Способ определения глюкозы Советский патент 1982 года по МПК G01N33/48 

(5) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ

1

Изобретение относится к медицине, la именно к методам биохимического анализа биологических жидкостей и предназначено для определения глюкозы ферментативным методом.

Известен способ определения глюкозы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкозоксидазой, иммобилизованной на электроде ,.

Однако известный способ отличается крайне низкой чувствительностью. Величина плотности тока, снимаемого с такого электрода составляет 9,5 мкА/см . Причиной низкой чувствительности анализа является небольшая емкость электрода по ферменту и отсутствие хорошего электронного контакта между активным центром фермента и электродом.

Цель изобретения - повышение чувствительности способа.

Поставленная цель достигается тем, что согласноспособу определения глюкозы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкозоксидазой, иммобилизованной на электроде, глюкозоксидазу иммобилизуют на электроде, приготовленном из полимерного материала на основе комплекса полипропаргилпиридила с те.трацианхинодиметаном.

Способ осуществляется следующим образом.

Q Проводят анаэробное окисление глюкозы глюкозооксидазой, иммобилизованной на электроде, приготовленном из полимерного материала на основе комплекса тетрацианхинодиметана с

J5 полипропаргилпиридином.

Иммобилизацию глюкозооксидазы проводят с осаждением фермента с осадком комплексной соли полипропаргилпиридиния с тетрацианхинодиметаном

20 TChfQ. При этом получают препарат иммобилизованной глюкозооксидазы, содержащей 350 мг белка/г носителя. Полимер с включенными в него молекулами фермента наносят на платиновую сетку и используют в качестве электрода. . . Пример . Изготовление электрода. Предварительную иммобилизацию глюкозооксидазы и в комплекс полимер поли-1-пропаргилпиридила (Р-1-РР) с тетрацианхинодиметаном (TCNQ) проводят по следующей методике: к раствор 60 мг бромида Р-1-РРв 3 мл дистилли рованной воды добавляют мл водного раствора глюкозооксидазы (6,S мл су хого препарата/мл раствора). При пос тоянном перемешивании к полученному раствору до15авляют 8 мл водного раст вора LiTCNQ концентрацией 10 мг LiTCNQ мл раствора. Смесь перемешивают в течение 1 г, и образующийся осадок Р-1-РР TCNQ с соосаждеИным фе ментом отделяют от супернатанта на центрифуге при 6 тыс. об/мин в течение 30 мин. Полученный препарат дваж ды промывают дистиллированной водой, .вновь отделяют на центрифуге и сушат при комнатной температуре. Содержание фермента в препарате- составляет 350 мг/г носителя. Для изготовления ферментного элек трода берут платиновую сетку, на которую ровным слоем наносят препарат иммобилизованной глюкозооксидазы и помещают под пресс (150 кг/см) на 15 мин. Определение глюкозы. В электрохи-, мическую ячейку, допускающую продувку раствора газом, помещают 50 мл исследуемого раствора глюкозы в буфеое (фосфату 1,5 М, рН 7,35, 30 с), в качестве рабочего электрода используют электрод с иммобилизованной глюкозооксидазой, в качестве электрода сравнения - нормальный каломельный электрод. Ячейку с раствором глюкозы в течение 30 мин продувают аргоном и задают на рабочем электроде потенциал мВнкэ. Зависимость плотности тока, снимаемого с такого электрода, от концентрации глюкозы в растворе является линейной. Хорошие электропроводящие свойства носителя и высокое содержание глюкозооксидазы позволяют получить ток в 110 мкА/см , что обеспечивает в 12 раз увеличение чувствительности определения глюкозы. Таким образом, предлагаемый способ обеспечивает возможность определения концентрации глюкозы в анаэробных условиях, т.е. без специальной продувки проб кислородом; значительное повышение чувствительности ферментного электрода по отношению к глюкозе, что расширит область применения ферментных методов анализа на глюкозу и повысит их чувствительность. Формула изобретения Способ определения глюкозы путем окисления ее в анаэробных условиях глюкозоксидазой, иммобилизованной на электроде, отличающийс я тем, что, с целью повышения чувcтвиteльнocти способа, глюкозоксидазу иммобилизуют на электроде, приготовленном из полимерного материала на основе комплекса полипропаргилпиридила с тетрацианхинодиметаном. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Lahoda E.J.yLin С. С. and ingard L.B. - Electrochemical Evaluation of Glucose Oxidase Immobilized by Different Methods, Biotechnology and Bioeng, XVM , 1975, .