Способ получения метиловых эфиров октапептидов Советский патент 1983 года по МПК C07K7/06 A61K38/08 

Изобретение относится к.способу получения новых соединений, а имен но метиловых эфиров октапептидов, и может быть использовано в медицине. Известен способ полумения пептидов путем отщепления динитрофени ной защитной группы .от соответству ющего защищенного пептида в среде диметилформамида под действием 2-м каптоэтанола в течение 1,5-2,0 ч п комнатной температуре fl . Известен также способ удаления защитных групп в пептидах путем ка талитического гидрогенолиза в водн органической среде в присутствии 10 -ного палладия на активированно угле 2 J. Цель изобретения - получение но вых пептидов, обладающих ценными фармакологическими свойствами. Поставленная цель достигается те что согласно способу получения метиловых эфиров октапептидов общей формулы X-Arg-VaE-Tyr-lPe-His-Pro-Y-OMe где X - Sar, оксиацетил; Y - lEe, Thr(Me), Thr, AEa, от метилового эфира защищенного октапептида общей формулы Z-Arg(N02)-VaB-Tyr(Bzl2)-lBeHis(Dnp)-Pro-Y-OMe, (Q где Z - бензилоксикарбонил; N0 - нитрогруппа; BzE - бензил; Dnp - динитрофенил; X и Y имеют указанные значения, отщепляют динитрофенильную защитную группу обработкой 2-меркаптоэтанолом, а затем удаляют остальны защитные группы путем каталитическ го гидрогенолиза. Используемые в качестве исходных веществ метиловые эфйры октапе тидов общей формулы (II) получают известными методами пептидной химии путем ступенчатого наращивания пептидной цепи с использованием пентафторфениловых эфиров защищенных аминокислот l . Для защиты боковых функциональных групп применяют защитные группы, стабильные в условиях ацидолиз проводимого для отщепления защитных групп после завершения реакции образования пептидной связи. Для временной защиты гидроксильной гру пы тирозина используют бензильную группу (BzF), для защиты имидазольного цикла гистидина - динитрофенильную грулпу (Dnp) и. для защиты гуан,идиногруппы аргинина - нитро группу (N02). Эти защитные г руппы устойчивы к действию кислот, вследствие чего трет-бутилоксикарбонильная группа (БОС), используемая для защиты о(.-аминогрупп в, процессе наращивания пептидной цепи, отщепляется селективно без затрагивания названных защитных групп. Получение новых метиловых эфиров октапептидов общей формулы (I) иллюстрируемся приведенными примерами, где сокращение НОАА - оксиуксусная .кислота. Тонкослойную хроматографию проводят на пластинках с использованием следующих систем растворителей: °1. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота -вода 20:6:11 )98:2. 2.Этилацетат; (пиридин - уксусная кислота - вода 20:6:11)95:5. 3.Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20:6:11)90:10. k. Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20:6:11)80:20. 5.Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20:6:11)70:30. 6.Этилацетат: (пиридин - уксусная кислота - вода 20:6:11 )60:40. 7.и-БутаНОЛ:уксусная кислота:вода А:1:5. . . .. 8.н-Бутанол:уксусная кислота: пиридин: вода 30:6:20:2. 9.н-Бутанол:этилацетатгуксусная кислота:вода 1:1:1:1. 10. н-Бутаэтилацетат:.(пиридин уксусная кислота - вода20:6:11 75:25. Тонкослойные хроматограммы проявляют нингидрином или раствором хлортолидин с йодистым калием. Очистку целевых продуктов проводят общепринятым методом: 0,5 г пепти-, да в k мл 0,01 М раствора ацетата аммония пропускают через колонку, содержащую 0,5 л карбоксиметилцеллюлозы (СМС-52) и предварительно уравновешенную 0,01 М раствором ацетата аммония. Продукт очищают градиентным элюированием с использованием 1,5 л 0,01 М раствора ацетата аммония и 1,5 л 0, М раствора ацетата аммония. Скорость элюирования 25 мл/ч. Собирают фракции по 10 мл и детектируют с помощью прибора LKB