Способ получения пептидов Советский патент 1981 года по МПК C07K7/06 A61K38/08 

(54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ

I

Изобретение относится к способу получения новых пептидов - биологичес- ки активных соединений, которые могут нййти применение в медицине.

Способ наращивания пептидной цепи Б методом активированных эфиров, например пентафторфениловых эфиров, широко известен в химии пептидов

Цель изобретения - получение новых пептидов, обладающих ценными фармако- .|0 логическими свойствами.

Поставленная цель достигается описываемым способом получения пептидов общей формулы I

X-Arg-Val-Tyr-lleu-His-Pro-Y 15 где X - остаток алифатической карбоновай кислоты, содержащей в оС--положении аминооксиацетильную или сзб-аминооксипропильную группу; 20

Y - Leu, lieu,

заключающийся в том, что реакционноспособное производное обшей формулы II H-Arg(A)(B)-Ileu-His(E)-Pro-Y-OG25

где А - тозил; В - бензил; Е - динитрофенил; G - водород или р-нитробензил; ,. У имеет значения, указанные

вьше, подвергают взаимодействию с реакци онноспособным производньм аминоокс}и карбоновой кислоты общей формулы 1

II

W-X-M где X - имеет значения, указанные

вьше;

W бензилоксикарбонильная ИЛ1

трет-бутилоксикарбоиильна$

группа;

пентафторфенокси,

М и от полученного соединения общей формулы IV

W-X-Arg(A)-Val-Tyr(B)-J1eu-His(E)-Pro-Y-OG, где A,8,E,G,W, и Y имеют значенш

указанные выше,

аотщепляют одновременно или ступен то защитные группы.Используемые в качестве исходных веществ производи гептапептидов общей формулы 1I получа ЮТ известными методами пептидной хими (например, методом активированных эфи ров, карбодиим1у ным методом и T.n.pfj Для защиты функциональных групп применяют защитные группы, стабильные в условиях ацидолиза, проводимого для отщепления защитных групп после завершения реакции образования пептидной связи. Предпочтительным для временной защиты карбоксильной группы С-концевой аминокислоты является использова ние п-нитробензильной группы (NB), для защиты гидроксильной группы тирозина - бензильно группы (BzE) , для защиты имидазольного цикла гистидйна - динитрофенильной группы (DNPh) и для защиты гуанидино-группы аргинина - тозильной группы (Tos). Эти защитные группы устойчивы к действию слабых кислот, вследствие чего трет-б тилоксикарбонильная группа (ВОС) отщепляется после образования пептидной связи селективно без затрагивания названных защитных групп. Динитрофениль ная группа может быть удалена затем тиолизом, а остальные указанные fpynпы - действием жидкого фтористого водорода. Для очистки полученных соединений используют известные методы, например ионообменную хроматографию на карбокснметилцеллюлозе. При этом большую часть продуктов получают в виде лиофи лизованных порошков. Такие продукты могут быть использованы непосредствен но для образования различных солей или комплексов. Антагонистическое действие новых соединений общей формулы исследуют на животных после введения им наркотика. Кровяное давление измеряют на сонной артерия животного. Эксперимент проводят таким образом, что вызывают повышение давления введением наркотика в вену бедра в дозе 0,5 мг/кг/мин. После стабилизации повьшения.давления животному вводят внутривенно или подкожно однократную дозу исследуемого вещества в водном физиологическом растворе, затем измеряют вызванное введенным веществом уменьшение кровяного давления. Достигнутые величины уменьшения кровяного давления при внутривенном 34 введении различных новых соединений приведены в табл. 1. Эти величины являются средними из шести и-змерений, указаны также предельные отклонения от средних значений. Дпя сравнения приведены величины, достигнутые с помощью известного саралазина, т.е. - (N-метил глицин) -5-1-Вуалин-8-1-аланин-ангиотензина II, в тех же условиях. Таблица Г И енение кровяДействующее начало ного давления (в мм рт.ст,) при внутривенном введении в дозе, мг/кг (-Аминооксиацетил ,8-лейцин)-ан-33±3,6 -4214,2 .гиотензин Г1 (1-D-о аминооксипропионил, 8-лейцин) -ангиотен-3013,4 -38t3,8 зин I I (1-Аминооксиацетил, 8-изолейцин)-ангиотен-40i5,7 -28±2,0 зин I I -41i2,5 Саралазин Из данных, приведенных в табл. 1,следует, что все аналоги ангиотензина ТГ, замещенные в первом положении алифатическим остатком карбоновой кислоты, содержащим о6-аминооксигруппу, существенно снижают кровяное давление. Размер этого действия пропорционален величине дозы. Проведено также исследование новых соединений при подкожном введении. В этом случае к физиологическому раствору поваренной соли, содержащему исследуемое вещество, добавляют также карбоксиметилцеллюлозу или желатин. В табл. 2 приведены обобщенные результаты исследований - средние значения измерений. Проведенные у пяти животных, а также величины предельных отклонений от средних значений.

