ПРОИЗВОДНЫЕ ОКСАЗОЛА Российский патент 1995 года по МПК C07D263/46 A61K31/42 

Изобретение относится к гетероциклическим углеродным соединениям, имеющим лекарственные и биовоздействующие свойства, и к получению и использованию их. В частности, изобретение связывается с производными оксазола, которые являются ингибиторами агрегации кровяных пластинок.

Элдауз и др. (D.L.Aldous et al.J.Org.Chem., 25, 1151 (1960) описывают химию стирилоксазолов формулы
CH = CH , в которой R является водородом, пара-метокси-, орто-гидрокси- и 3,4-метилендиокси-группой.

Браун [1] описывает класс оксазол-2-полуглеродных алифатических монокарбоновых кислот, арилированных в положении 4 и/или 5 оксазольного кольца формулы
R¹ в которой каждый из заместителей R² и R³ является членом группы, состоящей из незамещенных фенильных, нафтильных, тиенильных и фурильных радикалов, замещенных заместителями, выбираемыми из группы, состоящей из галогеновых, низших алкильных, низших алкокси-, нитро- и трифторметильных радикалов и в которой R¹ выбирается из группы, состоящей из карбоксиалкильных и карбоксиалкенильных радикалов, каждый из которых содержит 2-5 атомов углерода, а амидов, производных гидроксановой кислоты, низших алкиловых сложных эфиров и низших алканоилокси-низших алкиловых сложных эфиров из них. Соединения патента США N 3578671 включают эффективное в клинике противовоспалительное средство, известное обычно как оксапрозин (R² = R³ = фенил, R¹ = =(CH₂)₂COOH).

Минвелл и др. описывают серии производных 2,3-дигидро-2-оксо-1Н-имидазол[4.5-в]-хинолинильного простого эфира формулы
_O в которой между прочим R₁ и R₂ являются водородом, а "alk-Y" является остатком алкановой кислоты и сложного эфира. Известные соединения имеют циклическую АМФ (аденозинмонофосфат) фосфодиэстеразную ингибирующую активность и являются полезными в качестве ингибиторов агрегации кровяных пластинок и/или в качестве кардиотонических средств.

Лаутеншлагер и др. описывает ряд трифенилимидазол-2-илоксиалкановых кислот формулы
в которой R¹, R², R³, R⁴, R⁵ и R⁶ каждый является Н, галогеном, алкилом, алкокси-группой и трифторметилом; n является целым числом 1-10, а R⁷ является Н, ионами щелочного металла, алкильной или бензильной группой. Соединения [2] являются полезными при лечении тромбоэмболической, воспалительной и/или атеросклеротической болезни у человека. Особенно предпочтительный член серий, в котором R¹-R⁶ является водородом, n - 7, а R⁷ - натрием (идентифицируемый в области техники как октимибат натрия) описан как обладающий противоагрегаторной активностью и разрабатывается в клинике в качестве антигиперлипидемического средства.

По своей особенности изобретение относится к производным оксазола, имеющим формулы (1)
S - (CH₂)_nCO₂R где n составляет 7-8, а R представляет собой водород или низший алкил, которые являются ингибиторами аденозин-дифосфата и индуцированной коллагеном агрегации человеческой плазмы, обогащенной тромбоцитами, и предназначены для использования в качестве ингибиторов агрегации кровяных пластинок млекопитающих.

В соответствии с изобретением соединения формулы (1) получаются по способу, включающему:
(а) гидролиз соединения формулы (2)
S - (CH₂)_nCO₂R^a в которой n составляет 7-9, а R^а является низшим алкилом, до соответствующей кислоты, или
(б) этерификацию соединения формулы (3)
S - (CH₂)_nCO₂H в которой n составляет 7-9, с помощью низшего алканола, или (в) алкилирование 4,5-дифенил-2-(3Н)-оксазолтиона с помощью Br-(CH₂)nCOOR^a в котором n является 7-8, а R^а является низшим алкилом.

Соединения формулы (1) имеют фармакологические и фармацевтические свойства, которые делают их особенно полезными в качестве ингибиторов агрегации кровяных пластинок (тромбоцитов).

