(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ 2-АРИЛ-1Н-ПЕРИМИДИНА Изобретение относится к способу получения новых производных перимидина, обладающих свойствами иммунод прессантов, которые могут найти применение в медицине. Известна реакция 1,8-диаминонафталина с производными бензойной кис лоты с образованием 2-арил-1Н-перимидинов f1. Цель изобретения - получение новых производных перимидина, обладаю щих ценными иммунодепрессивными сво ствами. Поставленная цель достигается способом получения производных 2-ар г1Н-перимидина общей формулы l HN -Т-Г где R - группа R - трифторметильная, трифторметил СИ-, трифторметилтио- или пентафтор
ИЛИ ИХ СОЛЕЙ тилоксигруппа, находящаяся в м- или -положении, ли их солей, который заключается в ом, что 1,8-диаминонафталин конденируют с производным общей формулы Н,/:-л Q где R имеет указанные значения и занимает указанные по зожения; X - фтор, хлор, бром или водород, с последующим выделением целевого продукта в виде основания или соли. Практическое использование пъ/а-лунодепрессантов разнообразно C2j. Иммунодепрессанты могут быть использованы при трансплантации органов , а также в терапий аутоиммунных заболеваний (аутоиммунная гемолитическая анемия, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, красная волчанка, липоидный гепатит, люпус- , нефтритис, гломерулонёфрит, почечный синдром, синдром Гудпасче, грануломатоз Вегенера, склородерма, болезнь Сезари, псориаз, увеит, ревматоидный артрит, язвенный колит, тироидоз и ложный орхит . Соединения формулы 1 могут вводиться перорально либо парентеральн Соединения имеют высокий терапевтический индекс, так что эффективные нетоксичные дозы в каждом случае относ/ятся к широкому диапазону, В за висимости от испытуемой системы этот диапазон для более активных членов ряда, испытанных на мелких лабораторных животньзх составляет 1, 25 мг/кг в сутки. Дозы других соединениП ряда больше, вплоть до 100 мг/кг в.сутки и более для мелких млекопитающих. Пример. Синтез хлоргидра ;та 2-(п-трифторметилфенил -1Н-перимидина. К 5,00 мл бензола при энергичном перемешивании и комнатной температуре одновременно добавляют раствор 31,64 г (0,20 моль) 1,8-диаминонафталина в 500 мл бензола и раствор 20,8 г 0,20 моль. п-трифторметилбензоилхлорида в 500 мл бензола. Пос ле перемешивания в течение 30 мин .отделяют твердый продукт, который 1 растирают с метиловым спиртом, получают 24,6 г целевого продукта (35%, т. пл. (с разложением); ;масс-спектр продукта т/е 312. Элементный анализ для (gH.,Na. Найдено,%: С 61,75; Н 3,59; N 8,0 01 10,45; F 16,70. Вычислено, %: С 61,99/ Н 3,47/ N 8,03; С1 10,17/ F 16,34. При мер 2. Синтез хлоргддрата 2-{м-трифторметилфенил -1Н-перимидина. 15,82 г (0,10 моль) 1,8-диаминона талина и 20,8 г (0,10 моль м-трифто . метилбензоилхлорида обрабатывают в соответствии с методикой примера 1. В результате получают 33,3 г (95,4%) хлоргидраха 2-(м-трифторметилфенил)-1Н-пиримидина, т. пл. 280°С (с разложением); масс-спектр т/ё 312. Элементный анализ для о. c-i 00. ц -, /1Т Вычислено,%: С 61,93; Н 3,47, N 8,03. . Найдено,%: С 61,68; Н 3,59/ N 8,13. Пример 3. Синтез фторгидрата 2-( п-трифторметоксифенил -1Н-У1ери мидина. В 25 мл толуола растворяют 1,52 (0,0096 моль) 1,8-диаминонафталина и затем декантируют. Растворяют 2,0 г трифторметоксибензоилфторида (0,0096 моль) в 25 мл толуола. Оба раствора одновременно приливают к . 25 мл толуола.. После перемешивания , реакционной смеси в течение 4 ч мето дом тонкослойной хроматографии уста. навливают, что реакция завершена. Реакционную смесь фильтруют и про дукт - желтое твердое вещество - су шат. Получают 2,72, г (81,4%) вещества, т. пл. 195 С с разложением , масс.