстрата используют молочно-ацетатную смесь.
Активность определяют в абсолютных единицах чистого фермента по формуле
Zl 7,
А К
где Ki -к Kz - коэффициенты;
К.1 10 для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина;
5 для активности пищевого говяжьего пепсина поря1дка 100000 у. е.;
Г - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором эталона в 1 сек; Гз - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором испытуемого пепсина в 1 сек.
Выполнение предложенного способа ил люстрируется следующим примером.
На аналитических весах отвешивают 0,5 г чистого неразбавленного пепсина и 1 г (порядка 100000 у. е.) разбавленного пищевого говяжьего пепсина и растворяют их порознь в 500 жл 0,05 н. соляной кислоты. В течение дня активность приготовленных растворов не меняется.
Раствор эталона пепсина готовят с таким расчетом, чтобы в 1 мл раствора содержалось 0,1 мг чистого 100%-ного свиного пепсина, преимущественно Олайненского химзавода.
Эталон свиного пепсина раствор51ют в 0,1 М ацетатном буфере, который состоит из 45 г гидроокиси натрия н 92 г ледяной уксусной кислоты, растворенных в I л дистиллированной воды и имеет рН от 5,00 до 5,1.
После этого приготавливают молочноацетатную смесь. Для этого смешивают равные объемы свежего молока и 1 М ацетатного буфера. Молоко можно брать пастеризованное или сырое.
Приготовленную мелочно - ацетатную смесь разливают по 50 мл в химические стаканы емкостью 100 мл и ставят в водяную баню, температура в которой поддерживается в течение всего времени проведения анализа строго постоянной и составляет 25° С.
Примерно через 40 мин температура молочно-ацетатиой смеси в стаканчиках повыщается (до 25° С, и можно приступать к створаживанию. Для этого в один стакан с молочно-ацетатной смесью вносят пипеткой I мл раствора эталона пепсина, одновременно включая секундомер, и быстро перемешивают. Затем шпателем или пипеткой поднимают смесь по стенке стакана. По появлении хлопьев казеина молока секундомер останавливают, отмечая время свертывания в секундах.
Проводят 2-3 определения и берут среднее значение. Приготовленным раствором эталона можно пользоваться в течение двух-трех суток.
Точно таким же образом определяют время свертывания той же молочно-ацетатиой смеси раствором испытуемого пепсина. Актвиность пепсина определяют в абсолютных единицах чистого фермента по формуле
Т
- к- J 1
А К
Т,
где /Ci 10 для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина;
К2 5 для активности пищевого говяжьего пепсина порядка 100000 у. е.;
Г - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором эталона в 1 сек; TZ - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором испытуемого пепсина в 1 сек.
Пример расчета 1. Для неразбавленного пищевого говяжьего пепсина Ti 70
70 сек. Т2 140 сек. Активность ЮХттгГ %Пример расчета 2. Для разбавленного (порядка 100000 у. е.) пищевого говяжьего пепсина TI 72 сек; Т 180 сек. 5 X 72
Активность 2%.
loU
Изобретение позволяет повысить точпость определения и сократить время анализа.
Таким образом, экономическая эффективность изобретения состоит в предотвращении брака при производстве сыров и более экономном расходовании применяемого в промыщленности ферментного препарата - пищевого пепсина.
Формула изобретения
Способ определения активности пищевого говяжьего пепсина, предусматривающий растворение навески эталона фермента и испытуемого препарата в растворе соляной киcлofы, юпределение скорости створаживания субстрата испытуемым раствором и раствором эталона с последующим расчетом активности по математической формуле, отличающийся тем, что, с целью ускорения проведения анализа и повышения его точности, в качестве субстрата используют молочно-ацетатную смесь, а активность определяют в абсолютных единицах чистого фермента по формуле
Т
А к4, 11
где -./Ci и 2 - коэффициенты;
/Ci 10 для неразбавленного пищевб65 го говяжьего пепсина; 5 2 5 для активности пищевого говяжьего пепсина П|0ря дка 100000 у. е.; TI - время свертывания молочно-ацетатной смеси раствором эталона в 1 сек; Га -время свертывания молочно-аце-5 татной смеси раствором испытуемого пепсина в 1 сек 6 Источники информации, принятые во внимание при экспертизе: 1. ОСТ 49-53-73 «Пепсин пищевой свиной. 2. Авторское свидетельство СССР № 296553, кл. А 23 С 7/00, 1968.
