Способ диагностики инфаркта миокарда Советский патент 1982 года по МПК A61B10/00 

(54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ИНФАРКТА МИОКАРДА

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимическим способам диагностики.

Известен способ диагностики инфа,ркта миокарда путем определения активности креатинфосфокиназы в цельной крови измерением флюоресценции креатина в комплексе с нингидрином 1.

Однако этот способ является довольно трудоемким. Количество крови, необходимой для анализа, довольно велико. При массовых обследованиях больных значительно увеличиваются затраты времени на производство анализа.

Целью изобретения является ускорение анализа и уменьшение количества используемой крови.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу диагностики инфаркта миокарда путем определения активности креатинфосфокиназы в цельной крови измерением флюоресценции креатина в комплексе с нингидрином, каплю исследуе.мой крОви инкубируют с каплей изотонического раствора креатинфосфата при 20-23°С, затем аликвоту образовавшегося креатина наносят на полоску фильтровальной бумаги, дважды обработанной 1%-ным раствором нингидрина, подсушивают, смачивают 20/о-ным раствором гидроокиси калия, далее определяют флюоресценцию образовавшегося пятна и при увеличении флюоресценции в опытной пробе по сравнению с нормой диагностируют инфаркт миокарда.

Способ осуществляют следующим образом.

,Q Каплю крови инкубируют с каплей изотонического раствора креатининфосфата при 20-23°С. При этом происходит одновременное оседание эритроцитов и накоплению в смеси продукта креатинофосфокиназной реакции - креатина.

15 Аликвоту креатина насасывают из верхней части мениска и наносят на полоску фильтровальной бумаги, дважды обработанную 1°/о-ным раствором нингидрина, подсушивают, смачивают 20°/о-ным раствором гидроокиси калия. Определяют флюоресценцию образовавшегося пятна при облучении, например, ртутной лампой с фильтром Уфе-3. При увеличении флюоресценции в опытной пробе по сравнению с нормой диагностируют инфаркт миокарда.

В качестве стандартного раствора формента используется кровь здорового человека. В качестве стандартов сравнения используют шкалу флюоресцирующих красителей, соответствующих по спектру флюоресценции креатину с оценкой высушенных на бумаге светящихся пятен в баллах.

Пример. В ряд углубленных гнезд пластины для гемаглютинации помешают по капле изотонической субстратной смеси, содержащей в 5 мл 0,06 М трисацетатного буфера рН 6,8:

Креатинфосфат2ч

Цистеин1 ч.

Аде нозинди фосфат

тринатриевая соль13ч.

MgSQ,-7H2O4ч.

NaCl11ч.

В другой ряд гнезд помещают контрольную смесь (не содержащую АДФ). В опытную (субстратную) и контрольную смеси добавляют по капле исследуемой крови (с добавкой гепарина), а также в отдельные гнезда кровь здорового человека (в качестве стандарта). Пластинку с пробами выдерживают при 20-23°С в течение 25 мин. Затем торцом полосы хроматографической бумаги (дважды обработанной спиртовым l /o-HbiM раствором нингидрина) касаются мениска смеси, насасывая пятно надосадка исследуемой крови в виде полукруга диаметром около 1 см. Пятно надосадка исследуемой крови и стандарта на бумаге слегка подсушивают, смачивают раствором 20% КОН, затем вновь подсушивают, после чего наблюдают зеленое свечение при облучении ртутО О 28

28

29 9 О

38 21 2100

ной лампой с фильтром УФЦ-3 (350 ммк), например, на аппарате для определения витаминов. При этом на шкале флюоресценции определяют интенсивность свечения в баллах пятен «опыта и «контроля и их соотношение. Если соотношение опыт/контроль лежит в пределах 1-2 (что соответствует активности КФК здорового человека), диагноз инфаркта исключают, если это соотношение 2-3 - предполагают сомнительный случай. При соотношении выше З-х ставят положительный диагноз.

Сопоставление результатов диагностики инфаркта миокарда представлено в таблице.

Способ КФК-микротест позволяет проводить диагностику инфаркта миокарда, результаты которой совпадают с диагностикой по известному способу и клиническому обследованию.

Способ пригоден для производства как одиночных, так и серийных определений. При этом на производство 10 анализов требуется 35 мин., тогда как при аналогично.м анализе по известному способу требуется 2,5 ч. Количество расходуемой крови по сравнению с известным способом снижено более чем в три раза. Инкубацию смеси можно проводить как при комнатной, так и при 37°С (для ускорения).

Таким образом, изобретение позволяет ускорить анализ, уменьшить количество крови, забираемой у больного. Способ обладает малой трудоемкостью, не требует сложной аппаратуры, может быть использован вне лаборатории.

28

100

305-19i6

Формула изобретения

Способ диагностики инфаркта миокарда путем определения активности креатинфосфокиназы в цельной крови измерением флюоресценции креатина в комплексе с нингидрином, отличающийся тем, что, с целью ускорения анализа и уменьшения количества используемой крови, каплю исследуемой крови инкубируют с каплей изотонического раствора креатинфосфата при 20-23°С, затем аликвоту образовавшегося креатина наносят на полоску фильтровальной бумаги, дважды обработанной 1%-ным раствором нингидрина, подсушивают, смачивают 20°/о-ным раствором гидроокиси калия, далее определяют флюоресценцию образовавшегося пятна и при увеличении флюоресценции в опытной пробе по сравнению с нормой диагностируют инфаркт миокарда.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Авторское свидетельство СССР № 531078, кл. G 01 N 33/48, 1974.