Агрегация тромбоцитов считается частью сложного физиологического механизма образования тромба в сосудистой системе. Тромбоэмболическое явление, т.е. образование тромбов, связывается с гемостазом и рядом болезненных, состояний у млекопитающих, включая тромбофлебит, флеботромбоз, церебральный тромбоз, коронарный тромбоз и ретинальный сосудистый тромбоз. Повышение в склонности к агрегации тромбоцитов, иногда называемое адгезивностью ("прилипаемостью") тромбоцитов, наблюдается после родов, хирургических операций, таких как хирургия шунтирования коронарной артерии, трансплантация органов, пластическая операция на сосудах, имплантаций искусственных клапанов сердца, не говоря о других, и при ишемической болезни сердца, атеросклерозе, множественном склерозе, внутричерепных опухолях, тромбоэмболизме и гиперлипемии. Таким образом, соединения изобретения, которые имеют антитромбогенные свойства (ингибируют агрегацию кровяных пластинок), являются полезными при предупреждении или лечении состояний, включающих агрегацию тромбоцитов и тромбоз, такой как указывалось выше. Также считается, что рассматриваемые соединения имеют антиметастатический потенциал ввиду их свойств ингибирования тромбоцитов.

Фармакологические свойства рассматриваемых соединений могут быть продемонстрированы обычными in vitro и in vivo биологическими испытаниями, например следующие.

Ингибирование агрегации тромбоцитов человека in vitro.

Агрегометр (прибор для измерения агрегации) был использован по методу Борна (C.V.R.Born J.Physiоl (Лондон), 1962, 162, 67-68), который модифицирован Мустардом и др. (Mustard J. F.et al. J.Lab. Clin Med., 1964, 64, 548-599), чтобы оценить ин витро активность различных соединений относительно ингибирования аденозин-дифосфатом (АДФ).

Рука добровольца-донора очищается с помощью 70%-ного этилового спирта. Стерилизованные шприц объемом 20 мл и игла были использованы, чтобы отобрать 20 мл крови. Кровь немедленно добавлялась в трубку для испытания, содержащую 3,8% -ный цитрат натрия, чтобы предупредить свертывание крови (1 ч. цитрата на 9 ч. крови).

Обогащенная тромбоцитами плазма (ОТП) была выделена центрифугированием в течение 10 мин со скоростью 1000 об/мин (140 хg) из цитратной (3,8%) крови человека. Все стеклянные изделия, используемые для получения ОТП, обрабатывались силиконом. АДФ в конечной концентрации 0,5 мкг/мл или 0,05 мл коллагеновой суспензии, полученной по методу, описанному Эвансом и др. (Evans G.et al. J.Exp. Med, 1968, 128, 877-894), был использован, чтобы индуцировать агрегацию.Различные испытуемые соединения были растворены в диметилсульфоксиде (ДМСО) с тем, чтобы 5 мкл, добавленного к обогащенной тромбоцитами плазме, дали бы требуемую концентрацию для испытания. Контрольные испытания с наполнителем были осуществлены и сравнены с агрегацией, индуцированной в обогащенной тромбоцитами плазме, содержащей концентрации испытуемых соединений. Были получены кривые ответной реакции на дозу, вычислены величины ингибирующей концентрации (IC₅₀) и отмечен процент ингибирования при 32 мкг/мл. В этом испытании величины IC₅₀ для дипиридамола, полезного в клинике антитромбогенного средства, составляет 512 мкг/мл против АДФ. Результаты ингибирования агрегации тромбоцитов человека in vitro и результаты испытаний для соединений примеров 1-4 представлены в таблице.

Ин виво ингибирование тромбоза, индуцированного лазером in vivo.

Метод тромбоза, индуцированного лазером, является модификацией методики, разработанной Сандерсом и др. (Sanders, A.G. et al в Brit. J. Exp.pathol, 1954, 35, 331) и Грантом и др. (Grant, L., et al. в Proc. Soc. Exp. Biol. Med, 1965, 119, 1123). Подробное описание этого метода описано Флемингом и др. (Fleming, J.S. et al) в книге Тромбоциты и Тромбоз (издатели Скрябин и Шерри, Балтимор, Универсал Парк Пресс, с. 247-262, 1974 в platelets and Thrombosis, A.Scziabine and S.Sherry, eds Baltimore, Univ Park Press.