Таблица 2

(i-Аминооксиацетил, 200 КМЦ -21i5,8 8-лейцин)-ангиотензнн II200 }Клт -23±2,0 (1 -D-об-аминоокси- 200 пропионил, 8-лейцин)-ангиотензин 11 200 КМЦ - карбоксиметилцеллюло Клт - желатин. Результаты, приведенные в табл.2, свидетельствуют о том, что новые соединения при гюдкожном введении, даж через 60 мин, значительно снижают экспериментально вызванное повьшение кровяного давления. Благодаря таким свойствам предлаг емые соединения, а также их физиологически совместимые соли и комплексы могут найти применение в терапии как средства, понижающие кровяное давление. Под физиологически совместимыми комплексами этих новых пептидов следует понимать такие соединения, которые образуются при добавлении известных, например, органических ве ществ и придают действующему началу запаздывающее действие. В качестве таких комплексообразующих веществ мо гут быть использованы,например,желатин ,карбоксиметилцеллюлоза ,сложные эфиры альгиновой кислоты, полифлоретинфосфа ты,полиаминокисло ты,а также другие полимеры и сополимеры. В качестве физиологически совместимых солей новых пептидов могут быть названы обычные, используемые в фармацевтической практике соли, образоран ные присоединением кислот, например ацетаты. Новые пептиды, а также их физиоло .гически сов1 естимые соли и комплексы используют в терапии в виде обычных лекарственных препаратов. Эти пр параты содержат новые соединения вместе с пригодными для энтерального и парэнтерального введения неорганическими или органическш-т носителями Лекарственные препараты могут быть

КМЦ -21±6,7 -24±5,7 -16±5,1 -1

Жлт -24±5,7 -21±5,6 -9t5,7 -3 : 26t7,2 -13t9,4 -5 21t2,2 -10±2,8 получены в виде твердых лиофилиз тов; в этам случае в качестве носителей могут быть использованы различные; не реагирующие с пептидами соединен1 я, такие, например, как углеводы. Дглее в качестве лекарственных препаратов могут быть получены концентрированные или разбавленные суспензии или э tyльсии, которые наряду с обычными з сидкимй носителями содержат также ctaбилизпрующие и консервирующие вспомогательные вещества. Такие лекарственные препараты могут быть использованы прежде всегр в терапии для лечения тех синдромов, в этиологии которых играет роль повышенный за счет ренина уровень давления; далее, они могут служить диагностическими средствами для дифференцированной диагностики гипертонии ренального происхождения. Получение новых пептидов формулы I проиллюстрировано приведенными ниже примерами. Использовашые в примерах сокращения соответствзтот принятым в специальной литератур Принадлежащие о -аминооксикислотам группы обозначают обычными символгами соответствующих аминокислот со стоящими перед ними О, например Or лиц - аминооксиуксусиая кислота Оал -об-амииооксипропионовая кислота и т.д. Пентафторфенильный ост ток - ПФФ. При получении различных соеди е иий упаривание растворителей про зводят всегда с помощью роторного испарителя. Температуры плавления cngeделяют с помощью аппарата Dr. TottoJ

(BUchu). Тонкослойную хроматографию роводят на пластинах Kieselgel G ach Stahl (E.Merck. Darmstadt); ля проявления хроматограмм использут следукшше системы растворителей: s

Цифра в степени при значении R 20 указьтает номер использованной системы растворителей, например Rj, .