Uvlполучают лиофилизацией основной фра ции. Пример. Метиловый эфир (Sar, I Ее)-ангиотензина 11. Стадия 1, Boc-Arg(N02)-VaErTyr(Bz IEe-His(Onp)-Pro-lЕе-ОМе. К 1,36 г f7,5 ммоль) хлоргидрата метилового эфира изолейцина в хлороформа добавляют 1,05 мл триэтиламина и 1,90 г (5 ммоль) пеи тафторфенилового эфира БОК-пролииа. Смесь перемешивают 30 мин при посто янном рНи экстрагируют водой, водным раствором лимонной кислоты И водой. Органический слой сушат над сульфатом натрия и упаривают. Полученный в остатке защищенный дипепти (,8) растворяют в 5 мл В н. со ляной кислоты в диоксане. Через 15 мин раствор разбавляют 20 мл без водного эфира и упаривают. Полученный в остатке хлоргидрат дипептида (R:,.0,46) растворяют в 30 мл хлоро форма, добавляют триэтиламин до рН В и 4,36 г (7,5 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-гистидина. Через 1 ч к раствору добавляют 0,ВЗ мл N,М-диметиламиноэтиламина и через 15 мин .экстрагируют водным раствором лимонной кислоты, насыщенным раствором хлористого натрия, 1 н. раствором соляной кислоты, водным раствором бикарбоната натрия и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Полученный в остатке защищенный трипептид (Rr 0,45) без очистки растворяют в 10 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане.- Через 15 мин раствор разбавляют безводным эфиром, выпавший в осадок хлоргидрат свободного трипептида отфильтровывают, промывают эфиром и растворяют в 15 мл диметилформамида. К полученному рас вору добавляют триэтиламин до рН & и 2,Л г (6 ммоль) пентафторфенилово го эфира БОК-изолейцина. Смесь выдерживают 30 мин при постоянном рН и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате. Растворпромывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают со смесью эфир - гексан (1:9). и отфильтровывают. Полученный защищенный тетрапептид (R--0,31) раной кислоты в диоксане. Через 15 мин добавляют безводный эфир и выпавщий при этом в осадок хлоргидрат свободного тетрапептида отфильтровывают. Полученный тетрапептид (Р; 0,38) растворяют в смеси, состоящей из 10 мл диметилформамида и 20 мл хлороформа, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,96 г (5,5 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-0-бензил-Тирозина. Смесь выдерживают при постоянном рН 15 мин и упаривают.. Остаток растворяют в этилацетате, добавляют 0,22 мл М,М-диметиламиноэтиламина и через 10 мин промывают водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты и . водой. Органическую фазу сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полученный защищенный пентапептид (,52) растворяют в 10 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 15 мин добавляют безводный эфир и выпавший осадок отфильтровывают и промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свободного пентапептида (,8) растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,3 г (6 ммоль) БОК-пентафторфенилового эфира БОК-валина. Смесь выдерживают при постоянном рН 1 ч и упаривают.. Остаток растворяют в хлороформе и полученный раствор, промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты, водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полученный защищенный гексапептид (,3) растворяют в 8 н. растворе соляной кислоты в диоксане, через 15 мин добавляют безводный эфир и выпавший осадок отфильтровывают и лромывают эфиром. Полученный хлоргидрат свободного гексапептида растворяют в 15 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,6 г (6 ммоль) пёнтафторфенилового эфира БОК-М6-нитроаргинина. Смесь выдерживают при постоянном рН 30 мин, добавляют kS мл хлороформа, промывают 1 н, раствором соляной кислоть и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают с этилацетатом и отфильтровывают.

