Способ получения производных андростан-17-она Советский патент 1982 года по МПК C07J1/00 A61K31/568 

(5) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ . АНДРОСТАН-17-ОНА

Изобретение относится к получению новых производных андростан-Г/-она общей формулы

E20(CHRi)nO

получать новые промежуточные продукты общей формулы (I).

Цель изобретения - расширение ар сенала новцх производных андрастзн-17она, являющихся промежуточными продуктами в синтезе фармакологически активных стероидов.

Поставленная цель достигается тем, что производное стерина общей фор10мулы

где - простая или двойная связь;

п 1 или 2;

И, - водород;

Rn - низший алкил или в том случае, когда

п 2, также водород, являющихся новыми промежуточными продуктами для синтеза многочисленных фармакологически активных стероидов. Использование известного микробиологического метода определения 17-алкильной цепи у 17-алкилзамещенных стероидов с помощью микроорганизмов вида Mycobacterium fij позволяет

СН,

15

«20(CHR,)flO

20

где ii, Hj , Кл и п имеют указанные значения, а R - водород, этил, или метил, ферментируют культурой микроорганизма Mycobacterium spec NRRL3805, способной к отщеплению боковой цепи от етерина с последующим выделением целевого продукта. Процесс проводят в таких раство-. рителях, как низший спирт, монометиловый эфир гликопя, диметилформамид или диметилсульфоксид, целевой продукт имеет высокий выход. . . Пример 1 . А. В колбу Эрленмейера емкостью 750 мл помещают 200 мл стерильного питательного раствора, содержащего 1 дрожжевого экстракта, 0,45 гидрофосфата натрия, 0, дегидрофосфата калия и 0,2 Тагата (R)02 и доводят рН до 6,7, производят прививку декантатом сухой культуры Mycobacterium spec NRRl-8-3805 и в течение 3 дней производят перемешивание при со скоростью вращения 190 об./мин. B.В ферментер емкостью 50 л с 0 л стерильного питательного раство ра, содержащего 1,23% дрожжевого экстракта (65%-ного), 0,68% дигидрофосфата калия и 0,2% Тагата(,2, и доведенного до рН 6,0, вводят 200 мл выращенной культуры Mycobacte rium spec и форкульгуру при 30°С инкубируют при продувании воздуха (2 )в течение 48 ч. C.400 г холестерина растворяют в 6 л формальдегиддиметилацеталя, перемешивая при комнатной температуре смешивают с kQQ г кизельгура и порци ями прибавляют 200 г пятиокиси фосфора, после чего массу перемешивают в течение 2 ч, при комнатной температуре. Раствор отделяют фильтрованием от нерастворенных компонентов, которые промывают затем формальдегиддиме тилацеталем, после чего растворитель отгоняют в вакууме. После добавления раствора кислого углекислого натрия твердый неочищенный продукт отфильтровывают, промывают водой и после сушки получают 440 г Згз-метоксиметок си-5-холестена. Перекристаллизованное из ацетона соединение имеет т.пл 79-ВО°С. 400 г полученного указанным образам 3р-метоксиметокси-5 холестена эмульгируют со 120 г Тегина 10 л полностью обессоленной воды и 40 мл 1 н.раствора гидроокиси натрия при 95°С в течение 30 мин с помощью Диспакс реактора DR-3-6-6 (фирмы Джанке и Кункель, ФРГ). Затем Эмульсию стерилизуют в течение 20 ми При 120°С. Д. Ферментер емкостью 50 л заполНЯют 40 л стерильного питательного раствора, содержащего 2,0% Cornsteep liguor 0,3% диаммонийгидрофосфата и 0,25% Тагата(02 и доведенного до рН 6,5, затем производят прививку 2л форкультуры Mycobacterium spec, продувают воздухом(0,5 перемешивают (250 об/мин) и производят инкубирование в течение 24 ч при 30°С. Затем к культуре прибавляют эмульсию З/З-метоксиметокси-5-холестена, (полученную в соответствии с разделом С), после чего в течение-120 ч производят ферментацию. После завершения ферментации культуру три раза экстрагируют хлористым этиленом, каждый раз используя по 5 л последнего, этиленхлоридный экстракт фильтруют и упаривают в вакууме. Полученный остаток (15б г ) хроматографируют на колонке, заполненной силикагелем, продукт перекристаллизовывают из этилового эфира уксусной кислоты, в результате чего получают 86 г ЗуЗ-метоксиметокси-5 андростен-17-она с т.пл. 129/131132°С. Пример 2. A.В колбе Зрленмейера емкостью 2 л с 500 мл стерильной питательной среды в условиях, описанных в примере 1А, выращивают Mycobacterium spec NRRL В-3805. B.Аналогично примеру 1C вводят во взаимодействие 10 г ситостерина и получают , 11 г 24-этил-З-р -метоксиметокси-5-холестена. Перекристаллизованное из ацетона соединение имеет т. пл. 70-71°С. 10 г полученного указанным способом 24-этил-3-р-метоксиметокси-5-холестена эмульгируют в течение 10 мин с 4 г Тёгина и 300мл воды при 95°С с помощью Ультра-Турракс (фирмы Джанке и Кункель, ФРГ). Эмульсию стерилизуют в течение 20 мин при 120°С. C.