Электрофоретические исследования на бумаге проводят на горизонтальном приборе LMlM умеренного напряжения 25 на бумаге MN 214 в буферном растворе при рН 1,9, содержащем глутами-, новую кислоту. Напряжение составляет 450 в, время - 3 ч.

Тонкослойные хроматограммы прояв- зо яют нингидрином после обычного хлорирования раствором о-толидина с йоистьм калием.

Очистку целевых продуктов проводят следующим общим методом.35

Снач;ала соли свободных пептидов с фтористым водородом чистят на смоле Sephacryl S-200 Superfine (производства Pharmacia Fine chemicals, Uppsala, Schweden) градиентной элю- цией 0,01 М (рН 4,5) и 0,4 М (рн 6,7) растворами ацетата аммония. Детекти- , рование элюата производят с помощью прибора LKB Uvicord II (производства LKB, Uppsala, Швеция), сбор - с по- ощью коллектора фракций.

Дальнейшую очистку основной фракии проводят на карбоксиметилцеллкшозе следующим образом.

0,5 л карбоксиметилцелпюлозы (КМЦ-52) приводят в состояние равновесия в колонке с первым буферным раствором, затем в колонку заливают раствор 0,5 г пептида в 4 мл 0,01 М раст 55 вора ацетата аммония и вымывают проукт градиентной элюцией указанными буферными растворами. Скорость,элюрования 25 мп/ч. Собирают фракции

по 10 мл и детектируют их с помощью прибора LKB Uvicord II. Очищенный целевой продукт получают лиофилизацией основной фракции.

Пример 1. (1-Аминооксиацетил, 8-изолейцин)-ангиотензин II

Стадия 1: ВОС - Arg (Tos) - Val -Туг (Bzl) - lie - His pNPh) - Pro lie - NB.

К 4,5 г (15 ммоль) хлоргидрата Iнитробензилового эфира изолейцина в 50 мл хлороформа добавляют 2I1 мл триэтиламина и 3,81 г ( ммоль) пентафторфёнилового эфира БОК-пролина. Смесь перемешивают 20 мин при комнатной температуре, продукт экстргируют водой, затем 10%-ным водным раствором лимонной кислоты. Полученный после высушивания и упаривания растворителя в виде остатка защищенный дипептид (Rr 0,8) растворяют без дополнительной очистки в 20 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане. Через 10 мин раствор разбавляют безводным эфиром и упаривают. Полученный в остатке хлоргидрат дипецтида (Rr 0,44) растворяют в 30 мл хлороформа, добавляют к раствору триэтиламин до рН 8 и затем 8,8 г (15 ммоль) пентафторфёнилового эфира ВОС-гистидина. Через 1,5 ч в раствор вносят 1,65 мл N,N-димeтиламиноэтиламина и еще через 15 мин раствор промывают 10%-ным водным рас вором лимонной кислоты, 1 н. соляной кислотой, водой и 5%-ным водным раствором бикарбоната натрия в указанной последовательности. Органическую фаз отделяют,высушивают и упаривают. Полченньй в виде остатка сырой защищенный трипептид (R 0,50) без очиски растворяют в 20 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане. Через 15 мин полученньй таким образом свободный трипептид (RJ. 0,25) осаждают добавлением сухого эфира, отфильтровывают и промывают эфиром. Продукт тотчас же растворяют в смеси 50 мл хлороформа с 20 мл диметилформамида, величину рН раствора с помощью триэтиламина устанавливают равной 8 и затем добавляют 6,0 г (15 ммоль) пентафторфёнилового эфира ВОС-изолейцина. Через 30 мин растворитель упаривают, остаток растворяют в этилацетате. Полученный раствор промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты и затем водой. Посл

высушивания и упаривания этилацетатиого раствора защищенный гексапептид (Re 0,56) выделяют с помощью эфира и промывают эфиром.