Слуховые камеры Луцита хронически были имплантированы взрослым английским вислоухим кроликoм. Животные были приведены в спокойное лежачее состояние в положении супинации. Локализованное микрососудистое повреждение было вызвано путем фокусирования отдельного луча рубинового лазера через микроскоп в полость (просвет) сосуда с диаметром 10-60 мкМ. Это вызвало образование маленького тромба, состоящего из тромбоцитов, собранных вокруг сердцевины одного или двух поврежденных эритроцитов. Зона тромбов была определена в результате двух перпендикулярных измерений, сделанных путем использования окуляра микрометра. Среднюю зону тромбов (мкМ²), полученную для 10 испытаний каждого кролика, использовали в качестве контрольной величины. Испытуемое соединение было введено перорально и последозовые испытания были осуществлены при выбранных периодах времени. Фармакологическая активность была оценена путем сравнения до- и последозовых средних зон тромбов.

В приведенной выше биолазерной модели, тромбоз, соединение примера 6 проявляет 53%-ное ингибирование тромбоза при пероральной дозе 10 мг/кг, 38% -ное ингибирование при дозе 3 мг/кг и 23%-ное ингибирование при дозе 1 мг/кг живого веса.

Дозировка, применяемая в терапевтических способах изобретения, варьирует с изменением формы введения, конкретно выбранного соединения, испытуемого субъекта и требуемого эффекта. Подходящие эффективные дозы для животных варьируют в пределах 0,1-50 мг/кг живого веса перорально и 0,05-10 мг/кг живого веса парентерально (большей частью характеризуется как подкожная, внутримышечная и внутривенная инъекция). Предполагается, что эффективная унифицированная доза для человека варьирует в пределах 1-100 мг и предпочтительно 0,5-20 мг, вводимой от одного до трех раз в день. В соответствии с общепринятой клинической практикой эффективную дозу можно определить путем введения соединения формулы (1) при дозировке значительно меньшей дозы соединения, которая должна быть эффективной, и затем увеличением дозировки с незначительными возрастаниями до тех пор, пока не достигается требуемый эффект.

При проведении рассматриваемых терапевтических способов действующий ингредиент формулы (1) или соли щелочных металлов карбоновых кислот формулы (1) предпочтительно вводятся вместе с фармацевтически приемлемым носителем. Подходящими лекарственными формами для перорального использования являются таблетки, диспергируемые порошки, гранулы, капсулы, сиропы и эликсиры. Примерами парентеральных лекарственных форм являются растворы, суспензии, дисперсии, эмульсии и т.п. Композиции для перорального использования могут содержать один или более обычных адъвантов, таких как подслащивающие вещества, вещества, придающие вкус и аромат, красящие вещества и консервирующие средства для обеспечения композиции подходящей фармацевтической элегантности. Таблетки могут содержать действующий ингредиент в смеси с обычными фармацевтически приемлемыми наполнителями, включая инертные разбавители, такие как карбонат кальция, карбонат натрия, лактозы и тальк; гранулирующие и дезынтегрирующие средства, такие как крахмал и альгиновую кислоту; связующие средства, такие как крахмал, желатина и акация и смазывающие вещества, такие как стеарат магния, стеариновая кислота и тальк. Таблетки могут быть непокрытыми или покрытыми по известным методам, чтобы задерживать дезинтеграцию и поглощение в желудочно-кишечном тракте и тем самым обеспечивать длительное действие в течение продолжительного периода времени. Подобным образом, суспензия, сиропы и эликсиры могут содержать действующий ингредиент в смеси с любыми обычными наполнителями, применяемыми для получения таких композиций, как суспендирующие средства (например, метилцеллюлоза, трагакант и альгинат натрия), смачивающие вещества (например, лецитин, полиоксиэтиленстеарат) и консервирующие средства, такие как этиловый эфир пара-гидроксибензойной кислоты. Капсулы могут содержать действующий ингредиент самостоятельно или вместе с инертным твердым разбавителем, таким как карбонат кальция, фосфат кальция и каолин. Инъекцируемые композиции составляются, как это известно в данной области техники и могут содержать соответствующие диспергирующие или смачивающие вещества и суспендирующие средства, идентичные или подобные с упомянутыми выше.