Получают 3,3 г Boc-Arg-lhlOg)Vat-Tyг-(Bz e) - I Ee-H I s (Dnp) -Pro- Г fce:OMe (выход 51% от теоретического в расчете на исходное соединение пентафторфениловый эфир БОК-про-. лина). ,37.

Стадия 2. Z-Sar-Arg(N02)-VatTyr(B2E)-lfe-Hls(Dnp)-Pro-l Ее-ОМе.

3,3 г (2,5 ммоль) ме.тилоаого эфира Boc-Arg(N02)-VaE-Tyr(BzE)L-lEeHis(Dnp)-Pro-lре растворяют в 15 мл. 8 н. раствора соляной кислоты в дйоксане, через 20 мин добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфил тровывают и промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свободного гептапептида (,7) растворяют в 15 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2 г(6 ммоль пентафторфенилового эфира Z-Sar. Смесь выдерживают при постоянном рН 30 мин, добавляют 5 мл хлороформа, промывают 1 н. раствором соляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Остаток растирают .с этанолом и отфиль-гровывают. .

Получают 3,17 г (89 от теоретического.) защищенного октапептида Z-Sar-Arg(MO)-Val-Tyr{Bz1)-lJeHis(Dnp)-Pro-l 1е-ОМе. Т.пл. 1972Q9°C, RpO,82.

Стадия 3. Удаление защитных групп. 2,59 г (1,83 ммоль) Z-Sar-A.rgCNO Val-Tyr(Bzi)-lle-His(Dnp)-Pro-neОМе растворяют в 5 мл диметилформамида и к раствору добавляют А,6 мл 2-меркаптоэтанола. Смесь перемешивают 1 ч и добавляют безводный эфир. Выпавший осадок отфильтровывают. Получают2,О г (87% от теоретического) Z-Sar-Arg(N02)-Val-, (BzO-Ne-His-Pro-Me-OMe (

Продукт растворяют мл смеси метанол - уксусная кислота вода 5:1:1, добавляют 1,0 г 10%-ного палладия на активированном угле и через раствор в течение 20 ч при интенсивном перемешиваний пропускают водород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают Остато.к смешивают с водным этанолом и упаривают. Операцию повторяют несколько раз. Затем остаток растирают с безводным эфиром, отфильтровывают и сушат. .

Получают 1,5б г (98% от теоретического) метилового эфира (Sar, I1е)-ангиотензина 11, Продукт очищают как описано выше. Конечны.й продукт имеет следующие характеристики: , 19; ,59; Rjl.0,38; Ej.en(,9):1,00 Аминокислотный анализ: Pro 1,07(1) Val 1,9 (1); Туг 0,8 (1); His 1,03fl) 0 Arg 1,0 (1); Me 1,87 (2); Sar 1,0(1)

П p и M e p 2. Метиловый эфир (OGly, I 1е)-ангиотензин 11.

Стадия 1. Z-OG y-Arg(NO,2)-ValTyr(Bz1)-M e-HIs(Dnp)-Pro-11e-OMe. 5 1,5 г (0,8 ммоль) Boc-.Arg(N02).Val-Tyr(Bzl)-lle-His(Dnp)-Pro-lle-OMe (например 1, стадия 1) растворяют в 6 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 20 мин добавляют 0 безводный эфир, выпавший продукт отфильтровывают. Полученный хлор-, гидрат свободного гептапептида (R г вО,7) растворяют в 10. мл диметилфор мамида, добавляют триэтиламин до 5 рН 8 и 0,А6 г (1,17 ммоль) пентафторфенилового эфира Z-OGly. Через 30 мин добавляют к смеси 30 мл хлороформа, промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором 0 соляной кислоты и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают.

Получают 1,05 г (93% от теорети. ческого) Z-OG1y-Arg(NOi)-Val-Tyr(Bzl) lle-His(Dnp)-Pro-lle-OMe; Т.пл. .2.

