Способ получения октапептидов Советский патент 1983 года по МПК C07K7/06 A61K38/08 

(5) СПОСОБ ПОге/ЧЕНИЯ ОКТАПЕПТИДОВ

Изобретение относится к получению октапептидов, обладающих биологической активностью, которые могут йайти применение в медицине для диагностики и терапии.5

В пептидной химии широко используется способ получения пептидов путем отщепления защитных групп от соответствующих пептидных производных тиолизом (в случае дйнитрофёнильной защит-to ной группы гистидима) Cl3 и каталитическим гидрированием (в случае, например, бензилоксикарбонильной группы, нитрогруппы и т.п.) 2;

Использование известных методов is позволяет получить новые соединения, обладающие интересными фармакологическими свойствами.

Цель изобретения - получение новых октапептидов, расширякщих арсенал го средств воздействия на живой оргаi НИЗМ.

Поставленная цель достигается тем, что согласно способу получения октапептидов общей формулы

Х-Arg-Vat-Ty г-1 Веи-Н i s-P ro-Y-OA (I),

где

Y-остаток молочной кислоты, или 1-2-окси-3-метилвалериановой

кислоты; . А-водород, этил,

защищенный октапептид общей формулы Z-X-Arg(N02)-Vat-Tyr(Bzl)-1leu-His(Dnp)-Pro-Y-F , (И) где Z - бензилоксикарбонил; X и Y имеют 1. указанные значения; Bzt - бензил; Опр - динитрофенил;

F - этил, бензил, . обрабатывают 2-меркапто.этанолом для отщепления дйнитрофёнильной защитной группы гистидина, а затем остальные защитные группы отщепляют каталитическим гидрированием.,

