Способ определения @ -глобулинов сыворотки крови Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

1

Изобретение относится к лабора торным исследованиям, в частности к способам исследования крови и люминесцентному анализу.

Известен способ определения -глобулинов в сыворотке крови путем разделения белков на фракции. Для этих целей используют методы электрофореза, фракционирование через слой геля сефадекса, а также осаждение белков растворами солей. Затем определяют количество белка в каждой фракции отдельно, предварительно определив количество общего белка, содержащегося в сыворотке крови, по оптической плотности, коэффициенту рефракции, специфической окраске белков красителями 1.

Известен также способ определения белков в биологических жидкостях по флуоресценции триптофана и тирозина, который заключается в том, |что флуоресценцию возбуждают ультра;фиолетовыми лучами в области спектрое поглощения ароматических аминокислот и измеряют суммарное их излучение PJ .

Тирозин и триптофан входят в состав альбуминов и глобулинов, поетому этим способом измеряют только общую концентрацию белков в сыворотке Разделение же их на фракции для определения J -глобулинов требует сравнительно длительного времени, большого количества сыворотки и дорогостоящих химических реактивов.

Цель изобретения - ускорение процесса определения J-глобулинов.

Поставленная цель достигается тем, что интенсивность флуоресценции триптофана измеряют в Il-lS-HOM раствог ре йодистого калия, при длине волны возбуждения 286-306 нм и длине волны эмиссии 3 0-370 нм.

При выбранных условиях измерений флуоресцируют в основном только внутренние остатки триптофана, которых много в j-глобулинах и нет в

альбуминах, поэтому альбумины и другие белковые фракции не мешают определению У - глобулинов.

Пример 1. С целью определить погрешность метода, влияние других белковых фракций на флуоресценцию у-глобулинов отбирают 17 сывороток крови норок, у которых содержание белковых фракций, определенных методом электрофореза, колеблется в широких пределах: альбуминов от 2,18 до 3,85 г %,Т Глобулинов от 0,63 до 2,9 г ,-у-глобулинов от 1,35 до 2,63 г ,-2 -глобулинов от 0,29 до ,25 г %, Сыворотку крови разводят в 15%-ном растворе йодистого калияо

Результаты определенияJ-глобулина представлены в табл 1,

Установлено, что в присутствии тушителя поверхностных остатков триптофана (К1) 7Г глобулины корректируют в высокой степени с флуоресценцией сывороток (r,,9B, ,001). Другие белковые фракции не влияют на интенсивность флуоресценции, на что указывают их низкие коэффициенты корреляции (), которые не достоверны и близки к коэффициентам корреляции белковых фракций с -глобулинами, определенных методом электрофореза ().

I Результаты испытаний позволяют считать возможным определение -глобулинов по флуоресценции внутренних остатков триптофана при выбранных условиях измерения, которые указаны

В заявке со средней относительной ошибкой 9%.

П р и м е р 2. Колимество -глобулинов в сЫворГотках крови 17 норок определяют предлагаемым способом по уравнению: ,0б5, ,51, где у концентрация )-глобулинов, г %, X - интенсивность флуоресценции сыворотки крови, в . растворе О йодистого калия (Ьазведение 1:400 измеренной в относительных единицах на спектрофлуориметре MPF-3 при чувствительности 1 и полуширине щелей 10 нм, длине волны возбуждения 296 нм длине волны эмиссии 350 нм.

Результаты определения -глобулинов сывороток крови предлагаемым способом в сравнении с известным методом - зональным электрофорезом представлены в табл. 2.

Средняя относительная ошибка ,6 при колебании белковых фракций, в сыворотке крови: альбуминов от 2,18 до 3,85 г %,2Г-г71обулинов от 0,63 до 2,49 г , -глобулинов от 1,35 до 2,63 г %.

По сравнению с известными лабораторными методами определения -у-гло,булинов флуорометрический способ отличается экспрессностью экономией дорогостоящих реактивов, минимальными затратами труда, включающими разведение сыворотки {плазмы раствором тушителя и флуорометрию.

Предлагаемый способ является ультрамикрометодом - для анализа достаточно. одного капилляра крови. . Т а б л и ц а 1

Формул а из обрет е ния

К Способ определенияУ-глобулинов сыворотки крови, включающий измерение интенсивности флуоресценции тр.иптофана, о т л и-ч а ю щ и и с я тем, что, с целью ускорения процесса определения, интенсивность флуоресценции триптофана измеряют в 14-16 растворе йодистого калия.

2. Способ-по п. 1, о т л и ч а щ и и с я тем, что интенсивность

флуоресценции триптофана измеряют при длине волны возбуждения 286зоб им и длине волны эмиссии 3 0370 нм.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Биохимические методы исследования в клинике. Под ред. А.А.Покровского, 1969, с. 58-76..

2.Авторское свидетельство СССР № 122339, кл. G 01 N 33/04, 1959.