В следующих примерах все температуры представляются в градусах стоградусной шкалы. Температуры плавления были зарегистрированы на приборе Томаса-Гувера для капиллярного определения точки плавления и являются неисправленными. Спектры протонного магнитного резонанса (^IН-ЯМР) были записаны на спектрометре Брукер АМ 300, Брукер WM 360 или Вариан Джемини. Все спектры были определены в CДСl₃ или ДМСО-d₆, если не указано особо, и химические сдвиги сообщаются в единицах дельта, сдвигаемых в слабое поле от внутреннего стандарта тетраметилсилана (ТМС), а константы взаимодействия между протонами сообщаются в герцах (Гц). Виды расщепления обозначаются следующим образом: с, синглет; д дублет; т. триплет; кв. квартет; м. мультиплет; уш. уширенный пик и дд. дублет дублета.

П р и м е р 1. Метиловый эфир 8-[(4,5-дифенил-2-оксазолил)-тио]-октановой кислоты
S - (CH₂)₇CO₂CH₃
Гидрид натрия (0,71 г 60%-ной дисперсии, 18 ммолей) добавляют к перемешиваемому раствору 4,5-дифенил-2-(3Н)-ок- сазолтиона (4,05 г, 16 ммолей) в диметилформамиде (50 мл), содержащемуся в атмосфере азота. Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 15 мин, чтобы получить суспензию, и по каплям добавляют раствор метилового эфира 8-бромоктановой кислоты (3,83 г, 16 ммолей) в ДМФА (10 мл). После завершения добавления реакционную смесь перемешивают при температуре окружающей среды в течение 2,5 ч и при 50^оС в течение 30 мин. Реакционную смесь разбавляют диэтиловым эфиром и водой и перемешивают. Органический слой отделяют, высушивают (MgSO₄) и концентрируют, чтобы в остатке получить масло, которое хроматографируют на колонке с силикагелью. Элюирование с помощью смеси гексанов и диэтилового эфира (сначала 2:1, затем 1:1 и наконец 1:2) дает метиловый эфир 8-[(4,5-дифенил-2-оксазолил)-тио] -октановой кислоты (4,40 г, 67,2%) в виде частичного гидрата.

Анализ.

Вычислено,%: C 69,46; H 6,70; N 3,33.

C₂₄H₂₇NO₃S˙0,3 H₂O.

Найдено,%: C 69,48; H 6,88; N 3,15.

I^Н-ЯМР (СДСl₃) δ : 1,26-2,33 (10Н, м); 2,30 (2Н, т); 3,24 (2Н, т); 3,66 (3Н, с); 7,31 (6Н, м) и 7,60 (4Н, м).

П р и м е р 2. 8-[(4,5-Дифенил-2-оксазолил)-тио]-октановая кислота
S - (CH₂)₇CO₂H
Метиловый эфир 8-[(4,5-дифенил-2-оксазолил)-тио]-октановой кислоты (2,0 г, 4,9 ммоль) растворяют в метаноле (30 мл). Добавляют раствор моногидрата гидроокиси лития (0,41 г, 9,8 ммоль) в воде (8 мл) и смесь нагревают при кипячении с обратным холодильником 1 ч. После охлаждения до комнатной температуры метанол удаляют под вакуумом, остаток разбавляют водой и подкисляют примерно до рН 2, используя разбавленный раствор соляной кислоты. Смесь экстрагируют этилацетатом, объединенные экстракты высушивают над MgSO₄ и концентрируют. Остаток хроматографируют на колонке с силикагелью, используя смесь CH₂Cl₂/MeOH (95/5) в качестве элюента, чтобы получить 8-[(4,5-дифенил-2-оксазолил)-тио]-октановую кислоту (1,70 г, 88%).

Анализ.

Вычислено,%: C 68,59; H 6,46; N 3,48.

C₂₃H₂₅NO₃S˙0,4 H₂O.

Найдено,%: C 68,84; H 6,57; N 3,23.