Синтез исходных защищенных октапептидов осуществляют ступенчатым наращиванием пептидной цепи с использованием пентафторфениловых эфиров соответствующих N- трет.бутилоксикарбониламинокислот. В приведенных примерах использова ны следующие сокращения: Lac - L-молочная кислота; HMV - L-2-окси-З-метилвалериановая кислота; PfP - пентафторфенил; Вое - трет.бутилрксикарбонил; BzE - бензил; Z - бензилоксикарбонил; Опр - динитрофенил. При тонкослойной хроматографии ис пользуют пластинки с силикагелем (Мерк) и следующие смеси растворителей:1гексан:этилацетат k., 2этилацетат:пиридин:уксусная кис лота: вода 20:6:11/95:5, 3этилaцetaт:пиридин:уксусная кис лота: вода 20:6:11/90:10, i этилацетат:пиридин:уксусная кис лота:вода 20:6:11/80:20, 5этилацетат:пиридин:уксусная кис лота:вода 20:6:11/70:30 6н-бутанол:уксусная кислота:вода :1:5 (верхняя фаза) 7н-бутанол:уксусная кислота:пири дин: вода 30:6:20:2 8н-бутанол:этилацетат:уксусная кислота:вода 1:1:1:1. Для обнаружения пятен используют раствор нингидрина и смесь хлортолидин/йодистый калий. Очистку конечных октапептидов осу ществляют с помощью колоночной хрома тографии на колонке, содержащей О ,5 л карбоксиметилцеллюлозы (КМС-52), пред варительно уравновешенной 0,01 Мраст вором уксуснокислотуого аммония. Очистку осуществляют в режиме градиентного элюирования с применением 1,5 л 0,01 М и 1,5 л О,Ц М растворов уксуснокислого аммония, которые пода ют через градиентный смеситель со ско ростью 25. мл/ч. Фракции, содержащие чистый конечный продукт, подвергают лиофилизации. Пример 1. Первая стадия. Раствор 2,15 г (10 ммоль) Вос-Рго -ОН в 10 мл безводного тетрагидрофурана охлаждают до 0°С и прибавляют к нему при перемешивании порциями в течение 10 мин 2, г 05 ммоль) карбонилдиимидазола. Затем смесь добавляют порциями в течение 15 мин при 0°С к раствору 1,8 г (10 ммоль) бензилового эфира молочной кислоты в 10 мл безводного тетрагидрофурана, перемешивают 30 мин при 0°С, 2 ч при и выдерживают в течение ночи в холодильнике. Затем отгоняют растворитель, остаток растворяют в 30 мл хлороформа, экстрагируют 1 н. раствором соляной кислоты (k раза по 10 мл), водой, 10 мл водного раствора кислого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают до посгоянного веса. Остаток сушат над Р205Получают 3,0 г Boc-Pro-Lac-OBzt (80% от теоретического выхода) ,32; ,57. Вторая стадия, Z-Sar-Arg(N02)-Va -Tyr(Bzf)-lu-flis(Dnp)-Pro-Lac-OBzl. 2,35 г (7,5 ммоль) Boc-Pro-Lac-OBzC растворяют в 15 мл 3 н. раствора НС 1 в диоксане,- выдерживают 15 мин. Добавляют 30 мл безводного эфира упаривают досуха. Полученный в остатке хлоргидрат свободного дипептида HCf«.H-Pro-Lac-OBzf ,37 растворяют в 20 мл диметилформамида, доводят рН раствора до 8 прибавлением триэтиламина и прибавляют .2,9 г (5 ммоль) Boc-His(Dnp)-OPfp. Смесь перемешивают в течение 1 ч при комнатной температуре и рН 8,0, отгоняют растворитель. Остаток растворяют в этилацетате, экстрагируют 10%-ным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, водным раствором кислого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием, отгоняют растворитель. Полученный в остатке защищенный трипептид Boc-Hfs(Dnp)-Prd-Lac-OBzE (,77) растворяют в 10 мл 8 н. раствора HCt в диоксане, через 20 мин прибавляют безводный эфир, выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свободного трипептила HCfH-Hfs(Onp)-Pro-Lac-OBz0 (,10) растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора прибавлением триэтиламина доводят до 8,0 и добавляют 2,78 г (7,5 ммоль) Boc-lfe-OPfp. Реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при рН 8,0, отгоняют растворитель, остаток растворяют в этилацетате, экстрагируют 10%-ным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, раствором кислого углекислого натрия и водой. Затем органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растирают с н-гексаном и отфильтровывают. Полученный защищенный тетрапептид Вое-I е-Нis-(Опр)-Рго-Lac-ORzf (,67) растворяют в 10 мл 9 н. растворе НС1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный Эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного тетрапептида HC1-H-lEe-His(Dnp)-Pro-Lac-OBzE (,52} отделяют, растворяют в 20 мл диметил формамида, рН раствора прибавлением триэтиламина доводят до 8,0 и прибав ляют 3,2 г (6 ммоль) Boc-Tyr(Bzt)-OPfp. Смесь перемешивают при рН 8,0 30 мин, упаривают, остаток растворя.