ВАКЦИНА ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1994 года по МПК A61K39/00 

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к вакцинам против трихофитии животных.

Известна вакцина ЛТФ-130 и вакцина ТФ-130 (К) против трихофитии животных, преимущественно крупного рогатого скота, содержащая антиген из штамма Trichophyton faviforme N 130 (syn. Tr. verrucosum) или антиген из штамма Tr. faviforme 130 Л и желатин-сахарозный стабилизатор [1], [2].

Недостатком известных вакцин является то, что они профилактируют заболевание только у одного вида животных - крупного рогатого скота и только к одному виду возбудителя Tr. faviforme.

Целью изобретения является разработка высокоиммуногенной вакцины против трихофитии животных вызываемой Tr. verrucosum, Tr. verrucosum var. autotrophicum, Tr. mentagrophytes, Tr. equinum, Tr. sarkisovii.

Это достигается тем, что вакцина дополнительно содержит антиген из штамма Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 при следующем соотношении компонентов, (мас. /об. %): Антиген из штамма Tr. verrucosum 130 Л 300-600 млн микроконидий/см3 Антиген из штамма Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 300-600 млн микроконидий/см3 Сахароза 10,0-20,0 Желатин 1,5-4,0 Вода Остальное
Для изготовления вакцины используют штамм Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27.

Штамм Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 получен из эпизоотического, выделенного от белой мыши, методом направленного ступенчатого отбора по признаку спорообразования наиболее быстро растущих колоний с активным накоплением микроконидий.

Штамм Tr. mentagrophytes N 27 депонирован в коллекции микроорганизмов Всероссийского государственного научно-исследовательского института контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов и имеет регистрационный номер 27.

Штамм гриба Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 характеризуется следующими признаками и свойствами.

Морфологические признаки. Мицелий не окрашен, ровный, ветвистый, септированный, может распадаться на фрагменты, терминальные гифы не всегда образуют спирали (обычно 3-5 завитков), диаметр мицелия 2,0-3,0 мкм. Микроконидии многочисленные, круглые, грушевидные, удлиненные, близкие к палочковидной форме, располагающиеся на поверхности мицелия гроздьями, чаще отдельно, размер 1,5-5,2 мкм. Макроконидии единичные. Количество перегородок 1-5, чаще 1-2, размером 10-30 х 3-8 мкм. В культурах 20-30-дневного возраста могут наблюдаться хламидоспоры округлой формы с двуконтурной оболочкой, всегда единичные, 3,0-5,0 мкм в диаметре. Артроспоры возникают на отдельных участках мицелия, тонкостенные, по форме напоминают овальные или палочковидные микроконидии 3,0-9,0 мкм. Культуральные свойства. На сусло-агаре растет в виде плоской белой, бархатистой колонии с незначительным возвышением в центре, растущий край ровный, реверс красновато-коричневый, диаметр колонии 50-90 мм (15-20 дневная культура).

На агаре Сабуро растет в виде плоской, белой, бархатистой с кремовым оттенком колонии с небольшим возвышением в центре, растущий край ровный, реверс бледно-желтый, иногда более темный в центре, размер колонии 50-90 мм (15-20-дневная культура).

На среде Геннеберга растет в виде белой, бархатистой, радиально-складчатой колонии, растущий край паутинистый, реверс красновато-фиолетовый, диаметр колонии 50-80 мм (15-20-дневная культура).

Спорообразование. Максимальный уровень спорообразования на сусло-агаре 198,4 - 259,2 млн/см3.

Вирулентные свойства. При внутримышечном введении культура штамма Tr. mentagrophytes N 27 у морских свинок, кроликов, овец, коз, телят спустя 2-3 недели на месте инъекции развивается специфический локализованный поверхностный очажок диаметром 2,0-2,5 см, который самопроизвольно излечивается в течение 15-20 дней. Микологически выделить возбудитель не удается. При нанесении культуры штамма неиммунизированным животным на скарифицированную кожу в дозе 0,25 млн/см3 микроконидий на месте аппликации развивается в течение 10-20 дней типичный трихофитийный очаг. Выделенный из патологического материала штамм по своим свойствам соответствует исходному.

Антигенные свойства. На введение культуры штамма в организме телят, овец, кроликов образуются специфические агглютинины в титрах 1:40 -1:1280.

