СПОСОБ ПОДБОРА АНТИБИОТИКОВ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ БОЛЬНЫХ ОРТОПЕДО-ТРАВМОТОЛОГИЧЕСКОГО ПРОФИЛЯ Российский патент 2004 года по МПК G01N33/48 G01N33/50 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, а конкретнее к ортопедии, травматологии, лабораторной диагностике, и касается профилактики послеоперационных осложнений.

Известен способ лечения гнойной инфекции путем сокращения сроков лечения иммунодефицитных состояний, когда лекарство назначают по результатам лабораторного тестирования, для чего в пробирочной пробе с лекарствами определяют процент Тт-Е-РОК (А.с. N 1673122, МКИ 5 А 61 К 35/26, Б.И. №32, 1992, стр.61).

Наиболее близким к предложенному решению является способ подбора антибиотиков при лечении больных с гнойной инфекцией (А.с. №951786, МКИ А 61 В 10/00, Б.И. 38, 1983), заключающийся в том, что с целью выбора эффективной дозы антибиотика после инкубирования крови с антибиотиками выделяют лимфоциты, инкубируют их с эритроцитами барана, подсчитывают число Т-розеткообразующих лимфоцитов и для лечения отбирают антибиотик, под действием которого образуется максимальное число Т-розеткообразующих лимфоцитов.

Известный способ позволяет выбрать оптимальную дозу антибиотика для лечения больных, однако он не учитывает особенности течения травматической болезни и не может обеспечить индивидуальный подбор антибиотика и его оптимальную дозу пациентам травматологического и ортопедического профиля. При случайной и ятрогенной травме организм пострадавшего испытывает сильнейший болевой и эмоциональный стресс, нарушается гомеостаз, в том числе и иммунологический. Как следствие, в посттравматическом периоде развивается антигенно-стрессорная реакция, когда на фоне нарушения целостности органов и тканей в кровотоке появляются аутоантигены, отмечается сенсибилизация к лекарствам.

Следовательно, известный способ недостаточно точен при лечении больных с травмами.

Задача изобретения - повышение точности в выборе антибиотика и исключение развития аллергической реакции при лечении больных ортопедо-травматологического профиля.

Поставленная задача решается тем, что согласно способу подбора антибиотиков для лечения больных проводят инкубирование крови с разведениями различных антибиотиков, выделяют лимфоциты, инкубируют их с эритроцитами барана и подсчитывают число Т-розеткообразующих лимфоцитов, с выбором антибиотика, под действием которого образуется максимальное число Т-розеткообразующих лимфоцитов, дополнительно определяют сенсибилизацию тестами Е-розеткообразования, дегрануляции и специфического лизиса лейкоцитов периферической крови и из выбранных антибиотиков назначают антибиотик, к которому сенсибилизация не выявлена.

Анализ новизны.

1. Из числа антибиотиков, давших максимальное число Т-розеткообразующих лимфоцитов, для лечения выбирают тот антибиотик, к которому сенсибилизация не выявлена.

2. Сенсибилизация определяется по тестам:

- Е-розеткообразования;

- дегрануляции полиморфноядерных лейкоцитов;

- специфического лизиса лейкоцитов.

Проверка заявленного технического решения на соответствие его критерию "существенные отличия" показала, что ни в научной, ни в патентной литературе не выявлено совокупности признаков, указанных в формуле изобретения.

Способ осуществляется следующим образом.

У пациента из локтевой вены сухой иглой для инъекций в пробирку с раствором гепарина (200 ед/мл) берут кровь в количестве, необходимом для исследования, и осторожно перемешивают. Гепаринизированную кровь по 0,5 мл разливают в пробирки (количество пробирок зависит от количества исследуемых антибактериальных препаратов и вариантов их дозировок плюс одна контрольная пробирка - фоновое исследование). В контрольную пробирку с кровью добавляют 0,5 мл физиологического раствора, в остальные - по 0,5 мл разведений антибиотиков в физиологическом растворе. Исследуемые антибиотики берут в минимальных и максимальных терапевтических дозах в расчете на объем крови, взятой для исследования (в нашем случае на 0,5 мл крови). Содержимое каждой пробирки тщательно перемешивают, затем инкубируют 45 минут при 37 градусах. После инкубации учитывают результат реакции специфического лейкоцитолизиса: в камере Горяева (в 25 больших квадратах) подсчитывают количество лейкоцитов в контрольной и в каждой опытной пробирке. Реакция лейкоцитолизиса считается положительной при лизисе более 10% лейкоцитов в опыте относительно контрольной пробы (фонового значения). В таблице 1 приведены результаты лабораторных исследований крови больного с целью индивидуального выбора антибиотика. Из таблицы 1 следует, что сенсибилизация по реакции специфического лейкоцитолизиса выявлена на гентамицин (колонки 4, 5, строка 3).