ют в этилацетате и раствор смешивают €С 0,22 мм Ы,М-диметиламиноэтанола, выдерживают 15 мин. Затем раствор экстрагируют 10%-ным раствором лимс ной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, водой, раствором кис лого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растирают со смесью н-гексан-эфир (8:2) и отфильтровывают. Полученный защии енный пентапептид Вое-Tyr(Bzt)-lEe-H s(Dnp)-Pro-Lac-OB2t {RY-0,72) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир и выпавший осадок хлоргидрата свободного пентапептида HCt-.H-Tyr(BzE)-lfe-His(Dnp)-Pгo-Lac-OBzlJ растворяют в 20 мл диме тилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2i6 г (6,8 ммоль) Boc-Vat-OPfp. Смесь перемешивают. 1 ч при рН 8,0 и. упаривают. Остаток растворяют в этилацетате и раствор экстрагируют как описано выше. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают Полученный защищенный гексапептид Boc-Vat-Tyr(Bzf)-l e-His(Dnp)-Pro-Lac-OBzB (,83) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС€ в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного гексапептида HCtH-VaE-Tvr(Bzt)-l e-His(Dnp)-Pro-Lac-OBz (,65) растворяют в 20 мл димётилформамида, рН раствора доводят до 8,0, прибавлением триэтиламина, и прибавляют 2,2 г (5 ммоль) Boc-ArglN -OPfp. Смесь выдерживают 1 ч Лри рН 8,0, разбавляют мл,хлороформа и экстрагируют 10 --ным раствором лимон ной кислоты, 1 н. раствором соляной 9 66 . . кислоты и водой. Органическую фаэу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растирают со смесью этанола и эфира (1:1) и продукт oтф tяьтpoвывaют. Полученный за-. щищенный гептапептид Boc-Arq(NO§)-Vat-Tyr(BzE)-lte-Hfs(Oпp)-Pro-Lac-OBzl (,65) растворяют в 10 мл 8 н. раствора HCt в диоксане, через прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного гептапептида НСС« H-Aгg(N02)-VaE-Ty (Bz е) - I fe-H IS (Dnp)-Р го-Lac-OBzl (R 0,4о) отфильтровывают, промывают эфиром и . Затем полученный продукт растворяют в 15 мл диметилформамида, рН раствора прибавлением триэтиламина доводят до 8,0 и добавляют 1,8 г (5 ммоль) Z-Sar-OPfp. Смесь перемешивают 30 мин при ,0, разбавляют 60 мл хлороформа и экстрагируют водой. Органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают безводным эфиром и продукт отфильтровывают. В итоге получают 2,12 г (29,6 от теоретического выхода, рассчитанного на гистидин) Z-Sar-Arg(NO)-VaC-Tyr(Bz8)-lFe-Hf5(Dnp)-Pro-Lac-OBzf Т. пл. 204-21 (,). Третья стадия. H-Sar-Arg-Vat-Tyr-IEe-His-Pro-Lac-OH. N0 1,t5 г (1 ммоль) Z-Sar-Arg-Vaf-Tyr(Bzt)-lfe-His(Dnp)-Pro-Lac-OBzE растворяют в 5 мл диметилформамида и смешивают с 2,3 мл (ЗО ммоль) 2-меркаптоэтанола. Смесь перемешивают 1 ч прибавляют безводный эфир, выпавший осадок растворяют в метаноле и вновь осаждают, прибавляя эфир. В итоге получают 1,1 г (89% от теоретического выхода) Z-Sar-Arg(NOo)-Vat-Tyr(Bzf)-lEe-HIs-Pro-Lac-OBzt (,60). Полученный продукт растворяют в АО мл смеси метанола, уксусной кислоты и воды (5:1:2). Раствор смешивают с 0,6 г loi-Horo палладиевого катализатора на активированном угле, после чего через реакционную смесь при интенсивном пе;ремешивании пропускают в течение 0 ч газообразный водород. Затем катализатор отделяют фильтрованием, промывают смесью метанол-уксусная кислота-вода (5:1:1) и объединенный фильтрат упаривают. Остаток растирают с безводным этанолом и продукт отфильтровывают. Получают.0,7 г (Bk% от теоретического выхода) H-Sar-Arg-VaC-Tyr-I Ее-His-Pro-Lac-OH, который подвергают очистке по описанной.