Фторированные аналоги простациклина,проявляющие антиагрегационную активность и способ их получения Советский патент 1983 года по МПК A61K31/5575 A61P7/02 

Изобретение относится к области химии и медицины и может найти применение в проведении эксперименталь ных медико-биологических исследований и в лабораторной практике. Известен природный простациклин мощный ингибитор агрегации тромбоцитов С 1 Однако обладая высокой биологической активностью, он быстро разрушается при комнатной температуре и при физиологических значениях рН Целью изобретения является разр ботка способа получения фторирован ных аналогов простациклина общей химической формулы ,соох где X - щелочной металл, например натрий или калий, проявляющие антиа грегационную активность. Способ получения фторированных аналогов простациклина отличается тем, что растворяют метиловый эфир 15-фтор-15 дезокси-5-йодпростагландина I- в органическом растворителе менее полярном, чем спирт, прибавля к раствору алкоголят натрия или калия, полученную смесь нагревают при температуре 70-75°С в течение kS-3Q мин, непосредственно обрабатывают смесь 0,01 М гидроокисью щелочного металла в течение 90120 мин. Полученные соединения ингибируют агрегацию тромбоцитов в тех же концентрациях, что и природный простациклин. Однако в отличие от последн го они в раз более устойчивы при длительном хранении при 3 С. Пример. Синтез натриевой соли 15-фторпростациклина (1,Х Na ). Смесь 3 мг 15-фтор-5-йод-6,9 4)С) -эпокси-11 (ft )-окс 1Простен-13овой кислоты, 0,15 мл диоксана, 0,3 мл метанола и 0,075 мл метаноль ного раствора метилата натрия {25 мг/мл )инкубируют 1 ч при 75°С в запаянной ампуле. Дмпулу охлаждают, вскрывают, добавляют к содержиЭ2 . мому 0,1 мл 0,01 М NaOH в , снова запаивают и инкубируют 1,5 ч при 75 С. Реакционную смесь упаривают досуха в вакууме при комнатной температуре, остаток растворяют в 0,5 мл диметилсульфоксида и используют для исследования действия 15-фторпростациклина (1, X Na ) на агрегацию тромбоцитов. Указанная форма 15-фторпростациклина содержит некоторое количество гидроокиси щелочного металла (Na ), стабилизирующее .кислотолабиль-ный фторпростациклин (1, X Na). По данным тонкослойной хроматографии в системе, исключающей распад простациклина во время хроматографии (хлороформметанол- 2, 5 н. водный раствор аммиака 5:1:0(1). 15 фторпростациклин (1 , X Na ) практически не содержит продуктов распада, R- 15-фторпростациклина (Х Na ) 0,3. Для определения выхода целевого продукта, а именно натриевой соЛи, 15 фтор-15-дезокси простагландина 12 используют реакцию превращения простациклина в более стабильнь 6-кетОпростагландин fv/. После проведения описанных выше реакций с 3 мг 15-фтор-5-йод-6,9 W)-эпокси-11 ( /i ) -оксипростен-13-овой кислоты сухой остаток после удаления растворителей растворяют в 0,5 мл 0,2 М буфера Трис-HCIJ, рН 5,0, выдерживают 30 мин при комнатной температуре и экстрагируют эфиром (З 15 мл). Эфирный экстракт упаривают досуха, остаток растворяют в эфире, фильтруют и упаривают досуха. Получают 2,2 мг (98) 15-фтс р-15-дезокси-6-кетопростагландина ( 0,13, система: хлороформ-метанол-2, 5 н. водный раствор аммиака: 5:1-0,1 ). Масс спектр трис-триметилсилильного производного, (е относительная интенсивность, I), 588 (0,1)(М ), 573 10,2) (MtCHj), 56В (0,1) (), 523 (0,2), 517 (1,5) (M- -CjHi), (1) М -ТМС-НГ), 83 (1) (М -ОТМС-СНз), (2), (2 ) (М-«--СэН сГ), k27 (3 J, (6), 382 (5), З (6), 339 (5 ). 329 (i . 328 (б ). 