Способ получения антигена для профилактики бруцеллеза Советский патент 1986 года по МПК A61K39/10 

СП

3

Изобретение относится к медицине, а именно к способам получения вакцинных препаратов,

Известен способ получения антигена для профилактики бруцеллеза путем культивирования бруцелл в питательной среде с последующим отделением и высушиванием биомасеы и выделением целевого продукта; С; помощью гидролиза уксусной кислотой.

Однако вакцинный препарат, полученньм известным спрсббом, не обладает достаточно высокими- протективными свойствами и Ьрок длительности создаваемого.иммунитета не превышает трех месяцев. Увеличение дозы препарата или его двукратное введение,как показали исследования,не пролонгировали иммунитет. Помимо этого в бруцеллезном антигене, представляющем собой белково-полисахаридный комплекс (ВПК), имеются примеси липополисахарида (ЛПС) - эндотоксина, дающего побочные реакции, увеличение дозы ВПК при иммунизации в связи с этим оказывает вместо защитного действия иммунодепрессивное.

Целью изобретения является повьшение иммуногенности и снижение реактогенности.

Цель достигается тем, что при осуществлении способа получения антигена для профилактики бруцеллеза путем культивирования бруцелл в питательной среде с последующим отделением и высушиванием биомассы и выделением целевого продукта с помощью гидролиза уксусной кислотой, отличительной особенностью является- то, что полученный антиген подвергают воздействию ионизирующего излучения в дозе 10-15 кГй

Способ осуществляют следующим образом. Из убитой ацетоном и высушенной микробной массы бруцелл (ацетонового порошка) при помощи гидролиза в 0,1 н.уксусной кислоте (соотношение 1:20 вес/объем, температура в течение 1,5 ч) получают белковополисахаридньй комплекс после отделения надосадочной жидкости центрифугированием при 5000 g в течение 40 мин, ее лиофилизации, последующего осаждения в 8-кратном объеме 96%-ного этанола, промывания осадка эфиром и окончательного высушивания в вакуум-эксикаторе. Затем готовят 0,2%-ный раствор ВПК в 1%-ном растворе лактозы, используемой для стабилизации препарата, и разливают по

1-2 мл в ампулы. Содержимое ампул лиофильно высушивают. После запаивания и маркировки (а на производстве в готовой товарной упаковке) ампулы с препаратом подвергают воздействию ионизирующего излучения при 18-23°С в дозе 10-15 кГй.

I-

В результате такой обработки антигена, а именно лиофилизации его в стабилизирующем растворе, запаивания ампул с последующим воздействием ионизирующего излучения, получают вакцинный препарат с более длительным протективным эффектом (в 2 раза), он абсолютно стерилен и лишен примеси ЛЦС - эндотоксина, что делает вакцину ареактогенной.

Пример 1. При выборе эффективной зоны ионизирующего излучения были изyчe ы иммуногенные свойства препаратов, облученных в дозе 10 и 20 кГй. В результате исследования

установлено, что доза 10 кГй не снимает иммуногенных свойств ВПК при испытании оптимальной дозы препарата (600 мкг). В группе животных,вакцинированных препаратом, облученным дозой 10 кГй, 80% морских свинок были иммунны через 1 месяц после вакцинации и последующего заражения вирулентной культурой бруцелл в дозе 20 микробных клеток. У животных,вакцинированных ВПК, облученным дозой

20 кГй, иммунитет против бруцеллезной инфекции зарегистрированлишь у 50% морских свинок. Серологические исследования с помощью реакции агглютигации (РА), пассивной гемагглютинации (РПГА) и пробы Кумбса неполные антитела (РК) не выявили существенных различий в двух группах животных. Полученные данные позволяют рекомендовать дозу излучения порядка 10 кГй.

Пример 2. Выла определена длительность защитного действия антигена (ВПК), облученного дозой

10 кГй, в сравнении с необлученным препаратом. Введение облученного до- ЗОЙ 10 кГй ВПК создает напряженньш иммунитет у 60% экспериментальных животных в отдаленный срок (6 месядев после вакцинации) .В группе,вакцинированной необлученным ВПК, уже к 4 месяцам иммунных животных было 20%, а через 6 месяцев отмечался

полньй прорыв иммунитета. Результаты исследований позволили сделать однозначный вьгоод о пролонгировании протективного эффекта бруцеллезной вакцины, подвергнутой обработке ионизирующим излучением в дозе 10 кГй. Все образцы вакцины после у -облучения были проверены на стерильность, безвредность (на белых мышах) и апирогенность (на кроликах),

Антиген для профилактики бруцеллеза, полученный предложенным способом, применен на 20 добровольцах и на 145 человеках в очагах бруцеллеза.При этом установлено,что полученный антиген имеет повышенную иммуногенность, сниженную реактогенность,увеличенный срок годности вакцины (до 2 лет), безвреден и стерилен.

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АНТИГЕНА ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА путем культивирования бруцелл в питательной среде с последукяцим отделением, высушиванием биомассы и выделением целевого продукта с помощью гидролиза уксусной кислотой, о т л и ч аю щ.и и с я тем, что, с целью повышения иммуногенности и снижения реактогенности, полученный антиген подвергают воздействию ионизирующего излучения в дозе 10-15 кГй.