В каждую из 20 колб Эрленмейера, причем каждая с 85 мл стерильной питательной среды, содержащей-2 ,0% Cornsteep liquor, 0,3% диаммонийгидрофосфата, 0,25% Тагата 0,2. и доведенной до рН 6,5, бводят по 5 мл выращенной кулбтуры Mycobacterium spec и в течение 24 ч при 30°С производят перемешивание со скоростью 220 об/мин. Затем к каждой культуре прибавляют 14 мл суспензии 24-этил-3(5 метоксиметокси-5-холестена (что соответствует 0,5 г 24-этил-3(-метоксиметокси-5-холестена) и в течение 120 ч пои производят ферментацию на приборе для встряхивания. После обрабо ки, проведенной аналогично примеру 1Д, получают, 2,1 г З/ метоксиметок си-5-андростен-17 она с т. пл. 130132С. Пример 3. A.В условиях примера 1C вводят во взаимодействие 10,5 г стигмастер на и получают 10,/5 г 2 -этил-ЗЛ-ме токсиметокси-5,22-холестадиена. Пере кристаллизованное из ацетона соедине ние имеет т, пл. . B.В условиях, описанных в приме ре 2В, эмульгируют 10 г 2А-этил-3 -метоксиметокси-5,22-холестадиена. C.В условиях, описанных в приме рах 2А и С, получают 85 мл культуры Mycobacterium spec NftRL В-3805 и производят смешение с }k млсуспензии 2 -этил-3 -метоксиметокси-5,22-холестадиена (что соответствует 0,5 г . 2 -этил-3|)-метоксиметокси-5,2 -холестадиена). После проведения инкубации в течение последующих 120 ч при 30°С на приборе для встряхивания производят обработку в соответствии с примером 1Д. В результате получают 2,3 г 3(5 -метоксиметокси-5 андростен-1у-она ст. пл. 130-132°С. Пример t. А. 20 г холестерина растворяют в 300 мл формальдегидэтилацеталя/ перемешивая при комнатной температур производят смешение с 30 г кизельгура и (порциями по 15 г) пятиокиси фосфора, в течение 2Ц ч массу перемешивают при комнатной температуре. Раствор отделяют фильтрованием от нерастворенной фракции, промывают ее формальдегиддиэтилацеталем; от раствора отгоняют в вакууме раствори тель. Остаток кристаллизуют при 0°С. После добавления раствора кислого углекислого натрия отфильтровывают неочищенный продукт, который промывают водой, в результате чего после сушки получают 22,6 г З этоксиметок си-5-холестбна. Перекристаллизованное из этилового эфира уксусной кислот соединение имеет т. пл. 6 -66°С B.Аналогично примеру 2В эмульгируют 10 г Зр -этоксиметокси-5 холесте на. C.В условиях примеров 2А и С получают 85 мл культурыMycobacteri um spec NRRL В-3805 и смешение с 1 мл суспензии ЗП)-этоксиметокси-5-холесте 8 на (это соответствует 0,5 г 3 -этоксиметокси-5 холестена). После проведения инкубации в течение последующих 120 ч при на приборе для встря хивания производят обработку по аналогии с примером 1Д. В результате получают 1,5 г Зр-этоксиметокси-5-андро стен-17-она с т. пл. 121-123С. П р и м е р 5. A.38,67 г холестерина растворяют в 250 мл хлористого метилена и 1б4,2 г монометилового эфира формальдегид-бис-гликольацеталя и при перемешивании и комнатной температуре перемешивают с 60 г кизельгура и 30 г пятиокиси фосфора, после чего реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре. Раствор отделяют фильтрованием от нерастворенной фракции, промывают последнюю хлористым метиленом и производят нейтрализацию метанольным раствором гидроокиси калия. После отгонки растворителя в вакууме, продукт растворяют в метиловом спирте, производят фильтрование и вещество кристаллизуют посредством медленного испарения растворителя. В результате получают 25 г (2,5-диoкcaгeкcилoкcи)-5-xoлecтeнa с т. пл. t1-t2 C. B.В условиях, описанных в примере 2В эмульгируют 10 г 3/i-(2,5-Диоксагексилокси)-5-холестена. C.В условиях, описанных в примеpax 2А и С, получают 25 мл культуры Mycobacteriurn spec NRRL В-3805 и производят смешение с 14 мл суспензии 3fb-(2,5-диоксагексилокси) -5-холестена, что соответствует 0,5 г 3(2,5-диоксагексилокси)-6-холестена. После осуществления инкубации в течение последующих 120 ч при 30°С на приборе для встряхивания производят обработку аналогично примеру 1Д. В результате получают 1,75 г Зр-(2,5диоксагексилокси)-5-андростен-17 она ст. пл. 65-67°С. Пример 6. А. 12 г холестерина суспендируют в 100 мл ацетальдегиддиметилацеталя, при перемешивании и комнатной температуре производят смешивание с 25 г кизельгура и порциями с 12 г пятиокиси фосфора, после чего в течение 5 мин реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре. Раствор отделяют фильтрованием от нерастворимой фракции, последнюю промывают хлористым метиленом и раствор нейтрализуют метанольным раствором гидроокиси натрия. После отгонки растворителя в вакууме полученный неочищенный продукт перекристаллизовыаают из ацетона при добавлении активированного угля.. В результате получают 10,2 г ,3р (1-метоксиэтокси)-5-холестена ст. пл. .

