Способ определения количества уробилинов в моче Советский патент 1983 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к биохимии, а именно анализу материалов химическими способами. Наиболее близким к предлагаемому по технической сущности и достигаемо результату является способ определения количества уробилинов в моче, включающий смешивание мочи с реактивом Эрли.ха, который представляет собой раствор п-диметиламинобензальдег да (п-ДМАБА) в 20%-ном растворе соля ной кислоты, спектрофотометрическое определение интенсивности окраски об разующего хромогена, по которой судят о количестве уробилинов в моче 1. Недостатком известного устройства является то, что реактив Эрлиха, ввиду наличия в нем соляной кислоты, способен вступать в реакцию не только с уробилином, но и с другими компонентами мочи, и образовывать с пос ледними хромоген розового цвета, ана логичной хромогену, образующемуся за счет реакции с уробилином. Образование неспецифического хромогена обуславливает завышение пoлyчae ыx величин, ввиду чего способ является неточным. Цель изобретения - позышение точности определения. Поставленная цель достигается тем, что согласно способу определения количества уробилинов в моче, включаюше му добавление к пробе раствора п-диметиламинобенз альдегида (п-ДМАБА) с последукщей спектрофотометрией полученного окрашенного комплекса, (п-дйметиламинобензальдегид растворяют в этиловом спирте. Пример. К1мл мочи приливают 0,1 мл 2%-ного раствора п-диметиламинобензальдегида в этиловом спирте, смешивают и через 10-15 мин после возникновения розового хромогена измеряют оптическую плотность окраски с помощью спектрофотометра СФ-44 на волне 355 нм. Количество уробилинов рассчитывают по калибровочному графику. Калибровочный график строят следующим образом. После трехкратной очистки фракции уробилиновых тел, полученной из мочи больного инфекционным гепатитом, на колонке из сефадекса G-25,fine получают кристаллы уробилиновых тел лиофилизации маточного раствора. Из кристаллов готовят основной 100 мг% водный раствор: 10,0 мг кристаллов растворяют р 10,0 мл воды при комнатной температуре. После этого в ряд пробирок вносят по 0,1-0,2-0,3 мл основного раствора и доводят в каждой пробирке объем водой до 1,0 мл. Получают рабочие растворыс содержанием в каждой пробирке 100,0-200,0300 0 мкг уробилиновых тел. в каждую пробирку, содержащую 1,0 мл рабочего раствора,, добавляют 0,1 мл 2%-ного. раствора п-ДМАБА в этиловом спирте. Интенсивность поглощения образующегося хромогена розового цвета измеряют с помощью спектрофотометра СФ-44 на волне 355 нм пробив контроля, в котором вместо раствора уробилинов взята вода. В результате замены растворителя соляной кислоты на этиловый спирт - Исключается образование неспецифического розового хромогена; Растворение п-ДМАБА в этиловом спирте обеспечивает образование розового хромогена за счет реакции п-ДМАБА только с уробилинами, что ведет к повышению точности способа. Формула изобретения Способ определения количества уробилинов в моче, включающий добавлен ие к пробе раствора п-диметиламинобен3альдегида с последующей спектрофотометриёй полученного окрашенного комплекса, отличающийся тем, что, с целью повышения точности определения,п-диметилё№1инобензальдегид растворяют в этиловом спирте. Источники информации, принятые во внимание при экспертизе 1. Справочник по функциональной диагностике. М., Медицина, 1970, с. 648.