выше общей методике. В итоге получают целевой продукт,, имеющийследующие характеристики: ,17i .iO; ,21. Аминокислотный анализ: Pro 1,0 (l); Va0 1,0 (f); I Ее 1,03 (D; Tyr 0,85 (); His 0,85 (I); Arg 0,96 (l); Sar 1,0 (I). -101,(,25; 1 H. уксусная кислота). П p и м e p 2. Sar-Arg-Vat Tyr-l e -His-Pro Lac-0€t Первая стадия. . k,3 r (20 ммоль) Boc-Pro-OH раство ряют в 20 мл безводного тетрагидрофурана, раствор рхлаждают до и в те чение 10 мин к нему прибавляют порциями 4,8 г (30 ммоль) карбонилимидазола. Затем при 0°С по каплям прибавляют охлажденный до 0°С раствор 2,1 г (20 ммоль) этилового эфира молочной кислоты в тетрагидрофуране. Реакционную смесь перемешивают 30 мин при О С 2 ч при 20 С и оставляют на ночь. Затем.тетрагидрофуран удаляют отгонкой. Остаток растворяют в kO мл этилацетата и раствор экстрагируют 1 н. раство ром соляной кислоты (2 раза по 15мл), водой, раствором кислого углекислого натрия (2 раза по 20 мл) и водой. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток сушат в эксикаторе до постоянного веса. В итоге получают 2,,22 г (36% от теоретического выхода) Boc-Pro-Lac-OEt ,77; ,36. Вторая стадия Z-Sar-Arg(N02)-Va -Tyr(Bz)-lEe-His(Dnp)-Pro-Lac-OEt 1,8 г (6 ммоль) Boc-Pro-Lac-OEt растворяют в 8 мл 7,5 н. гзствора HCt в диоксане, через 15 мин прибавляют 30 мл эфира и упаривают. Полученный в остатке НСЬ H-Pro-Lac-OEt (,31 растворяют в 15 мл диметилформамида, рН раствора прибавлением триэтиламина доводят до 8,0, и добавляют 2,9 г (5 ммоль) Boc-His(Dnp)-OPfp. Смесь выдерживают 1 ч, упаривают и остаток растворяют в этилацетате. Полученный раствор экстрагируют 10%-ным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, раствором кислого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над безводПоным сульфатом натрия и упаривают лученный ,в остатке защищенный трипептид Boc-His(Dinp)-Pro-Lac-OEt ( 0,69) растворяют в 20 мл 7,5 н. врра НСВ в диоксане, через 20 мин прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного трипептида HCtvH-His(Dnp)-Pro-Lac-OEt ( 0,18) растворяют в 15 мл диметилформамида, рН.раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и добавляют 3,0 г (7,5 ммоль) Вос-1Pe-OPfp. Смесь выдерживают при ,0 30 мин, упаривают и остаток растворяют в этилацетате. Полученный раствор экстрагируют как описано выше. Органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают со смесью эфир-н-гексан (2:8) и продукт отфильтровывают. Полученный защищенный тетрапептид Boc-lEe His (Dnp).-Pro-Lac-OEt (,36) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного тетрапептида НС1 Н lge-His(Dnp)-Pro-Lac-OEt (Rt|Lo,27) растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и добавляют 3,24 г (7 ммоль) Вос-Туг(BzE)OPfр. Смесь выдерживают 30 мин при ,0 и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате и раствор смешивают с 0,22 мл М,М-диметиламиноэтиламина. Через 40 мин раствор экстрагируют как описано выше. Органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с н-гексаном и продукт отфильтровывают. Полученный защищенный пентапептид Boc-Tyr(BzE)-lEe-His(Dnp)-Pro-Lac-OEt (,64) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного пентапептида HC -H-Tyr(Bzg).-lfe-His(Dnp)-Pro-Lac-OEt (,33) растворяют в 15 мя диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2,1 г (5,5 ммоль) Вос-Val-OPfp. Смесь выдерживают 30 MWH при ,0, упаривают и остаток растворяют в этилацетате. Полученный раствор экстрагируют как описано выше. Органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с н-гексаном и продукт отфильтровывают. Полученный защищенный гексапептид Boc-Vat-Tyr(BzE)-l Ее-His(Onp)-Pro-Lac-OEt (,76) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС1 в диоксане., через 15 мин прибавляют безводный эфир и выпавший в осадок хлоргидрат свободного гексапептида HClH-Va -Tvr{Bzl2)-lFe-His(Dnp)-Pro-Lac-OEt () растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0, прибавлением триэтил амина и смешивают с 3.96 г (6 ммоль) Вос-Агд(N02)OPfр. Смесь выдерживают при рН 8,0 1 ч разбавляют 60 мл хлороформа и экстрагируют как описано выше. Органическую, фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с безводным этиловым спиртом и продукт отфильтровывают. Полученный защищенный гептапептид Вос-Агд (N02)- /at-Tyr(B2t) -1 Ee-Hi S (Dnp)-Pro-Lac-OEt (,78) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС1 в дйоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир, выпа.