Способ получения клеток коры надпочечников человека и животных Советский патент 1988 года по МПК C12N5/00 

Од

sj ч1

to

СО

Изобретение относится к медицине и может быть использовано в эндокринологии, терапии, хирургии.

Цель изобретения - повьппение выхо- да жизнеспособных клеток.

Способ иллюстрируется следующими примерами.

П. р и м е р 1. Вьвделение клеток коры надпочечных желез поросят суточного возраста.

Животных забивают гильотинированием. Стерильно забирают надпочечные железы от поросят суточного возраста и помещают в среду 199 при 4°С. Пос- ле 3-кратного промывания надпочечные железы измельчают глазными ножницами до кусочков размером 0,5-1 мм, nejpe- носят во флаконы и отмьшашт до получения прозрачной жидкости. Отмытые фрагменты ткани заливают смесью среды 199 и 0,25%-ного раствора трипсина, взятых в соотношении 1:1, с добавлением 5% бычьей сьшоротки, рН 7, и помещают на 12-15 ч в холодильник (). Затем исходный материал подогревают до 32 С, трипсинизируют на магнитной мешалке 2-кратно по 25 мин при скорости вращения 120-140 об/мин Надосадок сливгют, а ткань помещают для дальнейшего культивирования.

П Р и м е р 2. Получение тканевой культуры надпочечников человека.

Гиперторифированные железы надпочечников при болезни Йденко-Кушинга и гиперфункциях неопухолевой природы, удаленные во время операции, очищают от жировой ткани и многократно отмывают от крови, разрезают на 6- 10 частей и снова 5-6 раз отмьшают средой 199..

Глазными ножницами ткань надпо- чечных желез измельчают до размеров 0,5-1 мм и отмывают средой 199 до получения црозрачной жидкости, после чего заливают смесью среды 199 и 0,25%-ного раствора трипсина в соотношении 1:1 с добавлением 5% бычьей сыворотки и помещают на 12-15 ч в холо чильник при 4°С. Не сливая среды ткань с питательной средой подогревают на водяной бане до 32°С и обрабатывают на магнитной мешалке 2-кратно по 25 мин при 120-140 об/мин. На промежуточном этапе исходную среду сливают и заменяют такой же средой с температурой 32°С.

Надосадочную жидкость сливают, а ткань помещают в питательную среду для дальнейшего кyл JTИвиpoвaния. Выход жизнеспособных клеток составляе 70-90% (контроль 53%), уровень кор- тикостероидов 117,9-324,2 мкг % (контроль 46,6 мкг %).

Под наименованием уровень корти- костероидов необходимо понимать уровень 11 оксикортикостероидов (гидрокортизон и кортикостерон).

П р и м е р 3. Выделение клеток коры надпочечников взрослых и новорожденных собак.

Надпочечные железы отмьшают 3-кратно от крови и глазными ножницами измельчают до фрагментов 0,5-1 мм, переносят во флаконы и отмывают раствором Хенкса до получения прозрачной жидкости. Отмытую ткань заливают смесью среды 199 и 0,25%-ным раствором трипсина с добавлением 5% бычьей сыворотки и помещают в холодильник на 12-15 ч. Не сливая среды, ткань подогревают на водяной бане до 32°С и обрабатывают на магнитной мешалке 2-кратно по 25 мин при скорости вращения магнита 120-140 об/мин. В промежутке между первой и второй обработкой производят замену С15еды на предлагаемуто в изобретений.

Обработанную таким образом ткань, после отмывки растворам Хенкса, заливают общепринятой при культивировании питательной средой и помещают в термостат при .

Использование предлагаемого способа позволяет повысить выход жизнеспособных клеток коры надпочечников и соответственно уровень кортикосте- роидов.

Формула изобретения

Способ получения клеток коры надпочечников человека и животных, включающий забор железы, измельчение и ферментативную обработку измельченно железы с последуюш 1м выделением клеток, отличающийся тем, что, с целью повышения выхода жизнеспособных клеток, перед ферментативной обработкой измельченную железу вьщерживают 12-15 ч при 4-6°С в среде 199 с 0,25%-ным раствором трипсина, взятых в соотношений 1:1, в присутствии 5% бычьей сьгооротки.

Изобретение относится к медицине, в частности эндокринологии, терапии, хирургии, и касается способа получения клеток коры надпочечников. Цель изобретения - повьшение выхода жизнеспособных клеток. Извлеченную железу животных или человека отмывают средой 199, измельчают и выдерживают в течение 12-15 ч в условиях холодильника в смеси среды 199 и 0,25%-ного раствора трипсина, взятых в соотношении 1:1, с добавлением 5% бычьей сыворотки. Затем смесь подогревают, трипсинизируют, полученную ткань используют для культивирования. Выход жизнеспособных клеток 70-90%. а