Способ определения элеутерозидов А,В @ ,В,Д,Е (его варианты) Советский патент 1982 года по МПК G01N21/63 

Изобретение относится к медицине., и Оармакологии, конкретно к физикохимическим методам количественного анализа лекарственных препаратов, по лучаемых в виде экстрактов, из растительных объектов, и может быть использовано для определения качества экстракта элеутерококка при его полу чении и использовании в качестве лекарства, пищевой или кормовой добавки, для определения содержания биоло гически активных веществ (элеутерози дов) в исходном сырье и в процессе производства, а таюче для выявления :возмоиной фальсификации этого препарата. Элеутерококк колючий (Eleiiterococ CUS r enticocus Max in.) представляет собой кустарник из семейства аралиевых и является близким родственнико известного восточного лекарственного раствния женьшеня. Вместе °с женыденем, родиолой.розовой, пантакрином и другими лекарственными средствами из группы природных адаптогенов элеутерококк повышает неспециЛическую резистентность, адаптацию организмоо к различного рода неблагоприятным внешним воздействиям. Благодаря широкому спектру действия, этот лекарственный препарат назначается при очень многих заболеваниях и предболезненных состояниях, связанных с повышенной йи-зической нагрузкой, понижением выносливости организма, в послеоперационный период, при общей слабости организма и во многих других случаях. Элеутерококк имеет очень широкое применение в медицине, а также в.пищевой промышленности и сельском хозяйстве и считается массовым , ,, лекарственным средством. Поэтому определение качества выпускаемого экстракта элеутерококка имеет очень aaxtное значение, так как возможная передозировка его или отсутствие в продукте каких-либо компонентов может не только не принести пользу, а даже оказаться болезнетворным.

Среди веществ, составляющих действующее начало, элеутерококка, выделя- 5 ют 5 индивидуальных химических вещестп, которыев химии природных соединений принято называть элеутерозидами А, В, В , Д, Е, в сумме по массе составляющих до 90% всех эле- ю утерозидов. Элеутерозид А - это даукостерин, В - 7-с{ глюкозид изофраксидина, В - 1-|)-глюкозид синаптового спирта, Б и Е - .диглюкозиды сирингарезинола, различающиеся конформацией. Sis экстрактах элеутерококка соотношение между элэутерозидами варьирует . незначительно и почти не зависит от периода вегетации, от органов растенил и составляет А:В :В:1):Е :5:15:20 :12:.1.

11звестен способ количественного определения элеутерозидов А, В В, В, Е, основанный на выделении из экстракта элеутерококка отдельно каждо - 2S го элеутерозида в кристаллическом виде, методом многократного последовательного хроматографического разделения экстракта на колонке с последую.щим гравиметрическим определением ко- зо личества элеутерозидов. Особенностью данного способа является возможность раздельного определения всех элеутерозидов, что позволяет применять этот способ для количественного анализа , смесей с произвольным соотношением элеутерозидов 1.

К недостаткам данного способа следует отнести его трудоемкость и длительность (на анализ требуется 40 дней) , невысокую точность (трудно оценить потери веществ в процессе разделения), низкую чувствительность (для анализа, требуется несколько граммов сухого остатка экстракта), а для ведения анализа требуются квалифицированные химики-аналитики.

Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности является способ определения элеутерозидов А, В , В, D, Е путем разбавления или упаривания анализируемой смеси до требуемой оптической плотности и определения концентраций по оптическим характеристикам.

Анализируемая смесь в известном способе представляет собой элеутерозидную фракцию, полученную в результате хроматографического разделения на колонке исходного экстракта с использованием системы растворителей метанол, хлороЛорм в соотношении i:. Анализируемую смесь доводят до оптической плотности 0,1-1,i разбавлением ее метанолом или упариванием. В качесве оптического параметра используют .величину оптической плотности при длине волны 270 нм. Способ определяет суммарную концентрацию элеутерозидов n,t). В, а их индивидуальные количества и содержание в смеси остальных элеутерозидов .расчитывают пользуясь известным соотношением между ними.

Преимуществами известного способа определения по сравнению с описанным }ВЬ1ше .являются большая точность опре целения, простота и сокращение времени анализа { 2 J.

К недостаткам известного способа отнести то, что данным методо непосредственно определяется только сумма элеутерозидов В,Р , Е и об индивидуальных количествах каждого элеутерозида в отдельности можно судить только косвенно, используя известное соотношение между этими компонентами в природных смесях.