I_Н-ЯМР (СДСl₃) δ : 1,27-1,80 (10Н, м); 2,26 (2Н, т); 3,18 (2Н, т); 7,26 (6Н, м) и 7,48 (4Н, м).

П р и м е р 3. Метиловый эфир [3-[[(4,5-дифенил-2-оксазолил)-тио]-метил]-фенокси] уксусной кислоты.

S - CHOCH₂CO₂CH₃
4,5-Дифенил-2-(3Н)-оксазолтион (5,7 г, 22,8 ммоль) растворяют в ДМФА (100 мл). Гидрид натрия (1,0 г, 60%-ной дисперсии, 25 ммоль) добавляют и смесь перемешивают в атмосфере азота 30 мин. Прозрачный раствор охлаждают до 0^оС и раствор метилового эфира 3-(бромметил)-фенокси-уксусной кислоты (6,5 г, 25 ммоль) в ДМФА (10 мл) добавляют по каплям. По завершении добавления суспензию перемешивают при 0^оС в течение 1 ч, а затем при комнатной температуре в течение 2 ч. Реакционную смесь разбавляют этиловым эфиром и водой (каждые по 200 мл) и перемешивают. Органический слой отделяют, промывают водой (2 х 20 мл), высушивают (MgSO₄) и концентрируют под вакуумом. Сырое вещество очищают флеш-хроматографией на силикагеле, используя смесь гексана и диэтилового эфира (2:1) в качестве элюента, чтобы получить метиловый эфир [3-[[(4,5-дифенил-2-оксазолил)-тио]-метил]-фенокси] -уксусной кислоты (1,5 г, 13%) в виде масла.

Анализ.

Вычислено,%: C 68,75; H 4,69; N 3,62.

C₂₅H₂₁NO₄Si.

Найдено,%: C 68,39; H 4,65; N 3,58.

I_Н-ЯМР (СДСl₃) δ : 3,75 (3Н, с); 4,40 (2Н, с); 4,56 (2Н, с); 6,78 (1Н, дд., I = 8 Гц, I' = 2,5 Гц) и 6,98-7,92 (13Н, м).

П р и м е р 4. [3-[[(4,5-Дифенил-2-оксазолил)-тио]-метил]-фенокси]-уксусная кислота.

S - CHOCH₂CO₂CH
Метиловый эфир [3-[[(4,5-дифенил-2-оксазолил)-тио]-метил]-фенокси]-уксусной кислоты (1,1 г, 2,6 ммоль) растворяют в метаноле (25 мл). Добавляют моногидрат гидроокиси лития (0,22 г, 5,1 ммоль), за которым следует добавление по каплям воды (5 мл). Эту смесь нагревают при кипячении с обратным холодильником в течение 30 мин, охлаждают до комнатной температуры и концентрируют под вакуумом. Остаток растворяют в воде (15 мл) и подкисляют примерно до рН 2. Смесь экстрагируют хлористым метиленом (25 мл), объединенные экстракты высушивают над MgSO₄ и концентрируют под вакуумом. Остаток очищают с помощью хроматографии на колонке с силикагелью, используя смесь CH₂Cl₂ и MeOH (95: 5) в качестве элюента, чтобы получить [3-[[(4,5-дифенил-2-оксазолил)-тио] -метил] фенокси]-уксусную кислоту (0,6 г, 56,4%), т.пл. 136-137^оС.

Анализ.

Вычислено, %: C 69,05; H 4,59; N 3,36.

C₂₄H₁₉NO₄S.

Найдено,%: C 68,83; H 4,64; N 3,35.

I_Н-ЯМР (СДСl₃) δ: 4,41 (2Н, с); 4,61 (2Н); 6,82 (1Н, дд., I = 8,2 Гц, I' = 2 Гц) и 7,03-7,64 (1Н, м).

Использование: в медицине в качестве ингибиторов агрегации кровяных пластинок. Сущность изобретения: производные оксазола ф-лы (1), приведенной в тексте описания. 1 табл.

ПРОИЗВОДНЫЕ ОКСАЗОЛА общей формулы

где n = 7 - 9;
R - водород или низший алкил.