вший в осадок хлоргидрат свободного гептапептида рас HCfH-Arg(N02)-VaE-TyciBzt)-lEe-His (Onp)-Pro-Lac-OEt ,56J растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2,12 г (5,5 ммоль) Z-Sar-OPfp. Смесь выдерживают 30 мин при рН 8,0 и разбавляют 60 мл хлороформа. Полученный раст вор экстрагируют как описано выше. Органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. Ос таток растирают с эфиром, продукт от фильтровывают и перекристаллйзовывают из этанола.. В итоге получают 1,21 г (17,5% от теоретического выхода, рассчитанного на гистидин) Z-Sar-Arg(N02)-VaE-Tyr (BzE)-lEe-Hi5(Dnp)-Pro-Lac-OEt. Т. пл 208-2 12° С; ,5. Третья стадия. H-Sar-Arg-VaC Tyr-1te-H1s-Pro-Lac-OEt. 1,21 г (0,88 ммоль) Z-Sar-Arg(N02 -Valf-Ту г-1 te-H i s (Dnр)-Р го-Lac-OEt растворяют в 5 мл диметилформамидй и полученный раствор смешивают с 3 мл 2-меркаптоэтанола. Смесь перемешиваю 1 ч, прибавляют безводный эфир, выпавший осадок отфильтровывают, промывают эфиром, растворяют в метаноле и вновь осаждают, прибавляя эфир. В итоге получают 0,9 г(89% , теоретического выхода) Z-Sar-Arg(M02 -Val-Tyr(BzC)-lfe-His-Pro-Lac-OEt (,59). Полученный продукт растворяют в смеси, содержащей метанол, уксусную кислоту и воду(5: 1 :1). Раствор смешивают с 0,5 г 10 -ного палладиевого катализатора на активированном угле и при интенсивном перемешивании через раствор пропускают в течение 20 ч газообразный водород. Затем катализатор отфильтровывают, промывают смесью метанол-уксусная кислота-вода (3:1:1) и объединенный фильтрат упаривают. Остаток растирают со смесью этаНОЛ-эфир и продукт отфильтровывают. В итоге получают 0,72 г (9б% от теоретического выхода) H-Sar-Arg-VaE-Туг-Ite-His-Pro-Lac-OEt, который подвергают очистке по описанной выше общей методике. В итоге получают це-левой продукт, имеющий следующие характеристики: , ,53; /О Д.-f R -О,36. Аминокислотный анализ: Pro 1,02 (I); Val 0,97 (i); I Ре 1,08 (i); Туг 0,91 (I); His 1,00 (I); Arg T,07 (I); Sar 1,0 (I).cij20 -73,5° (C. 0,; 1 H. уксусная кислота). n p и м e p 3. Sar-Arg-Va -Tyr-lEe-His-Pro-HMV-OH. Первая стадия. H-HMV-OBzf. 7,.12 г (kQ ммоль) H-HNV-ONa суспендируют в 10 мл этилацетата и сус- пензию смешивают с 20 мл н. раствора НС в этилацетате Смесь перемешивают 2 ч, затем доводят рН смеси до 7прибавлением триэтиламина, выпавший осадок отфильтровывают, промывают этилацетатом (2 раза по 20 мл). Значение рН объединенного фильтрата доводят до 6,0 прибавлением триэтиламина и добавляют 8 мл (60 ммоль) бензил бромида и 8,4 мл (60 ммоль) триэтиламина. Смесь кипятят 8 ч, образовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат экстрагируют водой, 1 н. раствором соляной кислоты, 5%-ным раствором кислого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над безводным сульфатом натрия и упаривают. 8итоге получают 5.6 г (63% от теоретического выхода) H-HMV-OBZ0, который очищают перегонкой в вакууме. Т. кип. l8i}-l86°C/5 мм рт. ст.; ... 