Кроме того, поскольку действиекаждого элеутерозида индивидуально и, по-видимому, механизм действия каждого из них различен, то для оценки качества экстракта совершенно необходимо знать содержание ка хдого элеутерозида в отдельности. Кроме этого, точность метода сни): ается в связи с невозможностью достаточно полно разделить исходную смесь элеутерозидов от примесей гдетодом однократного хроматогроОирования на колонке (сопутст-. вующие примеси имеют близкие значения R). Известный способ является также достаточно длительным. .с

Целью изобретения является расширение функциональных возможностей способа, повышение чувствительности и точности анализа.

Указанная цель достигается тем, что согласно способу определения элеутерозидов А, В , B,D , Е путем разбавления или упаривания анализируемой смеси до требуемой оптической плотности и определения концентраций по оптическим характеристикам, два образца анализируемой смеси разбавляют или упаривают до оптической плотности 0,08-0,1, .один - для определения элеутерозидов В,D, Е на длине волны в диапазоне 27П.-ЗПП нм, а другой - для определения элеутерозида В на длине волны в диапазоне 360-380 им, возбу чда1от Люминесценцию анализируемых образцов на хе длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентрации суммы элеутерозидов В,D , Е по величине интенсивности люминесценции на длине волны им и концентрацию элеутерозйда по величине интенсив ности люминесценции на длине волны 500 нм, а концентрацию элеутерозйда А Ьпределяют по известному соотношению между элеутерозидами в их природ ной смеси по найденным значениям кон центраций элеутерозйда В и суммы элеутерозидов В,1) , Е. Во втором варианте способа цель I Достигается тем, что согласно спосо, бу определения элеутерозидов А, В , 1 В,Э , Е, включающем хроматографическое разделение анализируемой смеси, четыре образца анализируемой смеси, полученные хроматографическим путем, содержание в отдельности элеутерозиды А, В, В, и сумму элеутерозидов Д и Е, разбавляют или упаривают до величины оптической плотности О,080,1 при длине оолны в диапазоне 270300 им для анализируемых образцов, содержащих элеутерозиды В и сумму Д и Е, и при длине волны в диапазоне 60-386 нм для образца, содержащего Ьлеутерозид Bi, проводят качественны реакции в соответствующих образцах на наличие элеутерозидов В и Аи, в случае их присутствия, возбуждают люминесценцию образцов на тех же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентрации элеутерозидов В и суммы Д и F. по величине интенсивности люминесцен ции при нм и концентрацию элеутерозида В по величине интенсивнос ти люминесценции при 500 нм, концент рацию элеутерозйда А определяют расчетным путем, сравнивая найденные соотношения между элеутерозидами В, |&, Д и Е с их известным соотношением в природных смесях элеутерозидов. Второй вариант способа позволяет работать с любыми смесями, содержащи элеутерозиды. Качественную реакцию н элеутерозид А осуществляют путем рас ворения соответствующего анализируем го образца в хлороформе и обработки его раствором серной кислоты в уксусном ангидриде. По появлению интенсивного красного окрашивания судят о присутствии элеуте0озида А. Причем качественную реакцию на элеутерозид В осуществляют путем растворения соответствующего образца в воде и обработки полученного раствора солью Со и наличие элеутерозйда В устанавливают по появлению в спектре поглслцения раствора новой полосы с максимумом НОО нм (постепенное покраснение раствора). С целью повышения точности определения элеутерозйда возбуждение люминесценции и измерение концентрации элеутерозйда В проводят в среде с рН 12-13. В способе анализируемой смесью является исходный экстракт элеутеро- , кокка. Из анализируемого экстракта разбавлением водно-спиртовой смесьюили содой-, либо упариванием готовят два образца с оптической плотностью 0,08-0,1 при длинах волн 270-300 нм (образец для определения элеутерозидов B,D , Е и 360-380 нм (образец для определения элеутерозйда В), Регистрируют спектры люминесценции первого и второго образцов при возбуждении УЛ-светом соответственно 270300 нм и 360-380 нм, контролируя при этом соответствие параметров этих спектров спектрам чистых элеутерозидов В , В,), Ей смеси элеутерозидов В, Т), Г:. Параметры спектров люминесценции элеутерозидоо ( поло чение .