Стадия 2. Удаление защитных групп. 1,05т (0,7 ммоль) Z-OGly-Arg(N02) Va1-Туг(Bz Г)- И е-Н i s(Dnp)-Pro-1Ie-ОМе растворяют в 5 мл диметилформамида, Q к раствору добавляют 2,3. мл 2-меркаптоэтанола, через 2ч добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфильтровывают, промывают эфиром. Получают 0,85 г (85% от теоретического) Z-OGly-Arg(N02)(Bzl)Me-His-Pro-lle-OMe ,), 0,75 г (0,6 ммоль) этого продукта растворяют в 20 мл смеси метанол уксусная кислота - вода (5:1:1)j добавляют 0,8 г 10%-ного Налладия на активированном угле и через раствор в течение 18 ч при интенсивном ; перемешивании, пропускают водород. Затем катализатор отфильтровывают, .фильтрат уиаривают. Остаток смешива ;ют с водным этанолом и упаривают. Операцию повторяют несколько раз. Затем остаток растирают с. безводным эфиром, отфильтровывают и сушат. 7. Получают / О, г (82 от теоретического) метилового эфира .(OGly(l 1-е ангиотензина 11, который очищают как описано выше. Конечный продукт имеет следующие характеристики: , ,72; .Rj,60. Аминокислотный анализ: Pro 1,0 ( Val 1,0 (1); Me 1,7 (2); Туг 0,88( His 1,02 (1); Arg 0,96 (1). П p и M e p 3. Метиловый эфир (Sar, ТЬг(Ме))-ангиотезина 11. Стадия 1. Z-Sar-Arg(N02)-Va1Tyr(Bz1)-1 1e-H i s(Dnp)-Pro-Thr(Me)-O 0,68 г (,5 ммоль) метилового , эфира 0-йетил-треонина растворяют в 10 мл хлороформа и добавляют 2,28 г (6 ммоль) пентафтррфенилового эфира БОК-пролина. Раствор вздерживают 30 мин при постоянном рН 8 и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате, добавляют 0,22 мл Ы,Н-диметил аминоэтиламина и через 15 мин промы вают водным раствором лимон нбй кислоты, насыщенным раствором хлористого натрия, 1 н. раствором соляной кислоты и водой, сушат над суль,фатом натрия и упаривают. Полученный защищенный дипептид (,76j растворяют в 3 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане. Через 15 мин добавляют безводный эфир и упаривают. Полученный хлоргидрат ce бодного дипептйда (,18) растворяют в 10 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН и 2,95 (5 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-Н динитрофенил-гистидина. Раствор выдерживают 30 мин при рН 8 упаривают и остаток растворяют в эт ацетате. К раствору добавляют 0,11 М,Ы-диметиламиноэтиламин, через 10 мин промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты, нacьw eн ным paiCTBOpoM хлористого натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Полученный защищенный трипептид (,3) растворяют в 10 диметилфрр ;амида, добавляют триэтил аминдорН 8 и 2,0 г (5 ммоль) пентафторфениловогр эфира БОК-изолейцина,выдерживают 30 минпри рН. 8 и упаривают. Остаток растворяют в этилацетате. Раствор промывают, сушат и упаривают. Остаток растирают со смесью эфир - гексан 3i7 и отфильтровывают. Полученный тетрапептид (,28),., растворяют в 7 мл 8 н. раствора соляной кислоОты в диоксане. Через 15 мин добавляют безводный ;эфир, выпавший продукт отфильтровывают и промывают эфиром. Полученный прЪдукт (,27) растворяют в 10 л диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,7 г (5 ммоль) пентафторфенилового . эфира БОК-О.-бензил-тирозина, выдерживают 30 мин при рН 8, упаривают, остаток растворяют в этилацетате. К полученному раствору добавляют 0,11 мл N,N-димeтилэтилaминa и через 15 мин промывают водным раствором лимонной кислоты, насыщенным раствором хлористого натрия и водой, сушат над сульфатом натрия и упаривают. Полученный в остатке защищенный пентапептид (,51) ра- . стирают с безводным эфиром, отфильтровывают и растворяют в 5 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 15 мин добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфильтровывают, промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свободного пентапептида (,48) растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 1,9 г (9 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОК-валина. Раствор .