327 (i«), 3U (6;, 313 (1U (М -ОТМС-НОТМС-ТМС-НГ), 279 (22), 265 (19 К 199 (6 ), 132 (1А), 165 (17) 139 (100). Для сравнения антиагрегационного. действия 15-фторпростациклинов (Г, где X принимает указанные выше эГначения ) и природного простациклина раствор последнего в диметилсульфоксиде получают по описанной выше 1етодике из 3 мг метилового эфира 5-йод-6,9(о 1-эпокси-М (, 15(5)-диоксипростен-13 овой кислоты. П р и м е р 2 , Антиагрёгационно действие натриевой соли 15-фторпростациклина (1, X Na ). К 0,9 мл обогащенной тромбоцитам плазмы, содержащей 200-250 тыс, тромбоцитов, добавляют 0,1 мл раств ра 15-фторпростациклина (1, X Na I в диметилсульфиде. После 10-минутно инкубации измеряют агрегацию кровяных пластинок, вызванную АДФ в конечной концентрации 0,2 . Агрегацию определяют по методу на установке, состоящей из фото , электроколориметра 1)ЭК-5бМг. и cai ioпишущего потенциометра КСП-. 8 исходном состоянии агрегация тромбоцитов составляет При добавлении 10 мкг/мл 15-фторпростациклина (1, X Na) -9 + 1%, 1 мкг/ -10 + U, 0,1 мкг/мл -10 + 0,01 мкг/ -30 + 3. При добавлении в кювету фотоэлектроколориметра 10 мкг/мл простациклина агрегация составляет -5 + U, 1 мкг/мл - 8 + U, 0,1 мкг/мл - 9 + U, 0,01 мкг/мл-29+3%. Через 1,5 мес. после опыта проводят повторное исследование антиагрегационной активности данных образцов простациклина и,15-фторпростациклина, хранившихся в растворе в диметил сульфоксиде при с. При анализе действия простациклина отмечена полная потеря антиагрегационной акти ности. В концентрации 10 мкг/мл агрегация составляет 50+5%, 1 мкг/мл - 53+5%. Между тем 15,-фторпростациклин (l, X Ni) по-пре ;;нему проявляет антиагрегачионное действие. В концентрации 10,1 мкг/м он снижает антиагрегацйонную способ ность тромбоцитов до 10 + 1%, в кон центрации 0,01 мкг/мл - до 30 + 1%. Таким образом, простациклин и 15-фторпростациклин (1, X Ма ) лро Бляют одинаковую силу антиагрегайо н но го действия, но в отличие от ростациклина 15-фторпростациклин , X Na ) сохраняет свою высокую нтиагрегацйонную активность при длиельном хранении в растворе в диметилульфоксиде, стабилизированном гидрокисью щелочного металла (натрия). П р и м е р 3 . Влияние натриевой соли 15-фторпростациклина на концентрацию тромбоцитов при получении тромбоплазмы. В 0,4 мл 3,8%-ного раствора цитрата натрия добавляют 0,1 мл раствора, содержащего 100 мкг 15-фторпростациклина, и набирают кровь да 5 мл. Пробу центрифугируют со скоростью 1000 об./мин. Получают обогащенную тромбоцитами плазму с числом кровяных пластинок ЗбОООО на 1 мм. В контрольной пробе, где вместо раствора фторпростациклина добавляли физиологический раствор, концентрация тромбоцитов составила 250 000 на 1 мм . Таким образом, заявляемое вещество повышает выход тромбоцитов из крови, что может найти применение для получения тромбоплазмы. П р и м е р . Влияние 15-фторпростациклина на агрегацию тромбоцитов в условиях организма. 5 мл тромбоплазмы, содержащей 100 мкг 15-фторпростациклина, вводят внутривенно кролику весом 2 кг. В исходном состоянии агрегация составляет 50 + 5%, через 10 мин после трансфузии агрегация составляет 55 + 5%. Таким образом, 15-фторпростациклин не оказывает антиагрегационного действия в условиях организма. Заявляемое вещество может быть использовано для консервирования тромбоплазмы, что 15-фторпростациклин и его производные могут найти применение для стабилизации обогащенной тромбоцитами плазмы в экспериментальной гематологии, онко-, логии, радиологии ц др.

1. Фторированные аналоги простациклина общей формулы С00Х