Способ определения 4-аминоантипирина в биологических жидкостях Советский патент 1992 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к медицине, а именно к биохимии, и может быть использовано для определения 4-амино- антипирина (4-ААЛ в присутствии амидопирина в биологических жидкостях. Целью изобретения является повышение специфичности метода определения 4-аминоантипирина.

В таблице показано влияние цистеи- на на оптичес кую плотность 4-ААП и амидопирина.

Из таблицы видно, что прибавление цистеина практически полностью устраняет окраску продуктов окисления амидопирина, но не влияет на интенсивность окрашивания продуктов окисления 4-ААП, что дает возможность определять 4-AAJI в присутствии амидопирина, при этом оптимальная концентрация в конечном объеме находится в диапазоне 40-50 мкг/мл. Пример выполнения. Реактивы: раствор пероксидазы из хрена в 0,1 М ацетатном буфере рН 4,7

с концентрацией Ю ЕД/мл; перекись водорода концентрации 4 мкмоль/мл; хлороформ; раствор цистеина 5 мг/мл. Ход определения.

К 2 частям мочи (2 мл) прибавляли 5 частей хлороформа (5 мл) и экстрагировали 10 мин в колбе с притертой пробкой, затем центрифугировали 10 минут и отбирали хлороформный экстракт, который затем упаривапи на водяной бане при 40 60°с„

К сухому экстракту добавляли 2 части воды (2 мл) и встряхивали 5 мин для его растворения.

В чистую пробирку вносили 0,1 часть раствора перексидазы в 0,1 к ацетатном буфере с рН 4,7 (0,1 мл), прибавляли О,1 часть раствора перекиси водорода (0,1 мл), 1 часть пробы (1 мл). С одновременным включением секундомера через 30 с прибавляли 0,02 части раствора цистеина (0,02 мл) и измеряли оптическую плотность через 2 мин после приОлвле-

(Л

О

ел ч Јь ел

3

пия пробы. Лотометрирование проводили при длине волны 530 нм в кювете с длиной светового пути 1 см, объемом 0,4 мл.

Количество 4-ЛАП определяли по градуировочному графику.

Пример определения 4-аминоантипи- рина в крови.

Реактивы аналогичны при определении в моче.

Ход определения.

К 1 мл плазмы крови прибавляли 5 мл хлороформа и экстрагировали 1(1 мин в колбе с притерной пробкой, после чего центрифугировали 10 мин при 3000 об/мин, отбирали хлороформный экстракт и упаривали на водяной бане при 40-60°(;. К сухому остатку добавляли 0,5 мл 0,1 М ацетатного буфера с рН 4,7, встряхивали и прибавляли 0,1 мл раствора пероксидазы хрена и 0,1 мл раствора перекиси водорода с одновременным включением секундомера, через 30 с прибавляли 0,02 мл раствора цистеина и измеряли оптическую плотность через 90 с, после прибавления раствора цистеина, фотометрирование проводили при длине волны 530 нм в кювете с длиной светового пути 1 см, объемом 0,4 мл. Количество 4-аминоантипирина определяли по градуировочному графику.

Чувствительность и точность способа составляет 2,0 мкг/мл и 4,5% соот- ветственно.

7057(45.1

Формула изобретения

Способ определения 4-аминоантипи- рина в биологических жидкостях путем его экстракции, добавления окислителя в присутствии пероксидазы хрена и спектрофотометрирования окрашенных продуктов, отличающийся тем, что, с целью повышения специфичности, в реакционную смесь добавляют раствор цистеина при его конечной концентрации 40-50 мкг/мл.

Примечание,

В пробе содержалось 50 мкг 4-ААН или амидопирина. Цистеин прибавляли через 30 с после добавления всех компонентов

Иэобретение относится к медицине, в частности к биохимии. Целью изобретения является повышение специфичности пероксидазного метода определения А-аминоантипирина в биологических жидкостях. К исследуемым пробам прибавляют раствор цнстеина до конечной концентрации 40-50 мкг/мл, Чувствительность метЬда 2,0 мкг/нп, точность 4,5%. 1 табл„