максимума и полуширина полосы пред|ставлены в табл. 1. SТ а б л и ц а 1 55 Д, 335 60 Смесь элеутерозидов В, , Е в соотношении 15:12:13 5 60 в качестве контроля на точность определения элеутерозида В следует прописать спектр его люминесценции при значении рН раствора в области 2-3 и 12-13 При этом интенсивность люминесценции во втором случае должна быть в ,2 раза больше, чем в кислой среде. Концентрации cyMMfci элеутерозидов Bjb , Е, а таюне элеутерозида В находят по Лормуле ТПТЖ искомая концентрация элеутерозида, моль/л; интенсивность люминесценции, измеренная в максимуме полосы люминесценции; - разбавление измеряемого раст вора по сравнению с исходным экстрактом. trid константа, не зависяща tgj от прибора, где tf и tgcfi тангенсы углов наклона линейных участков кривых зависимости интенсивности люминесценции соответствующего элеутерозида или их смеси и эталонного вещества соответственно, снятые в одно время, на одном приборе, в одинак вых условиях., В качестве люминесценции эталонны веществ в предлагаемом способе испол зуются аминокислота триптоЛан (длина волны возбуждения 290 нм и люминесценции нм) для определения.vKOHцентраций элеутерозидов 8, Т), Ей их суммы и 1-анилинонайталин-П-сульфона (длина волны возбуждения 37П нм и люминесценции 500 нм;) для определени концентрации элеутерозида В. Величи ны констант К в случае возбуждения л минесценции УФ-светом 290 нм и 370 н для элеутерозидов В, D, F и В.. соответственно и измерения люминесценции соответственно при нм и 500 нм при ведены в табл.2. Значение коэффициента К в случае элеутерозида В приведено для его люминесценции при рН 12-13. Значение ко эффициента К 0,3 0,09 OJ7 3.5 jt8 В том случае, если отношение интенсивностей люминесценции смеси в областях рН раствора 2-3 и 12-13 при длине волны возбуждающего света 360380 нм значительно отличается от , в исследуемой смеси присутствует примесь, спектр люминесценции которой близок к элеутерозиду П . Предположив, что спектр люминесценции этой примеси не зависит от рН, значение интенсивности люминесценции для вычисления концентрации олеутерозида находят по соотношению I 4 0. - U), (2) 3 Ч Где I и I - соответственно интен сивности люминесценции образца при значениях рН 12-13 и 2-3. В способе указанные интервалы длин волн возбу : дения люминесценции и значение оптической плотности об-, разцов являются существенными, так как осуществление операций способа вне указанных пределов снижает точность определения ввиду уменьшения интенсивности люминесценции элеутерозидов и увеличения люминесценции примесей, а также появления нелинейности в зависимости интенсивности люминесценции от концентрации элеутерозидов. С целью непосредтвенного, более точного определения элеутерозидов А, В, В, В, Е исходный экстракт хроматограйируют в тонком слое в системе растворителей хлороформ, метанол, вода в соотношении 0:10:1. Местоположение олеутерозидов определяют по значениям Rj , а также, вырезая полосы шириной 0,5-0,8 см с боков и из середины пластинки (обнаружение при нагревании до. 200-250С по характерной окраске пятен: сине-фиолетовое - элеутерозид В; оранжевое Д, Е; элеутерозидыА и хроматограмме отчетливо не определяются ввиду их низкой концентрации и наличия близ-ко расположенных примесей. Установлено экспериментальным путем, что область располонения элеутерозида В непосредственно граничит в областью элеутерозида В, находится над ней и имеет ту же ширину, а элеутерозид А аналогичным образом располагается над элеутерозидом В ж . Компоненты смеси разделяют, вырезая из непроявленной части пластинки полосы, соответствующие обнаруженным элеутерозидам и элюируют их за тем водным этанолок или . Доводя оптические плотности образцов до 0,08-0,1 упариванием или разбавлением бидистиллятом, регистрируют их спектры люминесценции при возбуждении в 270-300 нм для элеутерозидов В, Д, И и в ЗбО-3 0 нм для элеутерозида В, (при. значениях рН 2-3 и 11-12), прокалибровав предварительно спектрофлуориметр эталонными веществами (для получения значений tqof.) . Параметры по лученных спектров люминесценции сравнивают с табличными (табл. V). Затем измеряют интенсивность люминесценции фракций, содер хащих элеутерозиды В, Д, Е при нм и элеутерозид В. при 500 нм. Использование в качестве предварительной операции тонкослойной хроматогрпфии позволяет быстро и достаточно полно разделить и очистить элеутерозиды . Так как о наличии элеутерозида А в смеси невозможно судить по люминесценции и поглощению, и это вещество трудно различимо на хроматограмме, то его присутствие в экстракте элеутерококка устанавливают по качественной реакции на агликоновую часть молекулы реакция Либермана-Вурхарда), заключаюцейся в добавлении к хлороЛормному раствору анализируемого вещества (в данном случае вещество, элюированное .