выдерживают 30 мин при рН 8, упаривают, остаток растворяют в хлороформе, промывают сушат иупаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полу- ченный защищенный гексапептид (K-0,kh) растворяют в 10 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане и через 15 мин добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфиль трйвывают и промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свободного гексапептида (,Зб) растворяют в 15 мл димет илформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,25 г (5 ммоль) пентафторфенилового эфира BOK-N -нитроаргинина. Раствор выдepживaюt 1 ч при рН 8, разбавляют хлороформом и обрабатывают как описано выше. Полученный в остатке продукт растирают с этанолом и отфильтровывают. Получают 3,3 г (91 от теоретического выхода, рассчитанного на треонин) Boc-ArgCN02)-Val-Tyr(BzO-lleHis(Dnp)-Pro-Thr{Me)-OMe. Т.пл. 188193°С: . .87. 193°С; ,|8; .,87. 1,95.г (1,5 ммо.Ьь) вышеуказанного метилового эфира защищенного гептапептида растворяют в 10 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане и через 20 мин осаждают добавлением безводного эфира продукт, кото рый отфильтровывают и промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свобод ного гептапептида ,20;) растворяют в 15 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 0,87 г (2,25 ммоль) пентафторфенилового эфира Z-Sar, Раствор выдерживают 1 ч при рН 8 разбавляют хлороформом и обрабатыва ют как описано выше. Получают 1,85 г (87 от теоретиче KQro) метилового эфира защищенного октапептида Z-Sar-Arg(N62)-Val-Туг (Bzl)-lle-His(Dnp)-Pro-Thr(Ме)-ОМе, Т.пл. 202-208°С; ,20; ,86 Стадия 2, Удаление защитных груп 1,85 г (1, ммоль) Z-Sar-Arq(N02 (Bz)-Me-His(Dnp)-Pro- hr(M ОМе растворяют в В мл диметилформам да, к раствору добавляют 2,6 мл 2-меркаптоэтанола, через 1 ч добавляют безводный эфир. Выпавший продук отфильтровывают и промывают эфиром. Получают 1,6 г. Z-Sar-Arg(N02)-ValTyr(Bzl)-Me-His-Pro-Thr(Me)-OMe, (,52), Полученный продукт раст воряют в 30 мл смеси метанол - уксусная кислота - вода (5:1:1), доба ляют катализатор (10%-ный палладий на активированном угле) и при интен сивном перемешивании в течение 30 ч пропускают водород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упари вают. Остаток растирают со смесью эфир - этанол (2:1) и отфильтровывают. Получают 0,98 г (83% от теоретического) метилового эфира (Заг, ТЬг(Ме) )-ангиотензина 11, который очищают как описано выше. Конечный продукт имеет следующие характеристики: ,29yfvf 0,55; ,27. , Аминокислотный анализ: His 1,03( Arg 0,95 (1); lie 0,93 (D; Pro 1.03 (1); Val 1,15 (1); tie 1,03 (D Tyr 0,9 (1); Sar 1,0 (1). Пример. Метиловый эфир (OGly, Thr(Me) )-ангиотензина 1 Стадий 1. Z-OGly-Arg(N02)(Bz1)-M e-H i s(Dnp)-Thr(Me)-OMe. 0,62 г (0,7 ммоль) Boc-Arg(NOTj Va 1 -Tyr (Bz 1) - f 1 e-H I s (Dnp) ;ТИг(Ме)-ОМе . (пример 3 стадия 1) растворяют в 4 мл 8 и, раствора соляной кислоты в диоксане и через 13 мин скаждают продукт добавлением безводного эфира, отфильтровывают и промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свободного гептапептида (,35) растворяют в 10 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 0,8 г (2 ммоль) пентафторфенилового эфира Z-OGly. Раствор выдерживают 1 ч при рН 8, разбавляют 30 мл хлороформа и обрабатывают как описано, выше. Остаток растирают со смесью эфир этанол (9:1) и отфильтровывают. Получают 0,60 г (90 от теоретического) метилового эфира защищенного октапептида Z-OG1y-Arg(N02)-ValТуг(Bz)-11е-Н i s(Dnp)-Pro-Thr(Me)-OMe. Т.ПЛ. 158-162°C; ,4i. Стадия 2. Удаление защитных групп. g,6 r.(Q,k2 ммоль) Z-OGly-Arg(N02)Val-T:yr(Bz)-l le-H is (Dnp)-Pro-Thr (Me)OMe растворяют в 2 мл диметилформамида , к раствору добавляют 1,2 мл 2-меркаптоэтанола, через 1 ч добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфильтровывают,. растворян т в метаноле-. Раствор обрабатывают активированным углем, фильтруют и упа- ривают. Остаток растирают с эфиром и отфильтровывают. Получают 0,6 г Z-OG1у-Агg(МОг) -Va1-Туг(6z1)-11еHis-Thr(Me)-OMe.,l6; ,52. Продукт растворяют в 25 мл смеси метанол - уксусная кислота - вода (5:1:1), добавляют 0,3 г 10 -ного палладия на активированном угле и при интенсивном перемешивании пропускают в течение 17 ч водород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток смешивают с водным этанолом и упаривают.. Операцию повторяют несколько раз. Получают 0,32 г (91 от.