Далее продукт растворяют в 20 мл 8 М-раствора соляной кислоты в диоксане и полученный таким образом свободный гексапептид (Rf 0,47) осаждают сухим эфиром, отфильтровывают и промывают эфиром. Полученный продукт тотчас растворяют в 50 мл диметшгформамида, добавляют триэтиламин до рН 8, после чего прибавляют 7,2 г (12 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-аргинина (Tos). Смесь перемешивают 1 ч, растворитель упаривают, оста|ток растворяют в хлороформе и полученный раствор промывают 10%-ным водиым раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты и водой в указанной последовательности. Органическую фазу отделяют, высушивают и упаривают,остаток растирают с эфиром и отфильтровывают. Получают 12,4 г защищенного гептапептида нитробензило вого эфира Arg (Tos) - Val -Tyr(Bzl) - lie - His(DNPh) - Pro -li (выход 80% от теоретического, в расчете на исходное соединение - пентафторфениловый эфир ВОС-пролина). Т.пл. 189-l920c. Rjf- 0,55.

Стадия 2: ВОС-Оглиц- Arg (Tos) Val - Туг - Jle - His - Pro - lie.

8,1 г (2 ммоль) нитробензилового эфира BOC-Arg(Tos)-Val-Tyr(Bz1)-JleHis(DNPh)-Pro-l e растворяют в 5 мл диметилформамида и в раствор добавляют 2,9 мл 2-меркаптоэтанола. Через 1 ч пептид осаждают сухим эфиром, отфильтровывают, пром 1вают эфиром и очищают переосаждением эфиром из метанола. Получают 2,0 г (74% от теории) нитробензилового эфира ВОСг -Ai(Tos)-Val-Tyr(Bz1)-Ileu-His-Ile (Rj 0,1). Продукт растворяют в 30 мл смеси метанол-уксусная кислота - вода 5:1:1 и добавляют 1,0 г палладия на активированном угле. Через раствор в течение 5 часов ; пропускают водород, затем катализатор отфильтровывают, фильтрат упаривают и остаток растирают с эфиром. Получают 1,22 г (75% от теоретического) частично защищенного гептапептида (Rf 0,8). Продукт растворяют в 5 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане и через 20 мин сухим эфиром осаждают свободный гептапептид ( -0,1).

Свободный гептапептид отфильтровы вают, промывают эфиром и растворяют в 15 мл диметилформамида. Величину рН раствора с помощью триэтиламина устанавливают равной 8 и к растворз добавляют 0,45 г (1,2 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-Оглицина. Через 30 мин реакционную смесь ynai ивают, остаток растворяют в 30 мл cifeси хпороформ-диметилформамид (3:1) и раствор промывают 10%-ным раствором лимонной кислоты и водой. После высушивания и упаривания раствора получают остаток, который растирают с этш ацетатом, отфильтровыв.ают и промыва ют этилацетатом. Получают 0,46 г ВОС-Оглиц-Агд(Tos)-Val-Tyr-l1e-HIs Pro-IIs (выход 72% от теоретическо го); R 0,23; 0,40.

Стадия 3: .удаление защитных 0,46 г (0,35 ммоль) ВОС-ОглицArg(Tos)-Val-Tyr-ne-Hls-Pro-Ile р|асворяют в 2 мл жидкого фтористого вод рода и добавляют к раствору 0,5 мл тиоанизола. Раствор выдерживают 1 при 0, затем осаждают пептид эфи ром,- отфильтровывают и прймывают э$)Иром. Получают 0,35 г (выход 100% от теоретического) (1-аминооксиацетил 8-11е)-ангиотензина I I фторгидрата Продукт очищают, как описано выше (до примеров) . Характеристика чист)г продукта:

0,26; Rf 0,56; 0,57; 1,00.

Результаты аминокислотного анали за: Pro 1,01 (l); Val 1,0 (l); lie 1,98 (2); Туг.0,65 (l); His 1,0 (l); iArg 1,03 (1).

Пример 2. (l-L-oi-аминоокси пропионил, 8-изолейцин)-ангиотензин

Стадия 1: BOC-OAla-Arg(Tos)-Val Tyr-Ile-Hls-Pro-Ile.