из соответствующей области хроматогра ... фической пластинки) одного миллилитра свежеприготовленного раствора нескольких капель концентрированной сер ной кислоты в 5 мл охлажденного льдом уксусного ангидрида. При этом через несколько секунд долхсно появиться постепенное покраснение раствора. Количество элеутерозида А в случае положи тельной качественной реакции можно оценить по количеству элеутерозида Bf при совпадении количественного соотношения для эл1еутерозидов В., В, Д, Е в анализируемом экстракте и в природной смеси. Поскольку концентрация з31еутерозида А в анализируемом экстракте расчитывается из концентрации элеутерозида В , точное и достоверное определение последнего является для этого необходимым условием. Поэтому, определяя содержание элеутерозида B/f в исходном экстракте и после хромато графического разделения, необходимо проверить зависимость спектра люминесценции при длине волны возбуждения ЗбО-ЗВО нм от рН раствора (при этом люминесценция образца при рИ 12 в 3,5-,2 раза интенсивнее, чем при нейтральных и кислых рН), а также появление новой полосы с максимумом 00 нм Q спектре поглощения элеутеро. зида В , через несколько минут после добавления к нему соли Со ,. В том случае, если соотношение интенсивностей люминесценции при различных значениях рН не попадает в указанную область, для .определения значения поль- .зуются соотношением (2). -. П р и м е р. Проанализирован водноспиртовый экстракт элеутерококка выпуска химико-фармацевтического завода Санитас (г. Каунас), ноябрь 1980 года. Готовили разбавления бидистиллятом анализируемого экстракта в 20, 50, 100, 200 и т.д. раз, используя для каждой пробы 0,1 мл исходной смеси. Измеряли оптическую плотность калдого образца при длинах волн 370 и .90 нм при помощи двухлучевого дифференциаль- ного спектрофотометра, отбирая из проб те, оптическая плотность которых при одной из указанных длин волн была в пределах 0,08-0,1. Такому требованию удовлетворили образцы, полученные от разбавления исходного экстракта в 500 раз, - оптическая плотность 0,097 при 290 нм (образец hf 1), и в 200 раз - оптическая плотность 0,093 при 370 нм (образец К 2). Прокалибром «ч п/ --414 Г . . . . . вали спектрофлуориметр двумя эталонами: триптофан - при длине волны возбуждения 290 нм и люминесценции. нм и 1-анилинонафтаг.ин-8-сульфонат - при длине волны возбуждения 370 нм и люминесценции 500 нм, полу-. чив значения (фиг. 1 и 2) , котог рые оказались равными it, и 8.10 соответственно. Регистрировали спектры люминесценции образцов № 1. 2 при возбуждении УО-светом 290 нм и 370 нм соответственно, добавив.-.к образцу Ь° 2 одну каплю 0,1 н раствора соляной кислоты, а затем после добавления к нему трех капель 0,1 н. раствора едкого натра. Параметры полученных спектров совпали с данными табл. 1, а соотношение, между интенсивностями люминесценции при кислых и щелочных значениях рН среды в случаях возбуждения УО-светом 370 нм оказалось равным 3,9; Измеряли интенсивность люминесценции (|) 11 для образцов И° 1 и К . при 3t5 нм и 500 нм соответственно. Найденные по соотношению (1) концентрации элеутерозидов оказались равными, мг/млГ Элеутерозид В 0,7-0,8 Элеутерозид В 2,3-2,5 Элеутерозид Д 1,9-2,1 Элеутерозид Е 0,15-0,25j а найденная по содержанию олеутерози да В концентрация элеутерозида Л в исследуемом экстракте оказалась равной 0,55-0,65 мг/ял. Для непосредственного и более точ ного определения элеутерозидов хроматографировали 0,5 мл анализируемого экстракта в тонком слое, использу пластинки фирмы SlUifol (ЧССР) , в системе растворителей хлороформ, мет нол, вода в соотношении