теоретического) метилового эфира (OGly, А1а)-ангиотензина 11, который очищает как описано выше. Конечный продукт имеет следующие характеристики: ,22; pf 0,73; ,56. Аминокислотный анализ: Thr 0,02-(1) Pro 1,03 (1); Val 1,0 (1); His 1,0(l) Arg 1,0 (1). П p и M e p 5. Метиловый эфир (Ogly, Thr)-ангиотензина 11. Стадия 1. Вое-Arg(NO2)-Val-Туг(BzI) Ile-His(Dnp)-Pro-Thr-OMe. г (20 ммоль) метилового эфира О-адетил-тирозина хлоргидрата растворяют в 50 мл хлороформа, добавляют 2,3 мл (20 ммоль)триэтилами11Гна и .3,8 г (10 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-пролина. Раствор выдерживают при постоянном рН 1 ч и обрабатывают как описано выше. .Полученный защищенный дипептид (,77) растворяют в 20 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане , через15 мин добавляют безводный эфир, выпавший продукт отфиль тровывают и промывают эфиром. Пол ценный продукт (,2) растворяют в 30 мл хлороформа, добавляют-три ; этиламин до рН 8 и Ц,7 г (8 ммоль) пентафторфенилового эфира БOK- P динитрофенил-гистидина. Раствор выдерживают 1 ч при рН 8 и обрабатывают как указано выше. Полученный в остат ке защищенный трипептид (,7) растворяют в 20 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане и через 15 мин осаждают продукт, добавлением безводного эфира. Полученный хлоогидрат свободного трипептида (R .; 0,23) растворяют в 20 мл смеси хлороформ - диметилформамид (5:0 до бавляют триэтиламин до рН 8 и ,0 г (10 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-изолейцина..Раствор выдерживают 30 мин при рН 8, обрабатывают. Остаток растирают с гексаном и отфильтровывают.. Полученный защищенный тетрапептид (,) растворяют в 15 мл 8 и, раствора соляной кислоты в диоксане и через 15 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Полученный хлоргидрат свободного тет рапептида (Rt-0,25) растворяют в 30 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,05 г (3,8 ммоль) пентафторфенилового эфира 0-бензил-тирозина. Раствор .выдерживают 30 мин при рН 8, упаривают, остаток растворяют в этилацетате. К полученному раствору добавляют 0,11 мл Н,М-диметиламиноэтиламина и через 15 мин раствор обрабатывают. Г Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полученный за щищенный пентапептид (,57) ра. створяют в Ю мл 8 н. раствора срляной кислоты в диоксане. Через 15 мин продукт осаждают добавлением безвод ного эфира, отф 1льтровывают и промывают эфиром..j Полученный продукт (,27) растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 1|75 г (4,5 ммоль) пентафторфенилово О12 го эфира БОК-валина. Раствор выдерживают 1 ч при рМ 8 и упаривают. Оста-г ток растворяют в хлороформе и раствор обрабатывают. Остаток растирают с эфиром, отфильтровывают и промывают эфиром. Полученный защищенный гексапептид ) растворяют в 8 мл 8 и. раствора соляной кислоты в диоксане, через.15 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира . продукт-отфильтровывают, промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свободного гекйапептида , (,23) растворяют в 20 мл диметилформа.мида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 1,8 г С ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-М -нитроаргинина. Раствор выдерживают 1 ч при рЧ 8, упаривают, остаток растворяют в хлороформе, раствор обрабатывают сушат и упаривают. Остаток растирают со смесью эфир - этанол ), отфильтровывают и промывают вышеуказанной смесью. Получают 2,7 г (26% от теоретического выхода в расчете на гистидин) Boc-Arg (NOa)-Va 1-Туг (Bzl) - Ме-Н i S (Опр) Рго-Thr-OMe. Т.пл. 190-195 С (разложения) ; ,47. Стадия 2. Z-OGlY-Arg(N02)-Va1Туг(Bz1)-М е-Н i s(Dnp)-Рго-Thr-OMe. 1,7 г (1, t ммоль)Ьос-Агд ( 1 -Tyr(Bzl)-l le-His(Dnp)-Рго-Thr-OMe растворяют в TO мл 8 н. раствора . СОЛЯ.НОЙ кислоты в диоксане, через 15 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Продукт отфильтровывают и промывают эфиром. Полученный хлоргидрат свободного гептапептида (,21) растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 0,82 г (2,1 ммоль) пентафторфенилового эфира Z-OGly. Раствор выдерживают 30 мин при рН .8, разбавляют lO мл хлороформа, промывают 1 н. раствором соляной кислоты и водой, сушат .и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Получают 1,6 г (87 от теоретического) метилового эфира защищенного октапептида Z-OG1y-Arg(N02)Val-Tyr(Bzl)-lle-His(Dnp)-Рго-ThrOMe. Т.пл. 188-194°С; ,48. Стадия 3. Удаление защитных групп. 1,6 г (1,2 ммоль)1-5аг-2-ОС1уArg(N02)-Val-Tyr(BzlJ-lle-His(Dnp)P.ro-Thr-OMe растворяют в 5 мл димеlOi