0,6 г (0,5 ммоль) BOC-Arg-(Tos) Val-Tyr-Ile-Hls-Pro-lle (пример 1, стадия 2) растворяют в 5 мл 8 М ра|створа соляной кислоты в диоксане. Через 20 мин полученный свободный пептид (R 0,Г) осаждают сухим эфиром, отфильтровывают и промывают. Выделенный таким лбразом продукт тотчас растворяют в 20 мл диметнлформамда, добавляют; триэтиламин до рН 8 затем 0,7 г (1,9 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-Оаланина. Чер|ез 30 мин раствор упаривают, остаток

растворяют в 30 мл смеси хлороформдиметилформамид (3:1). Полученный раствор промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу высушивают, упаривают и остаток растирают с этилацетатом. Получают 0,55 г (выход 84% от теоретического) ВОС-Ола-Агд(То5)-Уа1-ТугJle-His-Pro-lle.

Rf 0,43; 0,80. ю

Стадия 2: удаление защитных групп.

0,53 г (0,42 ммоль) ВОС-ОА1а-; Arg(Tos)Va -Jyг-11е-Нi s-Pro-JIe растворяют в 2 мл жидкого фтористого водорода и добавляют. 0,55 мл тиоанизола. is Раствор выдерживают 1 ч при О-С, затем осаждают пептид сухим эфиром, отфильтровывают и прог ывают эфиром.

Получают 0,41-г (1-Оаланин, 8-изолейцин)-ангиотензина li; продукт очи- го щают, как описано вьппе. 0,32; Rf 0,58; Rj 0,59; ЬОРезультаты аминокислотного анализа: Pro 1,0(1) ; Val 1,1 (l) ; Не 2,02 (2); His 0,9 (l); Туг 0,95 (l); 25 Arg 1,05 ().

Пример 3. (1-Аминооксиацетил; 8-лейцин)-ангиотензин II.

Стадия 1: ВОС-Агд(Tos)-Val-Tyr(Bzl)-ne-His-Pro-Leu 011Ъ. зо

4,2 г (12 ммоль) бромгидрата нитробензилового эфира лейцина растворяют, в 50 мл хлороформа, и к полученному раствору добавляют 1,68 мл триэтиламина и 3,81 г (Ю ммоль) пента- 35 фторфенилового эфира ВОС-пролина. Смесь перемешивают 20 мин при комнатной температуре и затем экстрагируюЧ 10%-ным водным раствором лимонной кислоты и водой. Органическую фазу высушивают и упаривают. Полученный в остатке защищенный дипептид (R. 0,8) без дополнительной очистки растворяют в 20 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане, через 10 мин 5 раствор разбавляют сухим диоксаном и упаривают.

Полученный в остатке свободный дипептид ( 0,5б) без дополнительной очистки растворяют в 50 мл хлоро- 5 форма, в раствор добавляют триэтиламин до рН 8 и затем 8,8 г (15 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-гистидина (DNPh). Через 30 мин в раствор добавляют 1,65 мл N,N-димeтилaминoэтил 5 амина и еще через 10 мин смесь промывают 10%-нь м водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной

кислоты, воднь1м раствором бикарбоната натрия и водой в указанной последовательности.

Органическую фазу высушивают и упаривают, полученньш в виде остатка защищенный трипептид (Rf 0,65) без дополнительной очистки растворяют в 25 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане и полученный свободньй трипептид (Rr i 0,47) осаждают сухим эфиром. Трипептид отфильтровывают, промывают эфиром и тотчас растворяют в смеси 50 мл хлороформа с 20 мл диметилформа|Мида. В раствор добавляют триэтиламин до рН 8 и 6,0 г (15 ммоль пентафторфенилового эфира ВОС-изолейцина. Через 30 мин растворитель упариьают, остаток растворяют в этилацетате, раствор промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты и водой, органическую фазу высушивают и упаривают.

Полученньй в .остатке защищенный тетрапептид (Rj . 0,65) высаживают с помощью смеси н-гексан-эфир (7:3). Продукт растворяют в 25 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане, через 15 мин свободный пептид (Rj. 0,65) осаждают сухим эфиром, отфильтровывают, промывают эфиром и сразу же растворяют в 50 мл смеси хлороформ-диметилформамид (1:1). Величину рН раствора устанавливают равной 8 с помощью триэтиламина и добавляют в раствор 6,0 г (11,5 ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-титрозина. Через 15 мин растворитель упаривают, остаток растворяют в этилаце|гате,к раствору добавляют 0,66 мл Ы,М-диметиламиноэтиламина и через 15 мин смесь промывают 10%-ным водным раствором лимонной кислоты, 1 н. раствором соляной кислоты и, наконец, водой . После высушивания и упаривания органической фазы с помощью эфира выделяют защищенный пентапептид (Rj 0,8) и растворяют его в 20 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане.