А0:10:1. От хроматографической пластинки с обоих боков и в середине отрезали полоски шириной по 0,5 см.. Каждую из трех по лосок проявляли нагреванием на элект роплитке в течение 2 мин при . По значениям R|, характерной окраск пятен идентифицировали элеутерозиды: В - сине-фиолетовое пятно, Д и Е оранхевоё пятно. Зона элеутерозида Е располагается непосредственно над В и имеет ту же. ширину. Зона элеутерозида Л находится выше элеутерозида ;В. Используя проявленные полоски в качестве маркера, вырезали из непроявленной основной части пластинки об ;ласти, соответствующие индивидуальным элеутерозидам, элюировали их бидистиллятом (f мл на каждую пробу), счищая слой силикагеля, и доводили оптическую плотность до 0,08-0,1 при соответствующих длинах волн (37П нм для элеутерозида В vi 290 нм для эле утерозидов В, Д и Е). Регистрировали спектры люминесценции образцов, содержащих элеутерозиды В, Д и Е при возбуждении УО-светом длины волны 290 нм, которые по параметрам совпа ли с данными табл. 2. По интенсивное ти люминесценции нм, калибровочным для элеутерозидов, постро енным по калибровке эталонным вёщест . . BOM и значением коэффициентов К (табл. 2), используя соотношение (1) , нашли концентрации элеутерозидов В : и суммы Д, Е, которые оказались рав. ными (учитывйя потери вещества при . проявлении полосок хроматограммы), мг/мл: Элеутерозид П 2,0-2,2 Элеутерозиды Д,Е 1,8-2,0 5 Образец, содержавший элеутерозид В , после элюирования разделили на две равные части. К одной из них добавили 0,1 fV 0,1 Н р-ра СоГ.1 в и через 5 мин увидели постепенное покраснение раствора. Через 30 г1ин был прописан спектр поглощения образца, который соответствовал спектру поглощения комплекса элеутерозид В - и имел полосу поглощения с максимумом 00 нм. Ко второй части образце последовательно добавляли 1 каплю 0,1 н. раствора соляной кислоты и 3 капли н. раствора едкого натра, регистрируя после обеих операций-спектр люминесценции при возбуждении 370 нм. Параметры .обоих спектров, соотношение их интеисивностей (в щелочной среде интенсивность в А раза больше) полностью соответствовали оптическим характеристикам элеутерозида В (табл. 1). По интенсивности люминесценции этого образца при щелочном значении рИ при длине волны 500 нм, калибровочной зависимости (фиг. 2) , значению коэффициента К (табл. 2), используя соотношение (1), нашли концентрацию элеутерозида В, которая составила (учитывая потери вещества при проявлении полосок хроматограммы) 0,7-0,8 Mr/tvi. Пробу, содержащую вещество, элюированное из области , соответствующей расположению элеутерозида А, упарили, перерастворили D хлороформе, добавили 1 мл свежеприготовленного раствора 1 капли концентрированной серной кислоты и 1 мл охлажденного льдом уксусного ангидрида. Через несколько секунд раствор окрасился в бледно-розовый цвет, что говорит о присутствии в нем элеутерозида А. Соотношение количествами непосредственно определенных элеутерозидов R , В, Д и Е составляет 8:21:19 и несущественно отличается от литературных данных. Есть все °| осногаания полагать, что это касается, и элеутерозида А, наличие которого в смеси было установлено качественно. Его количественное содержание в исследуемом,экстракте, оцененное по ,.- концентрации элеутерозида В, и их соотношению в природных смесях, окаёалось равным 0,6-0,7 мг/мл. Аналогично проводится количественное определение элеутерозйдоо при других длинах волн возбуждения люминесценции в диапазона { 270-300 нм (для элеутерозидов В, Д, F.) и ЗбО380 нм (для элеутерозида В-). Предлагаемый способ позволяет определить непосредствонно раздельно содержание основных элеутерозидов в экстракте элеутерококка, П то хе оремя он достаточно прост, не требует вм .