13

:тилформамида, добавляют мл 2-меркаптоэтанола.Через 1 ч продукт осаждают добавлением безводного эфира. Продукт отфильтровывают и промывают эфиром, растворяют в метаноле и осаждают добавлением эфира.

Полумают 1,3 г ( от теоретического) Z-OGly-Arg(N02)-Val-Tyr(Bzl)Ue-Hls-Pro-Thr-OMe. ,35; Щ---. 0,72.

Полученный продукт растворяют в смеси метанол - уксусная кислота вода(5:1:1), добавляют 0,6 г 10%-ного палладия на активированном угле и при интенсивном перемешивании пропускают в течение 17,ч водород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток смешивают с водным этанолом и упаривают. Операцию повторяют несколько раз. Остаток растирают с эфиром, отфильтровывают и промывают эфиром.

Полумают 0,6 г метилового эфира (OGly, ТЬг)-ангиотензина 11, который очищают как описано выше.

Конечный продукт имеет следующие характеристики: ,22,; ,73;

..56, - ,

Аминокислотный анализ: Thr 0,92(1 Pro 1,03 (1); Va 1,0 (1).; Ile1,5(1) Туг 0,7 (1); His 1,0 (1)i Arg 1,0(1)

П p и M e p 6, Метиловый эфир (Sar, Ala)-ангиотензин 11.

Стадия 1. Z-Sar-Arg(N02)-Va1Туг(Вн1)-1le-His(Dnp)-Pro-Ala-OMe.

0,7 г (5 ммоль) хлоргидрата метил вого эфира аланина растворяют в 20 м хлороформа, добавляют 0,7 мл триэтиламина и 1,1 г (3 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-пролина. Раствор, выдерживают при постоянном рН 30 мин и .обрабатывают как описа,но выше. Полученный защищенный дипептид (,6l)j растворяют в 5 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 10 мин разбавляют безводным эфиром и упаривают. Полу ченный хлоргидрат свободного дипептида (Rf-0,32) растворяют в 20 мл хлороформа, добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,7 г (,5 ммоль) пентафторфёнилового эфира БОК-Н динитрофенилгистидина. Раствор выдерживают 1 ч при рН 8, добавляют 0,33 мл Н,М диметиламиноэтиламина и через 15 мин обрабатывают, сушат и упаривают. Полученный защищенный трипептид (,27) растворяют в 10 мл

030I

8 н. раствора соляной кислоты в диоксане, через 15 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Полученный хлдргидрат свободного тр.ипепн

тида (,k8) отфильтровывают, промывают эфиром и растворяют в смеси хлороформ - диметилфррмамид (2:-1), добавляют триэтиламин до рН 8 и 2,k г ,(6 ммоль) пентафторфенилового

эфира БОК-изолейцина. Раствор выдерживают 30 мин при рН 8 и упаривают Остаток растворяют в этилацетате и полученный раствор обрабатывают как описано выше, сушат и упаривают.

5 Остаток растирают со смесью эфиргексан (1:9) и отфильтровывают. По„/ (2 )

лученныи защищенный тетрапептид (R..

0,29) растворяют в 10 мл .8 н. раствора соляной кислоты в диоксане и

0 через 10 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Полученный хлоргидрат свободного тетрапептида (,67) отфильтровывают, промывают эфиром, растворяют в смеси хлороформ - диметилформамид, (2:1), прибавляют к раствору триэтиламин до рН 8 и 1,78 г (3,3 ммоль) пентафторфенилового эфира БОК-0-бензил-тирозина. Раствор выдерживают

0 15 мин при рН 8 и упаривают. О.статок растворяют в этилацетате и раствор обрабатывают, сушат и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полученный за- щищенный пентапептид (,33) растворяют в 10 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане и через 10 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Полученный хлоргидрат

д свободного пентапептида.отфильтровывают и растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 1,55 г ( ммоль) пентафтор.фенилового эфира БОК-валина. Ра створ выдерживают 1 ч при рН и упаривают. Остаток растворяют в хлорофооме и раствор обрабатывают сушат и упаривают. Остаток растирают с безводным эфиром и отфильтровывают. Полученный защищенный гексапептид (Rf|

0,35) растворяют в 8 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане и через 20 мин осаждают продукт добавлением безводного эфира. Полученный хлор.гидрат свободного гексапЬптида

