СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАРБЕНИЦИЛЛИНА В РАСТВОРЕ Российский патент 1995 года по МПК A61K31/15 

Изобретение относится к аналитической химии и может быть использовано для определения карбенициллина в лекарственных формах.

Карбенициллин - отечественный препарат, относящийся к классу β -лактамных антибиотиков. В настоящее время широко используются для количественного определения антибиотиков и карбенициллина, в частности, титрометрические методы, микробиологические методы, спектрофотометрические методы. Было показано, что для количественного определения антибиотиков можно использовать собственную флуоресценцию вещества, однако карбенициллин в водной среде самостоятельно флуоресцирует довольно слабо. В известной монографии показана возможность определения карбенициллина тонкослойной хроматографией с денситометрией флуоресцирующих пятен, но к сожалению у данного метода очень не высокая чувствительность - около 150 мкг. Был разработан чувствительный способ определения некоторых β -лактамных антибиотиков, основанный на кислотном гидролизе и измерении флуоресценции в щелочной среде, но для карбенициллина чувствительность данного метода оказалась не столь высокой.

В качестве прототипа был выбран метод флуориметрического определения карбенициллина по Belal F.

Целью изобретения является повышение чувствительности флуориметрического определения карбенициллина, что достигается гидролизом в фосфатном буфере рН 4,4 в присутствии лимонной кислоты и сульфата меди (II).

Сущность заявленного способа определения карбенициллина заключается в том, что к пробе карбенициллина прибавляют фосфатный буфер рН 4,4, лимонную кислоту и раствор сульфата меди (II), после чего нагревают на кипящей бане 30 мин и после охлаждения измеряют флуоресценцию. Для достижения поставленной цели были определены оптимальные условия определения карбенициллина. В табл.1 показаны спектры возбуждения и испускания флуоресценции карбенициллина, определенные на флуориметре БИАН-130 М, в качестве регистрирующего прибора использовали зашунтированный цифровой вольтметр с сопротивлением шунта 300 кОм.

Как видно из табл.1, максимум флуоресценции достигается при длине волны возбуждения 365 нм и длине волны эмиссии 470 нм.

Далее была исследована зависимость флуоресценции карбенициллина от рН фосфатного буфера, которая представлена в табл.2.

Из табл. 2 следует, что оптимальные значения рН буферного раствора находятся в пределах 4,1 - 4,75.

Далее также были определены оптимальные концентрации лимонной кислоты и сульфата меди (II), представленные в табл.3 и 4 соответственно.

Анализ табл.3 и 4 приводит к заключению, что при концентрации лимонной кислоты 2-5 мг/мл и концентрации сульфата меди 200-400 мкг/мл достигается максимальная флуоресценция карбенициллина.

Сравнение предложенного способа определения карбенициллина и ранее известных представлены в табл.5.

Как видно из табл.5 предложенный способ позволяет с высокой чувствительностью (1 мкг/мл) определять карбенициллин, в то время как известные способы флуориметрического определения карбенициллина не приводят к желаемому результату. Линейная зависимость флуоресценции от содержания карбенициллина в пробе лежит в пределах 1-50 мг.

Воспроизводимость заявленного способа определения карбенициллина была оценена на серии из 5 определений и представлена в табл.6.

П р и м е р. Реактивы и материалы: 0,1 М калий-фосфатный буфер рН 4,4; 1,0%-ный раствор сульфата меди (II); 5,0%-ный раствор лимонной кислоты.

Карбенициллин, расфасованный в стеклянные флаконы по 1 г, берут точную навеску 10 мг и растворяют в мерной колбе на 100 мл, доводя до метки дистиллированной водой. В пробирку к 4,0 мл 0,1 М фосфатного буфера рН 4,4 прибавляют 0,5 мл 5%-ного раствор лимонной кислоты, 0,1 мл 1,0% раствора сульфата меди и 0,5 мл пробы, содержащей карбенициллин. Далее содержимое пробирки перемешивают и подогревают на водяной бане при 100^оС 30 мин. После охлаждения измеряли флуоресценцию при длине волны возбуждения 365 нм и длине волны эмиссии 470 нм в кювете объемом 5 мл. В качестве контроля вместо пробы карбенициллина прибавляли дистиллированную воду, после чего проводили аналогичные измерения. Количество карбенициллина в пробе определяли по градуировочному графику, построенному на стандартных растворах.

Использование: в фармакологии. Сущность изобретения: определение проводят в фосфатном буфере pH 4,1-4,7, нагревая пробу на водяной бане в присутствии лимонной кислоты с концентрацией 2-5 мг/мл и сульфата меди с концентрацией 200-400 мкг/мл, с последующим измерением флуоресценции образца. Способ позволяет повысить чувствительность анализа. 6 табл.

СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КАРБЕНИЦИЛЛИНА В РАСТВОРЕ, включающий кислотный гидролиз при 100^oС в течение 30 мин раствора карбенициллина, флуориметрирование и расчет относительного контроля, отличающийся тем, что гидролиз раствора карбенициллина проводят в фосфатном буфере с рН 4,1 - 4,75, содержащем лимонную кислоту в концентрации 2 - 5 мг/мл и сульфат меди (II) в концентрации 200 - 400 мкг/мл.