B.Аналогично примеру 2В эмульгируют 10 г (1-метоксиэтокси)-5-хблестена.

C.При соблюдении условий, описанных в примерах 2А (и С), получают

85 мл культуры Mycobacterium spec NRRL 6-3805, и производят смешение с 1А мл суспензии 3/S (1 метоксиэтокси 5-холестена (это соответствует 0,5 г Зр(1-метоксиэтокси-5 холестена). После инкубирования в течение последущих 120 ч при 30° С на приборе для встряхивания производят обработку по аналогии с примером 1Д. В результате получают 1,89 г 3|Ь-(1-метоксиэтокси)-5-андростен-17-она с т, пл. 111-118°С.

Пример/.

А. 19j33 г холестерина смешивают в 20 мл хлористого метилена с 23,6 мл винилэтилового эфира и 85 мг паратолуолсульфокислоты (безводной) и реакционную смесь перемешивают в течение 1,5 ч при комнатной температуре После нейтрализации раствором кислого углекислого натрия производят экст рагирование раствором хлористого натрия, сушку над- сернокислым натрием, после чего растворитель отгоняют в вакууме. Маслообразный неочищенный продукт хроматографируют на силикагеле при использовании в качестве элюирующего средства смеси гексана и этилового эфира уксусной кислоты. В результате получают 18, г /(Тэтоксиэтокси)-5-холестена в виде бесцветного воскообразного вещества.

