Способ выделения уробилина Советский патент 1981 года по МПК G01N33/72 

(54) СПОСОБ ВЫДЕЛЕНИЯ УРОБИЛИНА

Изобретение относится к области медицины и может быть использовано в лабораторной диагностике. Известен способ выделения уробилина путем экстракции хлороформом с последующим выпариванием последнего расворением в спирте образовавшегося осадка, обработкой полученного раствора соляной кислотой в присутствии хлорного железа при повышенно температуре 1. Однако известным способом трудно выделить D-уробилин, Цель изобретения - выделение Dуробилина. Эта цель достигается тем, что выделяют уробилин путем экстракции хлороформом с последующим выпариванием последнего растворением в спи те образовавшегося осадка, обработк полученного раствора, соляной кислотой в присутствии хлорного железа при повышенной температуре, перед э стракцией в пробу добавляют хлористый барий, из образовавшейся смеси путем центрифугирования удаляют оса док и экстракцию ведут при рН 4,5. Способ осуществляют следующим об разом. Берут 10 мл мочи, подкисляют ее несколькими каплями ледяной уксусной кислоты дорН 4,5 для улучшения экстракции уробилина. Добавляют 2,5 мл хлористого бария, чем осаждают билирубин, большое количество которого мешает ходу мезобиливиолиновой реакции. Выпавший осадок центрифугируют 15 мин при скорости 3000 об/мин. Надосадочную жидкость экстрагируют в течение 5 мин. Хлороформенный экстракт концентрируют и выпаривают при на водяной бане. Для проведения мезобиливиолиновой реакции осадок растворяют в 5мл этилового спирта,добавляют 0,5мл 100мг % раствора хлорного железа и б М соля- ной кислоты. Пробирку, помещают в водяную баню с температурой на 15 мин для полного окисления уробилиновых тел хлорным железом. Пример. ;Больная BV 57 лет. Первоначальный диагноз; вирусный. гепатит. Болезнь протекает остро, аблюдается желтуха, боли в животе, Тошнота, рвота, зуд кожи, повышенная температура, С диагнозом вирусный гепатит больная госпитализирована в клинику, где поставлен диагноз-рак головки поджелудочной железы.

У больной берут 10 Ш1 мочи на обследование для выявления в ней D-уробилина.. Предварительно ocaJкдaют билирубин, добавляя хлористый барий, с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 15 ми Присутствующий в моче билирубин может вступить в ход мёзобияиниолиновой реакции самым мешать вы йвлению D-уробилина. Мочу, свободную от билирубина, подкисляют строго до дН 4,5 . Именно при этом значении :рН достигают полную экстракцию р- уробилина. Экстракцию проводят хлороформом в 2 этапа по 10 мл. Весь хлороформ концентрируютв одну пробирку, которую помещают в водяную баню при 75°С до полного выпаривания. Для проведения мезобиливиолиновой реакции осадок растворяют в 5 мл. этилового спирта. Берут строго 0,5 мл 100 мг % раствора хлорного железа в б М соляной кислоты и добавляют к уробилину растворенному в 5 мл этилового спирта. Для дальнейшего развития реакции пробирку помещают в водяную баню с температурой на 15 мин. В пробирке наблюдается бледно-зеленая окраска.Результа реакции оценивают на спектрофотометре СФ-16. На волне 495 нм регистрируют содержание -уробилина 0,125, на волне. 540 нм - содержание 1-уробилина 0,. волне 640 нм - содержание .D-уробилина 0,087 оптических единиц.,В процентном соотношении это выражается следующим образом: Е- уробилин 44%, i-уробилин 25% f О уробилин 31%. Выделены все три фракции уробилинов, где содержание В уройилина в 15% и более указывает на наличие подпеченочной желтухи опухолевого генеза.

Вольному на основании клинических данных, данных лабораторного обследования, поставлен диагноз - рак головки поджелудочной железы, с такик диагнозом больная направлена в хирургическую клинику.

Предлагаемым способом исследования биологических жидкостей на уробилин проведено 1594 исследования во всех 1594 случаях выделен D-уробилин различной концентрации. Моча больных вирусным гепатитом (1272 исследования) содержала 15% D-уроби лина и меньше и определялась 2-3 дн затем D-уробилин исчезал совсем. В моче больных подпеченочной желтухой опухолевого генеза содержание Dуробилина равнялось 15% и более и с течением времени возрастало (322 исследования).

Предлагаемый способ позволяет выделять D-уробилин и может быть широко использован в лабораторной диагностике подпеченочной желтухи опухолевого генеза.

Формула изобретения

Способ выделения уробилина путем экстракции хлороформом с последуювщм выпариванием последнего растворением в спирте образовавшегося осадка f обработкой полученного раствора соляной кислотой в присутствии хлорного,, железа при повышенной температуре, отличающийся тем,, что, с целью выделения D-уробилина, перед экстракцией в пробу добавляют хлористый барий, из образовавшейся смеси путем центрифугирования удаляют осадок и экстракцию ведут при рН 4,5.

Источники информации, принятые во вниманиепри экспертизе

1. Baumgartel Т., Phys о 1 одiе und BMirubinsstoffurchsele als grundlagen der IkterusfОrschubg , Stuttgart, 1950.