Способ разделения аминокислот Советский патент 1982 года по МПК G01N31/08 

(54) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ

1

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к способам разделения смесей ам шокислот методом жидкостной хроматографии.

Р1звестен способ разделения смесей aN«nioкислот жидкостной хроматографией с использованием полистирольного катионига и элюентов на основе цитратов натрия, калия и лития при 45-6.5° С 1.

Недостатком этого способа является сложность проведения разделения из-за необходимости поддерживания повыи1ешшй температуры (45-65° С).

Наиболее близким по технической суо ности и достигаемому результату к изобретению является снособ разделения аминокислот путем растворения анализируемого вещества в цитратном буферном растворе, пропускания через колонку, заполненную катионообменным сорбентом, полистирольным катионитом со средним размером зерен 17 гкм с последующим элюированием сорбирова шото вещества растворителем на основе цитрата лития с добавками монометшювого эфира

этиленгликоля. р; ДИ1гс.у: ;рфопо;;0 к IK-; (она и каприловой KKC.uori ппп т.лл.п ерлтурс колонки 36-40С 2.

Недостатком изнестчого способа сложность проведеипя процесса ряэдслег1;|Я из-за необхо.инмости поддержгп.ани.т повышенной температуры (36-40°С).

Цель изобретения - зпротцение способа разделения аминокислот.

Поставленная це.чь достшается тем. -гго

0 coniacHo способу разделения iiyте.м растворения aiiaHnaiTpycNforo зеи;осгва F ц} тратном буферном растворе, нропускаьця через колонку при темперятзре Я-20Г5 зано.лненлую гликольлгетакрилагаым катгюиитом

15 с размером зерен 10-63 м;:м. с 17огледу 01. злюированнем сорбировапного вещества рястиорителем на основе иитратя натрня в качествекатионообменного сорбепгз исио.пьзуки гянкольметакрилатный катиозит с {азлгсром зе20рен 10-63 мкм и проиесс рйз.ае..я ксяут при температуре ко.лонки IS-20°С.

Положительный эффект достиг.че1с.й примемнением сферона-S. ir.cwtaeio 1Л 1к -1- ьме;;-.

39

крилатную матрицу. Матрица обладает повышенной гидрофильиостью из-за наличия в ней гидроксильных групп, связанных с алифатическим углеродным скелетом. Наличие гидрюксильных групп в матрице препятствует неионным взаимодействям между матрицей и раделяемыми аминокислотами, расширению их полос в элюенте и смешиванию при 8-20°С.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом.

Разделяемую смесь М аминокислот растворяют в буферном раствору (0,2 и. цитрата натрия (рН 2,2). Раствор элюируют с колонки размером f 27-50 х 0,8 см, наполненной гликольметакрилатным катионнтом сфероном-S с диаметром частиц 101- 63 мкм, Еодаыми буферными растворами цитрата натрия. До 25-ой мин от начала хроматографирования концентрацию иона натрия в плюенте поддерживают в пределах 0,10,2 н., а рН 3,0-3,25. 25-ой и до 60-ой мин от начала хроматографирования концентрация иона натрия в элюенте в пределах 0,1-0,2 н., а рН 4,2-4,3, от 60 до 130-ой ми от начала хроматографирования концентрация иона натрия в злюенте в пределах 1,0-1,2 н. а рН 6,4-6,5. Все элюенты содерясат также 0,01% каприловой кислоты, а злюент с рН 3,0-3,25 также 0,5% тиодигликоля и 4,0%, этилового спирта. Скорость элюироваНия

60 мл/ч при давлении 2-20 атм. ТемператуГидроксипрюлин

Аспарагииовая кислота

Валин

Метионин

Лейцин

Фенилаланин

Тирозин

Гисгидин

Лргинин

Пример 2. Аминокислоты: пролин, глутаминовую кислоту, лейцин, фенилаланин, гист1-ш., apiHHUH (10 М каждой) раствора в колонке в зависимости от температуры окружающей среды (18-20°). Колонка не нагревается и не термостатируется.