13,9° ( ацетон).. Вторая стадия. Boc-Pro-HMY-OBzl. 2,7 г (12,5 ммоль) Вос-Рго-ОН растворяют в 15 мл безводного тетрагидрофурана, раствор охлаждают до и прибавляют к нему небольшими порциями в течение 10 мин 3.2 г (20 ммоль) карбонилдиимидазола. Смеск смешивают при 0°С с раствором 2,8 г (12,5 ммоль) H-HMV-OBzl в io мл тетрагидрофурана, перемешивают 30 мин при 0°С, 2 ч при и оставляют на ночь в холодильнике. Зотем тетрагидрофуран отгоняют остаток растворяют Ь 40 мл этилацета та. Полученный раствор экстрагируют 1 н. раствором соляной кислоты (2 ра за по 15 мл ), водой, раствором кислого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над без водным сульфатом натрия и упаривают. Остаток сушат при до постоянного веса. В итоге получа1рт 3,19 г (6S% от теоретического выхода) B6c Pro-HNV-OBzl R 0,90; ,33. Третья стадия. Z-Sar-Arg{N02)-VaE -Tyr(BzlD-lEe-His(DnD}-Pro-HNV-UBzl 2,52 г (6 ммоль) Boc-Pro-HMY-OBzl растворяют в 8 мл 8 н. раствора НС1 в диоксане, через 15 мин прибавляют 30 мл безводного эфира и упаривают. Полученный в остатке хлоргидрат свободного дипептида НС1 H-Pro-HMV-OBzl (,30) растворяют в 15 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и прибавляют 2,9 г (5 ммоль) Boc-His(Dnp) -OPfp. Смесь выдерживают 1 ч при рН 8,0, упаривают и остаток растворяют в этилацетате; Полученный раствор экстрагируют 1 н. раствором соляной кислоты, водой, раствором кис лого углекислого натрия. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Полученный в остатке защищенный трипептид Boc-His(Dnp)-Pro-HHV-OBzl (,67) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС1 в диоксане, через 20 мин прибавляют безводный эфир, выпавший в осадок хлоргидрат свободного трипептида HCbH-His(Dnp)Pro-HMV (,18) раст воряют в 15 мл диметилформамида, доводят рН раствора до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2,4 г (6 ммоль) Вос-1Ce-OPfp. Смесь выдерживают 1 ч при ,0 и упаривают. Остаток растворяют в хлороформе и раствор экстрагируют водой, 1 н. рас вором соляной кислоты и .раств ром кислого углекислого натрия. Орга ническую фазу сушат над безводным сер нокислым натрием и упаривают. Остато растирают с н-гексаном, гексан отделяют декантацией, а остаток растирают с эфиром и продукт отфильтровывают. Полученный защищенный тетрапептия - Boc-lPe-His(Dnp)-Pro-HMV-OBzC (,65) растворяют в 10 мл 8 н. раствора HCt в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир, выпавший в осадок хлоргидрат свободного тетрапептида - НСЬН-I Ее-Н is(Dnp)-Pro-HMY-OBzl (,27) растворяют в 15 мл диметилформамида, доводят рН раствора до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2.,9б г Boc-Tyr(Bzf)-OPfp. Смесь выдерживают 30 мин при рН 8,0 и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате. К полученному раствору прибавляют 0,22 мл М,М-диметиламиноэтиламина, выдерживают 10 мин и экстрагируют . водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, 5%-ным ра/гтвором кислого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и упаривают. Остаток растирают с н-гексаном и продукт отфильтровывают. Полученный защищенный пентапептид Boc-Tyr BzK)-lEe-His(Dnp)-P.ro-HMV-OBzt (,75) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир, выпавший в осадок хлоргидрат свободного пентапептида HCt-H-Tyr Bzn-lPe-His(Dnp)-Pro-HMV-OBzU (,60) растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2,6 г (6 ммоль) Boc-Val-OPfp. Смесь выдерживают 1 ч при рН 8,0 и упаривают. Остаток растворяют в хлороформе и раствор экстрагируют 10%-ным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, раствором кислого углекислого натрия и водой. Органическую фазу сушат над безводным сернокислым натрием и vnaривают. Отсаток растирают с н-гексаном и продукт отфильтровывают. Получ енный защищенный гексапептид Вос-Val -Tyr(B2L)-lEe-His(Dnp)-Pro-HMV-OBzl (.,71) растворяют в 10 мл 8 н. раствора НС 1 в диоксане, через 15 мин прибавляют безводный эфир, выпавший в осадок хлоргидрат свободного гексапептида HCC-H-VaC-TyrCBzf)-lEe-His(Dnp)-Pro-HMV-OBzf , растворяют в 20 мл диметилформамида, рН раствора доводят до 8,0 прибавлением триэтиламина и смешивают с 2,64 г (6 ммоль) Boc-Arg(N02)-OPFp. Смесь выдерживают 1 ч при рН 8,0 и упаривают. Остаток растворяют в хлороформе и раствор экстрагируют водным раствором лимонной кислоты, 1 н, раствором соляной кислоты, водным