В. В условиях, описанных в примере 2В, эмульгируют 10 г (1-этоксиэтокси)-5 холестена,

Со При соблюдении условий, описанных в примерах 2А.и С получают 85 мл культуры Mycobacterium spec NRRL В-3805 и производят смешение с 14 мл суспензии 3f)- (1 -этоксиэтокси) -5-холестена, что соответствует 0,5 г .3/Ь-(1-этоксиэтокси)-5-холестена, Пос ле этого инкубируют в течение последующих 120 м на приборе для встряхивания при . Объединенные культуры

экстрагируют хлористым этиленом,.экс ракт упаривают в вакууме, остаток смешивают с 70 мл метилового спирта, 12 мл воды и 6 мл концентрированного раствора НСб, после чего в течение 1 ч смесь нагревают-при температуре кипения с обратным холодильником. После охлаждения до продукт реакции осаждают прибавлением 100 мл воды и затем отфильтровывают. После перекристаллизации из ацетона получают 0,62 г $-андростен-3/2гол-17-она с т. пл. 138/Н8-149°С. П р и м е р 8.

A.38,7 г холестерина растворяют в 500 мл хлористого метилена, при , приоготовленный раствор смешивают с 25 мл окиси этилена и 0,5 мл эфирата трехфтористого бора. Реакционную смесь выдерживают в течение, ночи при комнатной температуре, затем производят экстрагирование водой сушку над сернокислым натрием и отго ку растворителя в вакууме. Неочищенный продукт (50 г) хроматографируют

на силикагеле при использовании в качестве элюирующего средства смеси гексана и этиловОРО эфира уксусной кислоты. В результате получают 10 г 3fb- (2-оксиэтокси) -5-холестена , с т. пл, 91-95°С.

B.При соблюдении условий, описанных в примерах 2А (и С) получают

85 мл культуры Mycobacterium spec NRRL 8-3805 и производят смешение с 1 мл суспензии 3/3-(2-оксиэтокси)-5-холёстена, что соответо вует 0,5 г (2-оксиэтокси)-5-холестена. После проведения культивации в течение 120 ч при на приборе для встряхивания производят обработку по аналогии с примером 1Д. В результате получают 2,1 г З/Ь (2-оксиэтокси)-5-андростен-17-она ст. пл. 173/175177С.

Пример 9.

A.Согласно примеру 1C, вводят во взаимодействие 20 г 5с -холестан-З/ЬОла с формальдегиддиметилацеталем, в результате чего получают

21,5 г 3/Ь-метоксимето си-5о -холестана. Перекристаллизованное из ацетона соединение имеет т. пл.-б5-68°С.

B.При соблюдении условий, описанных в примере 2В, эмульгируют

10 г 3/Ь-метоксиметокси-5о/.-холестана.

C.При соблюдении условий, описанных в примере 2А (и С) получают 85 мл культуры Mycobacterium spec NRRL 99 В-3805 и производят смешение с мл суспензии 3/1метоксиметокси 5о холестана (это соответствует 0,5 г 3/Э-метоксиметокси-5 о -холестана). После проведения инкубации в течение 120 ч при на аппарате для встря хивания производят обработку согласн примера 1Д. В результате получают 2,05 г 3/ метоксиметокси-5 андростан -17-она ст. пл. 97-98 С. Формула изобретения. 1. Способ получения производных адростан-17 она общей формулы E20(CHRi)/,0 где - простая или двойная связь; п - 1 или 2; R-, - водород; 8 К„ - низший ал кил или в том слу чае, когда также водород, отличающийся тем, что производное стерина общей формулы ВаОСеняОп где . , R, К2И л имеют указанные значения, а R - водород, метил или этил, ферментируют культурой микроорганизма Mycobacterlurn spec NRRL 8-3805, способной к отщеплению боковой цепи от стерина, с последующим выделением целевого продукта. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1, Патент США № , кл. 195.51, опублик. 1972.