Затем выделяют лимфоциты на градиенте плотности, осторожно наслоив содержимое пробирок на равный с объемом пробы объем верографина плотностью 1,077 г/мл. Пробирки центрифугируют 35 минут при 1500 об/мин. Осторожно отсасывают интерфазное кольцо лимфоцитов. Из клеточной взвеси на предметном стекле делают мазки. Мазки фиксируют, окрашивают по Романовскому и оценивавают сенсибилизацию организма по изменению плотности нейтрофилов в реакции дегрануляции нейтрофилов. Для этого в мазке подсчитывают количество полиморфноядерннх лейкоцитов на 300 учтеных клеток. Реакция считается положительной при увеличении относительного содержания гранулоцитов в опытной пробе более чем на 50% по сравнению с контрольной. Из таблицы 1 следует, что сенсибилизация по реакции дегрануляции полиморфноядерных нейтрофилов выявлена на пенициллин (колонки 8, 9, строка 2).

Лимфоциты (клетки интерфазного кольца) дважды отмывают физиологическим раствором, осадок ресуспендируют и в каждую пробирку вносят равный объем 1% взвеси эритроцитов барана.

Смесь инкубируют при температуре 37 градусов 10 минут, после чего пробы центрифугируют 5 минут при 1000 об/минуту и помещают в холодильник (температура +4 градуса) на 80 минут. В нативном препарате подсчитывают количество Т-розеткообразующих лимфоцитов на 100 учтеных клеток и результат выражают в %. За розеткообразующую считают клетку, к которой прикрепилось 3 и более эритроцита барана. Из таблицы 1 следует, что стимулирующим действием обладают несколько антибиотиков: ампициллин, пенициллин, гентамицин (колонка 3, строки 1, 2, 3). Наибольший процент стимуляции наблюдается на пенициллин (колонка 3, строка 2), поэтому для лечения больному следует рекомендовать именно пенициллин (по способу-прототипу).

Для реакции Е-розеткообразования наслаивают 1,0 мл гепаринизированной крови на 1,0 мл верографина (плотность 1,077 г/мл). Пробирку центрифугируют 35 минут при 1500 об/мин. Клетки интерфазного кольца дважды отмывают физиологическим раствором. Суспензию лимфоцитов разливают в пробирки (количество пробирок равно числу исследуемых антибиотиков плюс одна контрольная пробирка), разведения антибиотиков добавляют в соотношении 1:1, в контрольную пробирку добавляют физиологический раствор. Взвесь инкубируют в термостате при 37 градусах 30 минут, затем, добавив в каждую пробирку по 3 капли 1% взвеси эритроцитов барана, пробирки выдерживают в холодильнике при 4 градусах 18 часов. В нативном препарате подсчитывают процент лимфоцитов, образовавших розетки. Реакция считается положительной при отличии значения Е-розеткообразующих клеток в пробе на 9% более или менее относительно контроля. Из таблицы 1 следует, что в реакции Е-розеткообразования выявлена сенсибилизация на пенициллин (колонки 6, 7, строка 2).

Таким образом, после проведения реакции Т-розеткообразования по способу-прототипу выбрано 3 антибиотика (таблица 1, колонка 3, строки 1, 2, 3), из которых реакции сенсибилизации дали 2 антибиотика (таблица 1, колонки 4, 5, строка 3 и колонки 6, 7, 8, 9, строка 2). В результате для лечения может быть назначен только один антибиотик (таблица 1, строка 1). При этом оказалось, что оптимальным для этого больного является один из рекомендованных по способу-прототипу антибиотик, давший не самое большое число Т-розеткообразующих лимфоцитов.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Больной Т., 33 года, № и.б. 271455, поступил отделение ортопедии ОКОХБВЛ с диагнозом: дефект проксимальных отделов обоих бедер.