5 (,75) отфильтровывают, промывают эфиром, растворяют в 20 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин .до рН 8 и 2,6 г .(6 ммоль) пентафтор151фенилового эфира BOK-N -HHTpoaprMHrt Раствор выдерживают 1 ч при рН 8, р бавляют 60 мл хлороформа,обрабатыва ют, сушат и упаривают. Остаток растирают со смесью этанол - эфир {1:3)отфильтровывают и промывают. Полуменный защищенный гексапептид . (,35) растворяют в 10 мл 8 н. раствора соляной кислоты в диоксане через 15 мин осаждают продукт добав лением безводного эфира. Полученный хлоргидрат свободного гептапептида (0,15) отфильтровывают, промывают эфиром,растворяют в 20. мл диме формамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 1,27 г ( ммоль) пентафторфенилового эфира Z-Sar, Раствор выдерживают 15 мин при рН 8, разбавляют 60 мл хлороформа и обрабатывают, .сушат и упаривают, Остат&к растирают с-25 мл этанола, отфильтровывают и промывают этаноло Получают .1,37 г (33% от теоретического выхода в расчете на пролин Z-Sar-Arg(N02)-Val-Tyr.(Bzl.)-MeHis(Dnp)-Pro-Ala-OMe. Т.пл. 192-19б ,70. Стадия 2. Удаление защитных груп 1,37 г (1 ммоль) Z-Sar-Arg(N02)Val-Tyr(8zl)-lle-His(Dnp)-Pro-AlaОМе растворяют в 3 мл диметилформамида, добавляют 1 ,9 мл 2- меркаптоэтанола и через 1 ч добавляют без. водный эфир. Выпавший продукт отфил тровывают и промывают эфиром. Получают 1,2 г (99% от теоретического) Z-Sar-Arg(N02)-Va}-Tyr(Bz Me-His-Pro-Ala-OMe (,20). Полученный продукт растворяют в 20 мл смеси метанол - уксусная кислота - вода (5:1:1),добавляют 0,6 г 10 -ного палладия на актмвироваином угле и при интенсивном пер мешивании в течение 20 ч пропускают водород. Затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают. Остаток смешивают с водным этанолом и упаривают. Операцию повторяют несколько раз. Остаток растирают со смесью этанол - эфир (1:1) и отфильтровывают. Получают 0,7 г (75% от теоретического) метилового эфира (Sar, А1а®)-ангиотензина 11, который очищают как описано выше. 0 Конечный проду кт имеет следующие Rpo,23; ,5t; характеристики: R|iO,27. Аминокислотный анализ: His 0,97(0, Arg 1,03 (1) ; Pro 1,06 (1);УаЫ,03 (1) Me 0,98 (1); Туг 0.6 (1); Sar 1,0 (О Описываемые метиловые эфиры октапептидов общей.формулы изучены как антагонисты природного гормона ангиотензина 11. Антагонистическое действие новых соединений общей формулы (.1 ) исследуют на наркотизированных котах. При исследовании блуждающие нервы животных подрезают на обеих сторонах шеи и после блокирования нервных узлов вводят животным гипертензии (Clba) путем вливания со скоростью 0,5 г/кг/мин. После стабилизации повышенного кровянного давления животному вводят внутривенно или подкожно исследуемое вещество В физиологическом растворе и измеряют вызванное введением вещества уменьшение кровяного давления. Снижение кровяного давления регистрируется в миллиметрах pTytHoro столба /и в процентах начального значения давления, измеренного до введения исследуемого вещества. Под продолжительностью действия отдельных исследованных .соединений понимается время до момента значительного понижения кровяного давления (). Для срав нения приведены данные, полученные при использовании известного антагониста ангиотензина 11- сарализина (1-(М-метилглицин)-5-1-валин, 8-аланин)-ангиотензина 11) в тех . же условиях. .Полученные результаты представлены в таблице. Из таблицы следует, что предлагаемые соединения при внутривенном -введении существенно снижают кровяное давление. При подкожном введении метиловые эфиры октапептидов общей формулы (П также проявляют способность снижать экспериментально вызванное повышение, кровяного давления. Указанные соединения могут найти применение в терапии как средства, понижающие кро,вяное давление.

Метиловый эфир (Sar, Thr(MeS)-ангиотензина 11

Метиловый эфир (OGly, Мев)-ан

12

12

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МЕТИЛОВЫХ ЭФИРОВ ОКТАПЕПТИДОВ общей формулы I X-Arg-VaB-Tyr-lEe-HIs-Fro-Y-OMe, His(Dnp)-Y-OMe, где 1 - бензилоксйкарбонил; N02 нитрогруппа; BzB - бензил; Опр - динитрофенил; X, У имеют указанные значения, отщепля,ют динитрофенильную защитную группу путем обработки 2-меркаптоэтанолом, а затем удаляют ос- О) тальные защитные группы путем каталитического гидрогенолиза.