СПОСОБ ПОДБОРА ОПТИМАЛЬНОГО СРОКА КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК ЭНДОКРИННЫХ ОРГАНОВ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ Российский патент 1995 года по МПК C12N5/00 G01N33/53 

Изобретение относится к медицине, в частности к иммунологии, и может найти применение в клинике при трансплантации культур клеток эндокринных органов.

Известны способы определения оптимального срока культивирования ткани поджелудочной железы иммунорадиоло- гическими, гормональными методами (Федотов В.П. и др. Монослойная культура панкреатических бета-клеток новорожденных крыс: секреция инсулина ин витро и попытка трансплантации животным с экспериментальным диабетом //Пробл. эндокри- нологии. 1987. т.23, N 4. С. 57-60; Блюмкин В. Н. и др. Методы получения культур островковых клеток из поджелудочных желез трупов плодов человека и некоторых млекопитающих животных// Методические рекомендации. М. 1985. С. 9).

Известен способ определения пригодности бета-клеток для трансплантации по их инсулинпродуцирующей активности гистохимический метод, который заключается в окрашивании псевдоизоцианхлоридом бета-клеток, и по специфической метахроматической реакции с инсулином измеряют интенсивность люминесценции в УФ-лучах. Однако поскольку культура клеток применяется при трансплантации в клинике, а быстрому отторжению трансплантата способствует высокая антигенность пересаживаемой ткани, более эффективным способом является определение срока ее культивирования, характеризующегося минимальной антигенной активностью.

Целью изобретения является повышение пригодности клеток для трансплантации за счет выявления их минимальной антигенной активности в процессе культивирования.

Цель достигается путем получения комплексного антигена из исследуемых культур, иммунизацией животных полученным антигеном, получением иммунных сывороток, по уровню антителообразования в иммунологических реакциях определяют антигенность культуры клеток.

Способ осуществляется следующим образом: из культур клеток эндокринных тканей, приготовленных по методу И.С.Турчина и др. (авт.св. N 1119696; авт. св. N 1377291) получают антиген, соответствующий разным срокам культивирования путем пятикратного замораживания и растирания в фарфоровой ступке. После 30-минутного центрифугирования надосадочную жидкость используют в качестве антигена для иммунизации животных. Последнюю процедуру повторяют 3 раза с 5-дневным интервалом. Через 7 дней после последней иммунизации у животных производят забор крови и получают иммунную сыворотку. Сыворотку инактивируют, делают разведения и смешивают с эритроцитами барана, предварительно танизиро- ванными и сенсибилизированными теми же антигенами, которые использовались для иммунизации животных. По угнетению феномена антителообразования определяют срок культивирования ткани, соответствующий наименьшей ее антигенной активности.

П р и м е р 1. Культуру клеток поджелудочных желез новорожденных поросят 3-, 5-,7-,9-,11-дневного культивирования отмывают и из нее путем замораживания и растирания в фарфоровой ступке получают антиген. Для иммунизации используют лабораторных животных по 10 индивидуумов в каждой группе. Интервал между иммунизацией составляет 5 дней, перед забором крови 7 дней. Для усиления гуморального иммунного ответа используют адъювант Фрейнда. После получения и инкубации на водяной бане иммунной сыворотки ставят реакцию пассивной гемагглютинации (В.И.Говалло, 1967). По результату реакции, где сыворотка обнаруживала наименьшую активность, в данном случае 7-9 день культивирования, определяют срок культивирования ткани, который соответствует минимальной антигенности (табл.1).

П р и м е р 2. Вышеописанным способом определяли срок оптимального культивирования культуры клеток надпочечных желез новорожденных поросят. Иммунную сыворотку, полученную от животных иммунизированных антигеном культуры клеток надпочечных желез различных сроков культивирования, использовали в реакции пассивной гемагглютинации. Результат реакции показал, что наименьшей антигенностью обладают культуры клеток надпочечных желез 5-7-дневного культивирования.

Преимуществом данного способа по сравнению с прототипом является: достигается повышение функционирования трансплантата при пересадке; способ не наносит ущерб иммунной системе реципиента и обеспечивает снижение реакции отторжения трансплантата за счет минимальной антигенной активности пересаживаемой ткани.

Использование: медицина, трансплантация культур клеток эндокринных органов. Сущность изобретения: проводят иммунизацию животных комплексным антигеном, полученным из культур клеток различных сроков культивирования, и постановку иммунологических реакций. Способ отличается быстрым приживлением трансплантата и удлинением сроков его функционирования. 2 табл.

СПОСОБ ПОДБОРА ОПТИМАЛЬНОГО СРОКА КУЛЬТИВИРОВАНИЯ КЛЕТОК ЭНДОКРИННЫХ ОРГАНОВ, ПРЕДНАЗНАЧЕННЫХ ДЛЯ ТРАНСПЛАНТАЦИИ, включающий культивирование клеток с последующим отбором проб клеток и анализом биологической активности в динамике, отличающийся тем, что из отобранных на разных сроках культивирования проб клеток выделяют антигены, иммунизируют ими животных, в полученных иммунных сыворотках определяют титры антител и подбирают срок культивирования клеток в соответствии с минимальным титром антител.