Больному 7 лет назад был диагностирован асептический некроз головок бедренных костей, двусторонний коксартроз III степени. Через 3 года после постановки диагноза произведено тотальное эндопротезирование правого, а через 5 месяцев и левого тазобедренного сустава. Послеоперационный период протекал гладко. Однако через год больной оперирован в отделении раневой инфекции по поводу поздних гнойных осложнений. Эндопротезы удалены. Диагностирован остеомиелит проксимальных отделов обоих бедер.

На клиническом разборе больному запланирована реконструктивная операция на левом бедре.

В предоперационном периоде больному проведено традиционное клиническое, рентгенологическое и лабораторное обследование.

Учитывая данные анамнеза, высокий риск послеоперационных осложнений, дополнительно проведен подбор антибиотиков лабораторными методами. Результаты подбора приведены в таблице 2.

Из данных таблицы 2 видно, что высокая стимуляция отмечается на гентамицин в дозе 0,016 мг и линкомицин в дозах 0,18 мг и 0,24 мг (колонка 4, строки 3, 5, 6). По способу-прототипу лучший лечебный эффект возможен при использовании линкомицина в дозе 0,24 мг (колонка 4, строка 6).

Однако после исследования сенсибилизации выяснили, что единственным антибиотиком, который можно рекомендовать для лечения, является гентамицин в дозе 0,016 мг, т.к. он обладает достаточным стимулирующим эффектом (колонка 4, строка 3), и к нему не выявлена сенсибилизация (колонки 5, 6, 7, строка 3). После пересчета эффективной дозы гентамицина на средний объем крови взрослого человека в послеоперационном периоде больному назначен гентамицин по 80 мг 2 раза в сутки.

Послеоперационный период протекал гладко.

Пример 2. Больная Т., 41 год, № и.б. 271801, находилась в отделении ортопедии ОКОХБВЛ. Неоднократно оперирована по поводу тяжелой открытой травмы нижней конечности. Получала стандартное антибактериальное лечение.

Однако у больной в следствии некроза мягких тканей образовалась длительно не заживающая рана с отечными краями, вялыми грануляциями и с серозным отделяемым. На клиническом разборе решено провести индивидуальный подбор антибиотиков.

Проведено исследование крови больной в реакциях Т-розеткообразования, специфического лейкоцитолизиса, дегрануляции и E-розеткообразования с гентамицином. Этот антибиотик больная получала с интервалом в 2 недели по 80 мг 3 раза в сутки 10 дней и по 80 мг 2 раза в сутки 7 дней.

Результаты лабораторных исследований приведены в таблице 3.

Из данных таблицы 3 (колонка 4, строки 1, 2) следует, что нет стимуляции Т-розеткообразования при инкубации крови больной с гентамицином в дозах 0,016 мг и 0,024 мг на 0,5 мл крови (что в пересчете на объем крови взрослого человека составляет по 80 мг 2 раза в сутки и по 80 мг 3 раза в сутки). Результаты лабораторных исследований, приведенные в колонке 6, строки 1, 2, свидетельствуют о наличии сенсибилизации к гентамицину, т.к. в реакции Е-розеткообразования фоновые значения существенно (более чем на 9%) различаются с результатами, полученными при исследовании крови больной с разведениями гентамицина.

По результатам бактериологических исследований госпитальной микрофлоры ОКОХБВЛ было рекомендовано для индивидуального подбора антибиотиков использовать пенициллин, линкомицин, оксациллин. Сведения о результатах лабораторных тестирований приведены в таблице 3.1.

Из данных таблицы 3.1 (колонка 4, строки 1, 2, 3) видно, что высокая стимуляция отмечается на пенициллин в дозах 400 ЕД и 600 ЕД (54% и 50% соответственно относительно 36% в контрольной пробе) и на линкомицин в дозе 0,18 мг (62%) и 0,24 мг (44%). Следовательно, по способу-прототипу лучший лечебный эффект будет при лечении линкомицином в дозе 0,18 мг.

После определения сенсибилизации выяснили, что единственным антибиотиком, который можно рекомендовать для лечения этой больной, является пенициллин в дозе 400 ЕД.

Пенициллин в этой дозе обладает достаточным стимулирующим эффектом (54% против 36% в контроле) и к нему не выявлена сенсибилизация в тестах специфического лейкоцитолизиса (колонка 5, строка 1), Е-розеткообразования (колонка 6, строка 1), дегрануляции (колонка 7, строка 1). К линкомицину в дозе 0,18 мг выявлена сенсибилизация (колонки 6, строка 3).