сококвалифицированных исполнителей, быстр в осуществлении (2-3 ч). Поэтому, с одной стороны, он удовлетворяет всем современным требованиям фарма кологии, фармацевтики и медицины, а с другой - для внедрения его в промыш ленность не требуются дополнительные технологические разработки. Предложен ный способ повышает точность и чувствительность определения, позволяет достоверно судить о присутствии 3 экстракте элеутерококка биологически активных веществ. Способ позволяет более точно использовать сырье и значительно снизить отходы производства. Разработанный способ позволит значительно повысить конкурентоспособ ность отечественного элеутерококка, продаваемого за , продавать его как лекарственное средство | в настоящее время элеутерококк продается за рубе)х как пищевая добавка), что принесет дополнительные прибыли государству за счет повышения рыночной цены В конечном итоге внедрение предлагаe Югo метода в производство позволяет увеличить объем продаж элеутерококка за границу в 2-2,5 раза. Формула изобретения 1, Способ определения элеутерозидов Л, В, В, Л, Е путем разбавления ИЛИ упаривания анализируемой смеси д требуемой оптической плотности и определения концентраций по оптическим характеристикам, о т л и ч а ю щ и й СЯ тем, что, с целью расширения Фун циональных возмо чностйй, повышения чувствительности и точности анализа, два образца анализируемой смеси разбавляют или упаривают до оптической плотности 0,08-0,1, один - для определения элеутерозидов R, Д, F на дли не, волны в диапазоне 27ПП-300 нм, а другой - для определения элеутерозида К на длине волны в диапазоне ЗбО-380 нм, возбуждают люминесценцию образцов анализируемой смеси на этих же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентра цию суммы элеутерозидор В, Л, Е по величине интенсивности люминесценции на длине волны нм и концентрацию элеутерозида П по величине интенсивности люминесценции на длине волны 500 нм, а концентрацию элеутерозида А определяют по известному COOTHOUJCнию между элеутерозидами в их природных смесях по найденным значениям концентраций элеутерозида R и суммы элеутерозидов. В, Д, Е, 2, Способ определения элеутерозидов Л, В , В, Д, Е путем хроматогра- фического разделения анализируемой смеси, разбавления или упаривания получаемых образцов до требуемой.оптической плотности и определения концентраций элеутерозидов по оптическим характеристикам, о т я и ч.а ющ и и с я тем, что, с целью расширения (Функциональных воз.« жносте 1 способа, повышения чувствительности и точности анализа. Полученные хроматографическим путем четыре образца анализируемой смеси, содержащие в отдельности элеутерозиды Л, В, В и сумму элеутерозидов Д и Е, разбавляют или упаривают до величины оптической плотности 0,08-0,1 при длине волны в диапазоне 270-300 нм для анализируемых образцов, содержащих олеутерозиды В и сумму Д и Е 5 и при длине волны в диапазоне 3 0-ЗЙО нм для образца, содержащего элеутерозид В , проводят качественные реакции в соответствующих образцах на наличие элеутерозидов В и Л и, -в случае их присутстВИЯ, возбукдают люминесценцию образцов на тех же длинах волн, регистрируют спектр люминесценции и определяют концентрации элеутерозидов В и суммы Д и Е по величине интенсивности люминесценции при нм и концентрацию элеутерозида В по величине интенсивности люминесценции при 500 им, кон и2нтрацию элеутерозида А определяют расчетным путем, сравнивая найденные соотношения между элеутерозидами В , В, Д и Е с их известным соотношением в природных смесях элеутерозидов. 3, Способ по п. 2, отличающий с я тем, что качественную реацию на элеутерозид А осуществляют путем растворения соответствую«цего анализируемого образца в хлороформе и обработки его раствором серной кислоты в уксусном ангидриде, и наличие элеутерозида А устанавливают по появлению интенсивного красного окрашивания. . Способ по п. 2, о т л и ч аю щ и и с я тем, что качественную реакцию на элеутерозид П осуцествл ют путем растворенип соответствукхце го о(}разца в воде и обоаПотки полученного раствора солью Со и наличие элеутерозида В устанавливают по покраснению раствора, 5. Способ по пп. 1 и 2, о т л ичающийся тем, что, с целью повышения точности определения элеутерозида Rj , возбуждение люминесценции .и измерение концентрации эле fL проподпт в среде с утерозида рН 1Р.-13. Источники инЛормации, принятые во внимание при экспертизе 1.Оводов Ю.С. и др. Гликозиды элеутерококка колючего (EleuterococCUS Santlcocus). Выделение и некоторые свойства элеутерозйдов В и Е. Химия природных соединений, 19б5, № 1, с. 3-7. 2.Яапчик П.ф., Фролова Г.М., Оводов Ю.С. Количественное определение гликозидов элеутерококка колючего. Методика исследований. - Растительные ресурсы, 1968, т. У, вып.З, с. 55 (прототип).

V./ ff&(/.