Иммуногенные свойства. При двукратном внутримышечном введении телятам, кроликам вакцины, изготовленной из данного штамма, в дозе, содержащей 10-20 млн живых микроконидий, у животных формируется напряженный иммунитет к последующему заражению трихофителий продолжительностью не менее 5 лет (срок наблюдения).

Штамм Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 отличается от эпизоотических слабой вирулентностью, отсутствием заражения при контакте между животными, высокой активностью накопления микроконидий и иммуногенностью при внутримышечном введении животным.

П р и м е р 1. Для получения вакцины 15-20-дневные культуры штаммов Tr. verrucosum 130 Л и Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 выращивают раздельно в матрасных колбах на сусло-агаре (рН 6,2-6,8) при температуре 26-28оС в течение 12-20 дней.

Выращенную грибницу каждой культуры в условиях асептики снимают с поверхности питательной среды специальными скребками и помещают в стерильные банки. Грибную массу каждого штамма гомогенизируют в миксерах или коллоидной мельнице, а затем с помощью стерильной воды полученный гомогенат Tr. verrucosum 130 Л ресуспензируют до концентрации микроконидий 300 млн/см3, а гомогенат Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27-600 млн/см3. Ресуспензирование проводят в присутствии пенициллина или стрептомицина из расчета 100 ЕД на 1 см3 гомогената. Гомогенат штамма гриба Tr. verrucosum 130 Л объединяют в равном объеме с гомогенатом штамма гриба Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27. К полученной суспензии грибной массы добавляют равное количество стабилизатора (рН 6,2-6,8), содержащего в воде 10% сахарозы и 1,5% желатины. Все тщательно перемешивают, разливают в стерильные флаконы и лиофильно высушивают.

П р и м е р 2. Вакцину получают аналогично, как описано в примере 1. Для ее приготовления используют гомогенат штаммов грибов Tr. verrucosum 130 Л и Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 с концентрацией микроконидий 450 млн/см3, а в качестве стабилизатора водный раствор, содержащий 15% сахарозы и 2,5% желатина.

П р и м е р 3. Вакцину против трихофитии животных приготавливают аналогично, как описано в примере 1. Для ее получения используют гомогенат штамма гриба Tr. verrucosum 130 Л с концентрацией микроконидий 600 млн/см3 и гомогенат штамма Tr. mentagrophytes N 27 с концентрацией микроконидий 300 млн/см3. В качестве стабилизатора используют водный раствор, содержащий 20% сахарозы и 4% желатина.

Готовая вакцина представляет собой однородную пористую сухую массу в виде таблетки серого цвета. Вакцина сохраняет свои биологические свойства при условии хранения в закрытых сухих, темных помещениях при температуре 2-10оС. Срок годности 12 мес. К вакцине прилагаются флаконы со стерильным разбавителем.

П р и м е р 4. Приготовленные серии вакцины "Вермет" против трихофитии животных по примерам 1, 2, 3 перед применением растворяют в разбавителе из расчета 1 доза в 1 см3. Получают серии вакцины "Вермет", содержащие в прививочной дозе следующую концентрацию антигенов в млн/см3 (табл. 1).

Вакцину "Вермет" по примерам 1-3 используют для иммунизации телят, вводя внутримышечно двукратно с интервалом 10-14 дней в дозе 1 см3.

В качестве контроля испытывают аналогично приготовленные вакцины из штамма Tr. verrucosum 130 Л и Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 с концентрацией микроконидий антигена в прививочной дозе 7,5 млн/см3. Через 35 дней после второй иммунизации телят заражают вирулентными культурами штаммов Tr. verrucosum N 153 (ТВ-153), Tr. mentagrophytes N 251 (ТМ-251), Tr. sarkicovii N 724 (ТС-724), Tr. verrucosum var. autotrophicum 118 (ТВА-188). Одновременно заражают этими же культурами шесть контрольных (неиммунизированных) телят.

Результаты экспериментального заражения телят представлены в табл. 2.

Из таблицы следует, что 1-3 серии вакцины "Вермет" у иммунизированных телят вырабатывают напряженный (100%) иммунитет против трихофитии при экспериментальном заражении. Иммунизация телят моновакцинами не вызывает достаточно стойкого иммунитета при последующем заражении гетерологичными культурами возбудителей трихофитии. Телята, ранее не иммунизированные и не болевшие трихофитией, восприимчивы к экспериментальному заражению вирулентными культурами возбудителей трихофитии.