-спектр т/е 328 с меньшими пиками при 361, что указывает на следы OCFC1.2.. Элементный анализ для Вычислено, %: С 62,07/ П 3,47; N 8,04; F 21,82. Найдено, %: С 61,81, Н 3,58, N 8,13; F 21,59. П р и м е р 4. Синтез хлоргидрата 2-(п-трифторметилтиофенил)-1Н-перимидина. Следуя методике примера 3, проводят реакцию 14,59 г (0,092 моль 1,8-диаминонафталина и 22,2 г .(о,092 моль п-трифторметилтиобензоиллорида. В результате получают 1,86 г продукта (91,0%), т. пл. 27бС (с разлохеением); масс-спектр /е 344. Продукт суспендируют в 500 шт олуола и перемешивают в течение 2 ч, затем отделяют фильтрованием получают 30,6 г (87,4%) продукта, . пл. 270-С (с разложением). BaTjSM овторно суспендируют в 750 мл толуоа, кипятят в течение 2 ч и отфильровывают 29,7 г (84,3%. Элементный анализ для . %%S; Вычислено,%: С 56,77/ Н 3,18/ 7,36. Найдено,%; С 56,57; Н 3,37/ N 7,40. П р и м е р 5. Синтез хлоргидрата 2-(п-пентафторзтоксифенил)-1Н-перимидина. Следуя методике примера 3, проводят реакцию 1,04 г (0,00656 моль) 1,8-диаминонафталина и 1,8 г 0,00656 моль) п-пентафторэтоксибен-. зоилхлорида. В результате получают 2/25 г продукта С82,7%Л т. пл. 240с (с разложением); масс-спектр т/е 378. Элементный анализ для Н 2,92; Вычислено,%: С 55,02; N 6,75; F . Найдено,%: С 54,82; Н 3,15, N 6 49 F 23 20 П р и м е р 6. Синтез 2,3-дигидро-2-(п-трифторметилфёнил)-1Н-перимидина. В течение 24 ч кипятят с обратным холодильником смесь 15,, 8 г (0,10 моль) йдБ-диаг-шнонафталина и 17,4 г (0,10 моль) п-трифторметилбен,эальдегида в 1 л ксилола. Растворитель упаривают в вакууме,в результате чего получают 37,5 г продукта, который после очистки на силикагеле при элпировании толуолом дает 22,93 г (73%) продукта, , „„ о ю-Юл- i-i uAyivici, т. пл. 11у-122 С; масс-спектр т/е з14v-iic A - ш/е Элементный анализ для Вычислено,%: С 68,78/ П 4,17/ N8,91.
Найдено, %: С 68,69/ Н 4, 40 , N 9,11.
Примеры 7-13, Гемагглютинин вая проба у мышей, пероральное введение.
Группе из пяти швейцарских мьзшей самцов весом около 20 г внутривенн вводили 5 X 10 эритроцитов овец. Эритроциты для этих инъекций готовили из крови ягнят.(собранной в раствор Алсевера/ путем трехкратной промывки 0,85%-НЕЛУ физиологическим раствором и повторно суспендировали в 0,85%-ном физиологическом растворе Девять-суточных доз каждого испытуемого соединения, растворенного в полиэтиленгликоле 400, вводили пероргшьно дозами по 0,1 мл,начиная за три дня до инъекции эритроцитов. Применяли несколько доз каждого соединени с двукратным увеличением. Контрольная группа лвлшей получала инъекции эритроцитов и девять суточных доз растЕ рителя вместо лекарства. Через шесть дней после инъекции антигенов у мьвией забирали кровь уколом в сердце и объединяли сыворотку из крови 1 аждой группы ашей (по пять мыяей.Группы сывороток после инактивации комплемента анализировали на содержание гемагглютинина, используя смеси последовательного двукратного разбавпения физраствором испытуемой сыворотки 0,5%-ной суспензией эритро:цитов овец, в пластмассовых конте нерах. После выдержки контейнеров в течение 3 ч при анализировали структуры гемагглютинации, Четырехкратное (75%-ное } или большее уменьшение антител в испытуемой сыворотке по сравнению с контрольной сывороткой считалось значительным. Результаты выражали в виде Р1инштальноп эффективной дозы (МЭЛ) - самой минимальной лекарственной дозы, которая дает 75%-ное или более значительное снижение антител.
Результаты испытания яеримидиновых соединений формулы .1 на их способность снижать образование антител приведены в табл. 1.
