Способ получения производных 5андростен-17-она Советский патент 1979 года по МПК C07J1/00 A61K31/5685 

простая или двойная связь, ферментируют культурой микроорганизмов семейства Mycobacteriura после чего целевые продукты вы,целяют известными методами,

Субмикрокультуру выращивают в условиях, обычных для выращивания этих микроорганизмовр в подходящей питательной среде при проветривании. Затем вещество формулы I добавляют к культуре (в подходящем растворител 2 в виде раствора или предпочтительно в виде эмульсии) и ферментируют до максимального превращения добавленного вещества.

Подходящими растворителями являются, например, метанол, этанол, монометиловый эфир гликоля, диметилформамид или диметилсульфоксид, Для эмульгирования например, вещество формулы I в микроформе или в раетвоРИтеле, смешивающемся с водой (ме(танол, этанол, ацетон, монометило1вый эфир гликоля, диметилформамид или диметилсульфоксид), растворяют при сильном перемешивании в воде (предпочтительно холодной), содержащей известные эмульгаторы.

Подходящими эмульгаторами являются неионогенные эмульгаторы, например аддукты окиси этилена или сложные эфиры жирных кислот полигликолей, такие, как терин, тагат, твин и шпан.

Желательно при ферментации братъ избыток 3-алкоксисоединений формулы I .

Пример 1. В колбу Эрленмейера на 2 л загружают 500 л стерильного питательного раствора, содержащего 1% дрожжевого экстракта, 0,45% динатрийгидрофосфата, 0,34% калийгидрофосфата и 0,2% твина 80, с рН 6,7, добавляют сухую культуру Mycobacteriura Spec, NRRL В 3805 и в течение 3 дней вбтрях вают {190 качаний/мин) при 30°С, 50 г холестерина суспендируют в 120 мл дихлорметана и 50 мл триэтилового эфира ортомуравьиной кислоты под током аргона, смещивают с 0,5 мл 70%-ной перхлоркислоты и перемащивают 4 ч при комнатной температуре. Затем В1лливают смесь в В(э перемащивают .2 ч, экстрагируют дихлорметаном, промывают экстракт, упривают в -вакууме, остаток перекристаллизовывают из метанола и получаю 43,25 г 3Р этокси-5 холестерина, Т.ПЛ-. .

К 25,0 г полученного 3 -этокси- 5-холестерина с 10 г тегина и 750 м:т воды добавляют едкий натр до рН 11, при 95° С и э 1yльгиpyют на ультрацен, трифуге в течение 5 мин. Эмульсию стерилизуют 20 мин при 120°С.

Колбу Эрленмейера на 500 мл заполняют 85 мл стерильного питательного раствора, состоящего из 2,0%

Corn steep Biguor, 0,3% диаммонийгидрофосфата и 0,25% твина 80, .с рН 7,0, вводят 5 мл культуры Мусо- bacteruem spec. NRRL В 3805 и 14 1л эмульсии 3 (Ь-этокси-5-холестен (Of 5 г 3 { г-этокси-5-холестена) и в течение 120 ч встряхивают (220 качаний/мин) при 30°С.

Затем ферментационную культуру экстрагируют тетрахлорэтаном,органическую фазу промывают, упаривают, остаток хроматографируют на колонке с силикагелем и получ:ают наряду с Of 025 г Зр-этокси-5-холестена после перекристаллизации из этилацетат 0,25 г Зр -этокси-5-андростен-1 7-она т.пл. 146-147°С.

il р и м е р 2, Как в примере 1, из 50 г стигмастерина - сырца лолучают Зр-этоксистигмастерин, (чистота 92%} f -2,5 г которого эмульгируют, 14 мл полученной эмульсии (0,46 г 3| |-этоксистигмастерина) в течение 120 г ферментируют культуро Mycobacterum spec. NRRL В 3805. Получают 0,1 г 3 3-этоксистигмастерина и 0,18 г Зр-этокси-Б-андростен-17 она, т.пл. 146-147с.

Пример 3. 25 г 4-холестен-3-она смещивают с 150 мл бензола/ 30 г гликоля и 0,5 г п-Голуолсульфо. кислоты и нагревают 24 ч с водяной ловущкой.

Смесь охлаждают, разбавляют бензолом, промывают бензольную фазу гидрокарбонатом натрия и водой, высушивают над сульфатом натрия и упаривают в вакууме.

Остаток перекристаллизовывают из смеси ацетон-гексан и получают 19,6 г 3,З-этилендиокси-5-холестена т.пл, 130-132С.

5 г. 3,З-этилендиокси-5-холестена растворяют при в 100 мл диметиформамида,

Как в примере 1, 100 мл культуры Mycobacterium spec. NRRL В 3805 смещивают с 1 мл приготовленного раствора 3,З-этилендиокси-5-холестена и ферментируют в течение 96 ч. Получают 0,01 г 3,З-этилендиокси-5-холестена и 0,013 г 3,3-зтилендиокси-5-андростен-Г7-она, т.пл. 164- 165°С.

Пример 4. Проводят опыт, как в примере 1.

25 г Зр-метокси-5-холестена эмульгируют.

100 мл культуры Mycobacterium spec. NRRL В 3805 инкубируют : 24 ч смещивают с 7 мл эмульсии Зр-Метокси-5-холестена (0,25 г Зр-метокси-5-холестена) и ферментируют 96 ч. Выделяют 110 мг Зр-метокси-5-андростен-17-она, т.пл. I4l--l42c.

Пример 5. Из 25 г 4-холестен-3-она подобно примеру 3 при применении 2,2-яиметилпропандиола вместо гликоля получают 17,3 г 3,3