Полученный свободный пентапептид ( 0.,8) осаждают сухим эфиром, отфильтровывают, промывают эфиром и тотчас растворяют в 50 мл диметилформамида. Величину рН раствора с помощью триэтиламина устанавливают равной 8 и добавляют в раствор 3,85 г (Ю ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-валина. Через 1 ч отгоняют растворитель, остаток растворяют в хлоро форме, органическую фазу обычным образом экстрагируют 10%-ным водным раствором лимонной кислоты, I н. рас вором соляной кислоты.и водой. Полученный защищенный гексапептид .(R 0,82) выделяют с помощью эфи ра. Продукт растворяют в 20 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане и через 15 мин сухим эфиром осаждают свободный гексапептид (Rr 0,55 Свободный гексапептид сразу же растворяют в 40 мл диметилформамида, добавляют триэтиламин до рН 8 и 6,0 г (Ю ммоль) пентафторфенилового эфира ВОС-аргинина (Tos), Через 30 мин отг няют растворитель, остаток растворяю в хлороформе и этот раствор промывает 1 н. раствором соляной кислоты и водой. После высушивания и упаривани растворителя с помощью этанола выделяют полученный защищенный гептапептид BOC-Arg(ToS)-VaI-Туг(Bz1)-11eHis(DNPh)-Pro-Leu-ONB ( 0,62) Выход 7,5 г (50% от теоретического в расчете на исходное соединение пентафторфениловьш эфир ВОС-Рго). Т.пл. 186-190 С. Стадия 2: ВОС-Оглиц-Агд(Tos)-Va1 Tyr-rie-His-Pro-Leu 3,45 г (2,26 ммоль) BOC-Arg(Tos)-Val-Туг(Bz -Ile-His(DNPh)-Pro-Leu-ONB растворяют в 10 мл диметилформамида, доба вляют 6,6 мл 2-меркаптоэтанола и через 2 ч сухим эфиром осаждают частично защищенный гептапептид. Переосаждением эфиром из метанола получа ют 2,9 г очищенного нитробензилового эфира BOC-Arg(Tos)-Val-Туг(Bzl)-Ile-His-Pro-Leu (93% от теории). 0,12; 0,26. Продукт растворяют в смеси метанол-уксусная кислота - вода (5:1:1), добавляют 1,0 г 10%-ного палладия на активированном угле и в течение 6 ч {через раствор пропускают водород. Ка гализатор отфильтровывают, растворитель упаривают и остаток растирают с эфиром. Получают 2,15 г (89% от те оретического) BOC-Arg(Tos)-Val-Туг-Ile-His-Pro-Leu. .. ol-S) г, -7C. oW 0,75; R 0,20. 1,1 г (l ммоль) полученного продукта растворяют в 10 мл 8 М раствор соляной кислоты в диоксане, через 30 мин свободный гептапептид (Rr 0,08) осаждают сухим эфиром, отфильтровывают, промывают эфиром и сразу же растворяют в 10 мл диметш формамида. В раствор добавляют триэтиламин до рН 8 и затем 0,54 г (1,5 ммоль) пентафторфенилового эф1 ра -ВОК-Оглицина. Через 30 мин растиор разбавляют 30 мл хлороформа и вают водой. После высушивания и уп ривания раствора остаток растирают с этилацетатом,. отфильтровьгаают и промывают этилацетатом. Получают 1,05 г (выход 86% от теоретического) BOC-Cглиц-Arg(Tos)-Val-Tyr-I e-His Pro-Leu. 0,23; Стадия 3: удаление защитных rpyijin.. 