Пример 1. Аминокислоты: гидрокспролин, аспарагиновую кислоту, валин, метионин, лейцин, фенилаланин, тирозин, гистидин аргинин ( М каждой) растворяют в буферном растворе 0,2 н. цитрата натрия, (рН 2,2). Раствор элюируют с колонки размером 27 X 0,8 см, наполненней гликольметакрилатным катионитом сфероном-S с диаметром частиц 10-25 мкм, водными буферным растворами цитрата натрия. До 25-ой мин от начала хроматографирования концентрация иона натрия в злюенте 0,1 н., рН 3,0. От 25-ой мин концентрация иона натрия в злюенте 0,1 н., рН 4,2. От 60-й до 100-й мин от начала хроматографирования концентрация иона натрия в злюенте 1,0 н., рН 6,4. Все элюенты содержат также 0,017 каприловой кислоты, а элюент с рН 3 также и 0,5% тиодигликоля и 4,0% этилового спирта. Скорость злюирования 60 мл/ч при давлении 15-20 атм. Времена выхода аминокислот, мин: гидроксипропилина 19, аспарагиновой кислоты 22, валяна 30, метионина 35, лейцина 43, фенилалашгаа 65, тирозина 76, гистидина 80, аргинина 92. Телшература в колонке 18°С. Колонку не нагревают и не термостатируют.

Результаты анализа представлены в табл. 1

Таблица I

-1,5

0,0129 0,0132 -0,7 +0,8 0,0118 +0,7 0,0150 -0,8 0,0130 ±0,0 0,0165 + 1,7 0,0184 +0,6 0,0156 -1,7 0,0171

ряют в буферном растворе 0,2 н. нитрата натрия (рН 2,2). Раствор элюируют с колонки размером 27 х 0,8 см, наполненной гликопьметакрилатиым катионитом сфероном-S ,с диаметром частиц 25-40 мкм, водными буферными растворами цитрата натрия. До 25-ой мин от начала хроматографированкя коицеитрация иона натрия в элюенте 0,1 н., рН 3,25. От 25-ой до 60-ой мни концентрация иона натрия в элюенте 0,1 н, рН 4,3. От 60-ой до 130-ой мин от начала хроматографирования концентрация иона натрия в элюенте 1,0 н., рН 6,5. Все элюенты содерПример 3. Аминокислоты: аспарагкновую кислоту, глицин, изолейцин, тирозин, лизин, аргинин (10 М каждой) растворяют в буферном растворе 0,2 н цитрата натрия (рН 2,2). Раствор элюируют с колонки размером 50 х 0,8 см, наполненной гликольметакрштатным катионитом сфероном-S с диаметром частиц 40-63 мкм, водными буферным растворами цитрата натрия. До 26-ой мин от начала хроматографирования концентрация иона натрия в элюенте 0,2 н., рН 3,25. От 25-ой до 60-ой мин концентрация иона натрия в элюенте 0,2 н..

Аспарагиновая

Глицин

Изолейцин

Тирозин

Лизин

Аргинин

799916

жат также 0,01% каприловой кислоты, а элюент с рН 3,25 также и 0,5% тиодигликоля и 4,0% этилового спирта. Скорость элюирования 60 мл/ч при давлении 3-6 атм. 5 Времена выхода аминокислот, мин: пролшш 28, глутаминовой кислоты 39, лейцина 48, фенилаланина 62, гистищша 77, аргинина 92. Температура в колонке 18° С. Колонку не нагревают и не термостатируют.

(О

Результаты анализа представлены в табл. 2Таблица 2

рН 4,3. От 60-ой до 130-ой мин концентрация иона натрия в элюенте 1,2 н., рН 6,5. Все элюенты содержат также 0,01% каприловой кислоты, а элюент с рН 3,25 также и 0,5% тиодигликоля и 4,0 этщювого спирта. Скорость элюирования 60 мл/ч при давлении 2-4 атм. Времена выхода аминокислот, мин; аспарагиновой кислоты 31, глицина 36, изолейцина 44, тирозина 50, лизина 73, аргинина 97. Температура в колонке

20° С. Колонку не нагревают и не термостатируют. Результаты анализа представлены в табл.3.

Таблица 3

+ 1,5

0,00131

±0 0,00075

-1,5 0,00129

-Ю,6 0,00182

-1,4 0,00144

-1,7 0,00171

Технико-экономический эффект предлагаемого cnoco6ia заключается в упрощеаии процесса, т.е. в отсутствии необходимости подогрева, термостатированйя ,и дрзтой регулировки температуры колонки. Упрощается хроматографическая аппаратура и ее обслуживание, а также экономится электроэнергия.

Формула изобретения

Способ разделения аминокислот путем растворения анализируемого вещества в цитратном буферном растворе, пропускания через колонку, эаполне шую катионообме1шым сорбентом.

с последующим элюированием сорбированного вещества растворителем на основе цитрата натрия, отличающийся тем, что, с целью упрощения способа, в качестве катионообменного сорбента используют гликольметакрилатный катионит с размером зерен 10-63 мкм и процесс разделения ведут при температуре колонки 18-20° С. Источники информащш, принятые во внимание при экспертизе

с. 17-32.

2.Авторское свидетельство ЧССР № 150094, кл. G 01 N 31/08, 29.09.72 (прототип).