Азатиоприн {имуран) , который ис,пользуется в качестве клинического иммунодепрессанта, имеет МЭД 100 мг/кг f 9.
Примеры 14 - 19. Методика индивидуального анализа сыворотки.
Брали группы мышей из 10 особей. Мышей забивали, а Ьыворотку титровали индивидуально. Для каждой группы мышей вычисляли среднюю величину гемагглютинина и определяли достоверность ( р рпыта по сравнению с контрольной группой. Самая низкая . доза, которая значительно (,05) снижала титр антител, определяла конечную точку. Вещества вводили перорально либо подкожно в виде десяти суточных доз, начиная за три дня до инъекции красных кровяных телец. Вещества суспендировали в физиологическом растворе, содержащем 0,125% метилцеллюлозы и 0,2% неионного эмульгатора. .Через семь дней после инъекцииэритроцитов определяли антитела ( гемагглютинин). В табл. 2 приведены результаты, полученные в опытах на индивидуальных сыворотках с некоторыми соединениями формулы I.
И р и м е р ы 20 26. Реакция трансплантант-хозяин (ТПХ.
Клетки селезенки родственных мышей { С57В of ) инъецировали мышам F гибридной линии (C57Bot ХСЗН). Реципиентные мыиш не отторгали клеток селезенки, поскольку гибрид признава С57Ва/ -родственные антигены его гомозигодного родителя как свои. Инъекцируемые клетки, однако, вызывают реакцию на реципиентную ткань, обусловленную чужеродными СЗН антигенами. .Вследствие этого селезенка реципиента становится увеличенной. Иммунодепрессанты -подавляют или уменьшают это увеличение, ак, взвешивание селезенок дает меру ТПХ реакции и ее уменьшение под действие иммунодепрессантов.
Получали большое количество клето селезенки без обычно используемого ручного раздражения селезенок, применяя мешалки Горинга с обращенными режущими кромками. Двух периодо (по 6 с) перемешивания с похлопы1ванием селезенок достаточно, чтобы освободить клетки из соединительной ткани (использовались навески - 25 «селезенок мьшеП С57 В ot в 25 мл Физиологического раствора). Ткань отфильтровывали через марлю различной толщины. Полученные суспензии клеток стандартизовали путем подсчета в камере Леви-Хаузера до содержания нулеклестированных клеток 6ч 10 в 1 мл. Группам из десяти мышей С 57 В oLCBH С16-18 г; интраперитонально вводили по 1 мл суспензии донорных клеток. Лечение пероральным либо подкожным введением О,2 мл начинали за три дня до инъекций клеtoK и ежедневно продолжали в течение 1-3 сут. Контрольные животные получали лишь клетки и растворитель. Извлекали селезенки и взвешивали спустя десять дней после инъекций. Результаты выражены отношением веса селезенки к весу организма.
Поскольку инъекция С 57 В х СЗН клеток вызывала у реципиентных мышей небольшую спленомегалию, определение весов селезенок использовали для нахождения 100%-ного подавления ТПХ компонента при расчете процента подавления, достигаемого иммунодепрессантами. Результаты полученные при обработ ке известными иммунодепрессантагл, приведены в табл. 3. Однако сингенный и нормальный «контрольные значения только слегка меняются от опыта к опыту, поэтому в расчетах принята средняя величина ( 4, 8 , полученная из данных для четырех отдельных сингенетических контрольных групп (5,20 0,37 4,99 ± 0,39). 4,42 ± 0,13 и 4,66 ± 0,12) мышей, по 20 особей в каждой. Полученные результаты реакции трансплантант-хозяин с соединениями фор мулы I приведены в табл. 4. Прим ер 27. Подавление стимулированного артрита у крыс. Испытан хлоргидрат 2-(п-трифторметилфенил)-1Н-перимидин на, способность подавлять у крыс опухоль задн лапы и повреждение костей, вызванно стимулированной здемой. Чтобы количественно определить подавление опухоли задней лапы, вызванной стимулированным артритом, определяли две стадии воспаления:. а)первично и вторично инъецированная задняя лапа; б)вторично неинъецированная зад няя лапа, стадия, которая обыч но начинает развиваться приме но спустя девять дней после заражения инъецированной лапы Уменьшение воспаления последнего типа есть Показатель иммунодепресси ной активности. Для сравнительных о |нок применяли фенопрофен (30 мг/кг)
Соединение
Хлоргидрат 2-(п-трифторметилфенил -1Н-перимидина.