П р и м е р 5. Тремя опытными сериями вакцины "Вермет" аналогично примеру 4 иммунизируют 14 коз с последующим их заражением вирулентными культурами штаммов Tr. verrucosum N 153 и Tr. mentagrophytes N 251. Контрольных животных (2 головы) не вакцинируют.

Все вакцинированные животные не заболели трихофитией, у контрольных были отмечены все признаки заболевания с выделением из пораженных очагов указанных штаммов вирулентных культур.

П р и м е р 6. Для иммунизации 10 кроликов породы шиншилла живой массой 2,5-3,0 кг используют вакцину "Вермет" по примеру 2. Вакцину перед применением растворяют в разбавителе из расчета 1 доза в 1 см3. Получают следующую концентрацию антигенов в 1 прививочной дозе:
Tr. verrucosum 130 Л 7,5 млн микроконидий
Tr. mentagrophytes ВГНКИ N 27 7,5 млн микроконидий Вакцину вводят кроликам внутримышечно двукратно в дозе 0,5 см3. В качестве контроля для вакцинации 10 кроликов используют вакцину из штамма Tr. mentagrophytes N 135, содержащую в 1 прививочной дозе 20 млн микроконидий в 1 см3, которую применяют внутримышечно в область ягодичных мышц. Через 30 дней кроликов заражают накожно вирулентными культурами штаммов Tr. mentagrophytes N 251 и Tr. mentagtophytes N 18. В течение 25 дней учитывают результаты заражений. Установлено, что использование вакцины "Вермет" способствует образованию надежного иммунитета у всех иммунизированных кроликов, в то время как использование известной вакцины "Ментавак" не дает надежного эффекта - 2 кролика из 10 заболели трихофитией, а из очагов поражения выделены культуры вирулентных штаммов.

П р и м е р 7. 20 телят иммунизируют вариантами вакцины "Вермет" по примеру 1 и 3 с концентрацией антигенов в прививочной дозе по примеру 4. Каждой группе телят (10 голов) вакцину применяют внутримышечно двукратно в объеме 1 см3 с интервалом 10-14 дней. Через 4 и 9 месяцев после второй иммунизации обе группы телят заражают вирулентными культурами штаммов Tr. verrucosum N 153 и Tr. mentagrophytes N 251. В результате ни один теленок не заболел. Таким образом вакцина "Вермет" сохраняет стойкий иммунитет через 4 и 9 месяцев после заражения.

Вакцина "Вермет" высокоэффективна против трихофитии животных. Вакцину "Вермет" с профилактической целью применяют двукратно с интервалом 10-14 дней в следующих дозах: телятам от 14 дней до 4 месяцев 1 см3, старше 5 месяцев - 2 см3, и мелкому рогатому скоту (овцы, козы) от 3 до 6 месяцев - 0,5 см3, старше 6 месяцев - 1 см3. Кроликам массой 2,5-3,0 кг вводят 0,3-0,5 см3 с профилактической целью. С лечебной целью вакцину вводят больным животным двукратно с интервалом 10-14 дней в удвоенной дозировке.

Использование вакцины "Вермет" в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по борьбе с трихофитией животных.

Использование: биотехнология, средства специфической профилактики против трихофитии животных. Сущность изобретения: в состав вакцины дополнительно вводят антиген из штамма Tr. mentadrophytes ВГНКИ N 27-ДЕП. Вакцина "Вермет" содержит также антиген из штамма Tr. verrucosum 1 ЗОЛ и сахарозо-желатиновый стабилизатор в эффективных соотношениях. Использование вакцины "Вермет" в ветеринарной практике позволит повысить эффективность мероприятий по борьбе с трихофитией животных. 2 табл.

ВАКЦИНА ПРОТИВ ТРИХОФИТИИ ЖИВОТНЫХ, содержащая антиген из штамма Trichophyton verrucosum 130 Л, сахарозу, желатин и воду, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит антиген из штамма Trichophyton mentagrophytes ВГНКИ N 27-ДЕП при следующем соотношении компонентов, мас.%:
Сахароза 10,0 - 20,0
Желатин 1,5 - 4,0
Вода Остальное,
а также антиген из штамма Trichophyton verrucosum 130 Л и антиген из штамма Trichophyton mentagrophytes ВГНКИ N 27-ДЕП, взятые в равных соотношениях, в количестве 300 - 600 млн микроконидий/см³ соответственно.