Поэтому для лечения рекомендовали пенициллин в дозе 400 ЕД (обладающий не самым большим стимулирующим эффектом). После пересчета эффективной дозы пенициллина на средний объем крови человека больной для лечения назначили пенициллин по 1000000 ЕД 4 раза в сутки. В процессе лечения рана активно гранулировала, признаки воспаления отсутствовали.

Пример 3. Больная И., 52 лет, № и.б. 273353, оперирована в отделении ортопедии ОКОХБВЛ по поводу тяжелой патологии нижней конечности. Произведена сложная реконструктивная операция с применением костной артропластики. В предоперационном периоде, параллельно со стандартным обследованием, проведено прогнозирование течения послеоперационного периода. Выявлена высокая вероятность развития гнойных осложнений. В связи с этим больной проведен подбор антибиотиков лабораторным путем. Панель антибиотиков формировали по результатам бактериологических исследований. Сведения о результатах лабораторных исследований крови больной И. приведены в таблице 4.

Из таблицы 4 видно, что высокая стимуляция отмечается на пенициллин в дозе 600 ЕД, гентамицин в дозах 0,016 и 0,024 мг и линкомицин в дозе 0,18 мг (колонка 4, строки 2, 3, 4, 5). По способу-прототипу лучший лечебный эффект ожидаем при назначении линкомицина в дозе 0,18 мг (колонка 4, строка 5), т.к. под действием его образовалось максимальное число Т-розеткообразующих лимфоцитов (68% против 43% в контроле). Однако после исследования сенсибилизации выяснили, что единственным антибиотиком, который можно рекомендовать для лечения, является пенициллин в дозе 600 ЕД. Только к нему не выявлена сенсибилизация в тестах Е-розеткообразования, дегрануляции и специфического лизиса лейкоцитов (таблица 4, строка 2, колонки 5, 6, 7), тогда как под действием его образовалось не максимальное, но достаточно больное число Т-розеткообразующих лимфоцитов (54% против 43% в контроле).

Больная прооперированна. С целью профилактики гнойно-воспалительных осложнений (после пересчета эффективной дозы пенициллина на средний объем крови взрослого человека) больной назначен пенициллин по 1000000 ЕД 6 раз в сутки.

Послеоперационный период протекал без осложнений. Заживление операционной раны первичным натяжением.

Использование предложенного способа позволяет проводить индивидуальный подбор антибактериальных препаратов пациентам ортопедического и травматологического профиля при экстренных и плановых оперативных вмешательствах. Этот способ подбора антибактериальных препаратов исключает развитие такого грозного осложнения как аллергическая реакция.

В клинике ортопедии ОКОХБВЛ по предложенному способу проведен индивидуальный подбор антибиотиков 225 больным, уточнение вида антибиотика и его дозировки относительно способа-прототипа потребовалось в 38,7% случаях.

Изобретение относится к области медицины. Способ характеризуется тем, что проводят инкубирование крови с разведениями различных антибиотиков, выделяют лимфоциты, инкубируют их с эритроцитами барана и подсчитывают число Т-розеткообразующих лимфоцитов с выбором антибиотика, под действием которого образуется максимальное число Т-розеткообразующих лимфоцитов, дополнительно определяют сенсибилизацию тестами Е-розеткообразования, дегрануляции и специфического лизиса лейкоцитов периферической крови и из выбранных антибиотиков назначают антибиотик, к которому сенсибилизация не выявлена. Изобретение позволяет повысить точность подбора антибиотиков для лечения. 5 табл.

Способ подбора антибиотиков для лечения больных ортопедо-травматологического профиля путем инкубирования крови с разведениями различных антибиотиков, выделения лимфоцитов и инкубирования их с эритроцитами барана, далее подсчитывают число Т-розеткообразующих лимфоцитов и по их максимальному числу выбирают антибиотик, отличающийся тем, что для лечения больных ортопедо-травматологического профиля дополнительно определяют наличие сенсибилизации к выбранным антибиотикам с помощью тестов: Е-розеткообразования, процент дегрануляции нейтрофилов и процент лизиса лейкоцитов относительно контрольных фоновых значений и из выбранных антибиотиков назначают тот, к которому сенсибилизация не выявлена.