Хлоргидрат 2-(м-трифторметилфенил -1Н- перимидина
Фторгидрат 2-(п-трифторметоксифенил)-1Н-перюидина
Хлоргидрат 2-(п-трифторметилтиофенил)-1Н-перимидина ,
Хлоргидрат 2-(п-пентафторэтоксилфенил -1Н-перимидина
Таблица
МЭД, мг/кг f 9 как стандартное противовоспалительное соединение. Стимулированный артрит вызывали у мужских особей крыс Льюиса-Вистера (200-210 г) однократной субплантарной инъекцией в правую заднюю лапу (0,1 мл); 0,5%-ной суспензии убитого теплом лиофилизованного Mycobacteri urn tuberculosis в минеральном масле. Группа из пяти крыс (ТВ-контрольная получала только это лечение. Другая группа из пяти крыс не получала лечения (нормальная контрольная группа) . Каждое испытуемое соединение суспедировали в карбоксиметилцеллюлозе (1% и вводили крысам (группам из пяти крыс в каждой) в виде суточных пероральных доз 30 мг/кг, начиная со дня инъекции и продолжая в течение 17 дней после стимулирующей инъекции (17 доз). Объем лапы измеряли в ртутном устройстве, применяя датчикдавления Статама и вольтметр. Объем зараженных и незараженных задних лап измеряли на,2, 4, 7, 9, 11, 14, 16 и 18 сутки. После забоя животных на 18-ый день делали рентгеновские снимки. Измерения объема лап у незараженных животных, начиная с 9 и по 18 дней, приведены в табл. 4. Анализ рентгеновских снимков показал отсутствие поражения костей у животных, подвергнутых лечению хлоргидратом, 2-(п-трифторметилфенил)-1Н-перимидина, в то время как такое .повреждение было очень заметным для ТВ-контрольной группы. соединение . ,; Хлоргидрат 2-(п-трифторметилтио фенил)-1Н-перимидин , Лечение с помощью известного соединения 1-(б-Метокси-2-бензотиазолил)-3-фенилмочевина, 12,5 Мг/кг 13 (перорально; Нет(ТТ1Х контрольные) Нвт(П .контрольные) Нет (нормальные контрольные) при м е ч а н и
Соединение
Хлоргидрат 2-( п-трифторметилфенил -1Н-перимидин(перорально)
Контрольная
Примечания: а
Процент поМг селезенки давления. г/веса ыши (среднее + SE) Ряд ТПХ
4,75±0,42
101 53 77 96 78 6,62+1,17
2,5 5,67+0,51 6,2 4,96+0 ,-31 3,1 5,66+0,33 1,6
. . 8,64±1ДО
- тпхконтрольныё-обраОотанныёхТии процент подавления/ ТПХ контрольные -5 ;пконтрольные, в - р 0,00i; ,005, d ,0l; е - р 0,05. я: средние значения для группы из пяти мышей/ ТПХ контрольные-обработанные; ТПХ контрольные Syr, .контрольные (процент подавления ,01, сравнительно с ТПХ .контрольными); Syn - сингенные. Таблица2 СхемадозГ (р 0,05), мг/кг7 10 SSSr T«lll;l перорально Перорально50ТаблицаЗ Мг селезенкй/г веса Процент поорганизма + SE давления «WWCMBK 6,86+0,8074 11,55 + 0,01О 5,20 + 0,37100 4,.16 + 0,17 Таблица4 Формула изобретения Способ получения производных 2-арил-1Н-перимидина общей форму 1 : I ,HJJ-R Rjf -трифторметильная, трифтормет ОКСИ-, трифторметилтио- или пент этилоксигруппа, находящаяся в мили И-положении, или их солей отличающи с я тем, что 1,8-диаминонафтали с производным общей конденсируют формулы / У где RI имеет указанные значения и занимает указанные положения; Х- фтор, ХЛОР, бром или водород, с последующим выделением целевого продукта в виде основания или соли. Приоритет по признакам 19.12.77при RJ-п- или м-трифторметильная группа; X имеет указанные значения. 21.09.78при или м-трифторметилокси, п- или м-трифторметилтиоили п- или м-пентафторэтилоксигруппа. Источники информации, принятые во вниманиепри экспертизе 1.Патент США № 3528981, кл. 260-2564, опублик. 1970. 2.Машковский М.Д. Лекарственные средства. М., Медицина, 1978.