0,9 г (0,73 ммоль) ВОС-ОглицАгд (Tos) -Val -Туг-Пе-HJs-Pro-Leu р створяют в 5 мл жидкого ФТОРИСТОГО водорода и добавляют 1,5 мл-тиоанизола Смесь ВЕедерживают 1,5 ч при ОС, з тем осаждают пептид сухим эфиром, отфильтровывают его и промывают зф ром. Получают 0,55 г (выход 80% от теоретического) (1-Оглицин; 8-лейцин)-ангиотензина II. Продукт очищ 0,33; ют. как описано выше. Ri 0,60; Rf 1 и,ои; л - 0,55; °° 8 Результаты аминокислотного анал за: Pro 1,0 (1); Va 1,0 (l); lie 1,0 (1); Leu 1,1 (l); His 0,95 (l) Arg 1,0 (1); Tyr 0,7 (l). Пример 4. (1-15-о6-Аминоокс; пропионил; 8-лейцин)-ангиотензин I Стадия 1: BOC-DOAla-Arg(Tos)-Va Tyr-IIe-Hi s-Pro-Leu. 1,1 г (l ммоль) BOC-Arg(Tos)-Va «Tyr-Ile-His-Pro-Leu растворяют в 10 мл 8 М раствора соляной кислоты в диоксане и через 30 мин свободный пептид осаждают сухим эфиром, осад отфильтровывают и промывают эфиром Продукт немедленно растворяют в 10 мл диметилформамида, в раствор добавл}:ют триэтиламин до рН 8 и затем 0,56 г (1,5 ммоль) пентафторфенилового. эф1фа BOC-D-Оаланина. Через 30 мин раств разбавляют хлороформом и промывают водой. После высушивания и упарива1 ия растворителя остаток растирают с этилацетатом, отфильтровывают и прс мывают этилацетатом. Получают 0,95 (выход 77% от теоретического) ВОСОА1a-Arq(Tos)-Val-Туг- 1е-Н i s-Pro-i-eu; RJ.- 0,29. Стадия 2:.удаление защитных гру п. 0,95 г (0,77 ммоль) BOC-D-OAlaArg(Tos)-Va1-Tyr-lI1e-H s-Pro-Leu р створяют в 4 мл жидкого фтористого водорода и добавляют 1 ,2 мл тиоанизола. Раствор выдерживают 1,5 ч при , тем продукт осаждают сухим эфиром, отфильтровывают и промывают эфиром. Получают 0,6 г (l-D-Оаланин; 8-лейцин)-ангиотензина II {выход 90% от теоретического), который очищают, к описано вьппе. Rj. 0,33; Rf 0,61; Rf 0,56; E(itu МОРезультаты аминокислотного анали Pro 1,02 (1); Val 1,0 (О; Leu 1,02 (1); Не 1,03 (1); His 1,01 (ij; Arg 0,92 (1); Туг 0,8 (l). Формула изобретения Способ получения пептидов общей формулы I X-Arg-Val-Tyr-lleu-His-Pro-Y где X - остаток алифатической карбо новой кислота, содержащей в Л-положении аминооксиацетильную илио -аминооксипропильную группу; Y - Leu, lieu, отличающийся тем, что р акционноспособное производное общей формулы II H-Arg{A)-Va1-Tyr(B)-Ileu His(E)-Pro -Y-OG где А - тозил; В - бензил; Е - динитрофенил; G - водород или п-нитробензил; У - имеет значения, указанные выше подвергают взаимодействию с реакционноспособным производным аминооксикарбоновой кислоты общей формулы III где X имеет значения,указанные вьше, W - бензилоксикарбонильная или трет-бутилокси15арбонильная группа; М - пентафторфенокси, и от полученного соединения общей формулы IV W-X-Arg(А)-Val-Туг(В)-11 еи-Нi s(Е) -Pro-Y-OGгде A,B,E,G,W,X и Y имеют указанные выше значения, отщепляют одновременно или ступенчато защитные группы. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе f. Lajos Kisfaludy, M.Low, O.Nyeki, T.Szirtes, I.Shon, Die Verven dung von Pentaf1uorphenylestern bei .Peptidsynthesen, Justus Riebigs Annalen der chemie,T973, Heft 9,s.. 2. Шредер Э,, Любке К. Пептиды, ч. I, М,, Мир, 1967, с. 116,