1
(21)4760331/14 (22)20.11.89 (46)15.11.91. Бюл. №42
(71)Винницкий медицинский институт им.Н.И.Пирогова
(72)В.М.Истошин. А.А.Пентюк, Н.Б.Луцюк, В.И.Богомаз, Р.А.Мусин, В.Г.Илыка
и Г.З.Лычик
(53)612.461.175:612.111.1 (088.8)
(56) Renneberg R.et al Anal.Chem.Acta, 1982,
v.134.p.359-364.
(54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМИДОПИРИНА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ (57) Изобретение относится к медицине, а именно биохимии. Целью изобретения является повышение специфичности определения амидопирина. Это достигается тем, что определение амидопирина проводят при рН 7,2 - 7,6 и длине волны А 570 - 580 нм. Чувствительность способа 1,15 мкг/мл, точность 1 мкг/мл. 3 табл.
| название | год | авторы | номер документа |
|---|---|---|---|
| Способ определения 4-аминоантипирина в биологических жидкостях | 1989 |
|
SU1705745A1 |
| Способ определения диклофенака натрия в биологической жидкости | 1987 |
|
SU1471131A1 |
| Способ определения пироксидазной активности биологических объектов | 1988 |
|
SU1636773A1 |
| РЕАКТИВ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЛЮКОЗЫ В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ | 1991 |
|
RU2009499C1 |
| СПОСОБ ГЕНЕРАЦИИ ПЕРОКСИДА ВОДОРОДА НА ОСНОВЕ НАНО- И/ИЛИ МИКРОЧАСТИЦ ZnO2 ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В СПЕКТРОФОТОМЕТРИЧЕСКОМ И ЛЮМИНЕСЦЕНТНОМ АНАЛИЗЕ С УЧАСТИЕМ ПЕРОКСИДАЗЫ | 2022 |
|
RU2800949C1 |
| ДИАГНОСТИЧЕСКАЯ ТЕСТ-СИСТЕМА ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ВИРУСА ГЕПАТИТА А | 1992 |
|
RU2065164C1 |
| Штамм гибридных культивируемых клеток MUS.мUSсULUS L., используемый для получения моноклональных антител к кислотостабильному ингибитору трипсина из мочи человека | 1990 |
|
SU1778183A1 |
| Способ определения перекиси водорода в биологических объектах | 1988 |
|
SU1636772A1 |
| Способ определения вольтарена в биологической жидкости | 1987 |
|
SU1469459A1 |
| Способ определения антител к катехоламину | 1986 |
|
SU1656455A1 |
Изобретение относится к медицине,а именно к биохимии, и может быть использовано для определения амидопирина в биологических жидкостях в присутствии его метаболита 4-аминоантипирина (4-ААП).
Целью изобретения является повышение специфичности способа определения амидопирина.
Для выявления оптимальных условий определения амидопирина изучено влияние реакции среды (рН), концентрации перокси- дазы и пероксида водорода, определен максимум поглощения окрашенного продукта реакции и другие параметры метода.
Изучено влияние реакции среды на выход продуктов окисления амидопирина и 4-ААП (табл.1).
Из данных табл.1 видно, что при рН 7,2 - 7,6 4-ААП окрашенных продуктов практически не образует, в то время как амидопирин при этих значениях рН дает наибольшую интенсивность окрашивания.
Определение максимум а поглощения продуктов окисления амидопирина (табл.2) проводили на спектрофотометре СФ-26.
Как видно из данных табл,2, определение амидопирина следует проводить при
570 - 580 нм, когда достигается максимум поглощения.
Воспроизводимость способа определения (табл.3) была оценена на серии из восьми опытов.
Прямое определение амидопирина в биологической жидкости, в частности в моче, оказалось невозможным из-за мешающего влияния других компонентов мочи, поэтому была применена экстакция амидопирина из мочи хлороформом. Полученный хлороформный экстракт отделяли, упаривали на водяной бане при 40 - 60°С, сухой экстракт растворяли в дистиллированной воде и проводили определение с помощью пероксидазы.
Пример. Реактивы. Раствор пероксидазы из хрена в 0.1 М фосфатном буфере с концентрацией 10 ЕД/мл и рН 7,4. Пероксид водорода с концентрацией 4 мкмол ь/мл. Хлороформ.
Ход определения. К 2 частям мочи (2 мл) прибавить 5 частей хлороформа (5 мл) и экстрагировать в течение 10 мин в колбе с притертой пробкой, затем отцентрифугировать в течение 10 мин, отобрать хлороформный
(Л
С
Ј
О
ю
VI
4 Ю
экстракт и упарить его на водяной бане при 40 - 60°С.
К сухому экстракту добавить 2 части дистиллированной воды (2 мл) и встряхивать 5 мин до его растворения.
В чистую пробирку внести 0,1 часть раствора пероксидазы из хрена в 0,1 М фосфатном буфере (0,1 мл), прибавить 0,1 часть перокси- да водорода (0,1 мл) и 1 часть водного раствора пробы (1 мл), Оптическую плотность определяли через 2 мин при нм в кювете с длиной светового пути 1 см и объемом 0,4 мл.
Количество амидопирина рассчитывали по калибровочному графику.
Определение амидопирина в крови.
Реактивы аналогичны при определении в моче.
Ход определения. К 1 мл плазмы прибавляли 5 мл хлороформа и экстрагировали в течение 10 мин в колбе с притертой пробкой, после чего центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин, отбирали хлорофори
Выход окрашенных продуктов окисления амидопирина и 4-ААП в зависимости от рн среды.
Примечай ие:В пробе содержалось по 50 мкг амидопирина или 4-ААП.
Таблица 2
Примечание: в пробе 50 мкг амидопирина.
мный экстракт и упаривали на водяной бане при 40 - 60°С. К сухому остатку добавляли 0,5 мл 0,1 М фосфатного буфера с рН 7,4 встряхивали и прибавляли 0,1 мл раствора
5 пероксидазы хрена и 0,1 мл перекиси водорода, оптическую плотность измеряли через 2 мин при А 580 нм в кювете в длиной светового пути 1 см и объемом 0,4 мл. Количество амидопирина определяли по граду10 ировочному графику.
Чувствительность предлагаемого способа 1,15 мкг/мл, точность 1,0 мкг/мл, Формула изобретения Способ определения амидопирина в
15 биологических жидкостях путем его экстракции, окисления пероксидазой хрена и спектрофотометрирования окрашенного продукта, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности способа, 20 окисление амидопирина проводят при рН 7,2 - 7,6, а спектрофотометрируют при длине волны 570 - 580 нм.
Таблица
Продолжение табл.1
Примечание: Х- среднее арифметическое; S - средняя квадратическая ошибка; V - коэффициент вариации.
ТаблицаЗ
