Питательная среда для культивирования базидиальных грибов-продуцентов комплекса ферментов Советский патент 1987 года по МПК C12N1/14 C12N9/00 C12N1/14 C12R1/645 

Изобретение относится к биотехнологии, конкретно к способам получения ферментов, осуществляющих деструкцию лигноцеллншозного сырья, и может быть использовано в производстве фер- 5 ментов, применяемых в целлюлозно-бумажной, деревообрабатывающей, пищевой промышленности, а также в сельском хозяйстве.

Цель изобретения - повышение ак- О тивности монофенол-монооксигеназы и пероксидазы при сохранении целлюлозной активности.

Питательная среда для культивирования базидиальных грибов - продуцен- тов комплекса ферментов, обладающего монофенол-монооксигеназной, перокси- дазной и целлюлозной активностью, содержит в качестве источника углерода лиофилизированный сок зеленой массы 0 люцерны,

Состав лиофилизированного сока люцерны приведен в табл. 1.

При этом состав питательной среды

.,Pp, 0,3; MgSO

(КМД-активность) в культуральных фильтратах, полученных после отделения мицелия и остатков твердого субстрата.

Пример 2. Готовят питательные среды следующего состава, г: 1,8; КНдРО 0,5;

О,А; лиофилизированный зеленьш сок люцерны 5-40; вода водопроводная - до 1 л.

В качестве продуцента внеклеточных ферментов используют высщий базидиаль- ный гриб Funalia trogii (Berk.) Bond, et Sing. 0146.

Результаты, полученные для 7-суточ- ной культуры, приведены в табл. 3.

П р и м е р 3. Состав питательных сред и условия культивирования аналогичны примеру 1.

Активности внеклеточных ферментов Coriolus hirsutus (Fr.) Quel, 069, Stereum purpureum (Pers.) Fr. 030, Coriolus versicolor (Fr.) Quel. 087, Fomes. fomentarius (Fr.) Kickx. 0117

тг

следующий, г/л: однозамещенный фосфат при культивировании и на среде с зеаммония 1,8-2,0; однозамещенный фос- леиым соком люцерны приведены в

фат калия 0,5-0,6; двузамещенный фос- табл. А.

фат калия 0,3-0,4; сульфат магния Изобретение позволяет более чем

в 2 раза повысить активность моно- феиол-монооксигеназы и пероксидазы. Формула изобретения

0,4-0,5; лиофилизированный зеленый

сок люцерны 10-20.Пример 1. Готовят питательные среды следующего состава, г: Питательная среда для культивиро- 2,0; KHgPO 0,6; 0,4; MgSO вания базидиальных грибов - проду- 0,5; лиофилизированный зеленый сок центов комплекса ферментов, осуществ- люцерны 5,0-40,0; вода водопроводная - 35 ляющих деструкцию лигноцеллншозного до 1,0 л.сырья, содержащая источник углерода,

Указанные питательные среды готовят путем последовательной загрузки всех компонентов при постоянном перемешивании, помещают в колбу Эрлен- мейера емкостью 0,5 л fпо 0,1 л среды на колбу) и стерилизуют острым паром 30 мин при 0,1 Mlla. Затем колбы охлаждают до комнатной температуры и засевают чистой культурой высщего бази- диального гриба Pleurotus ostreatus (Jac.:Fr) Kumm ИМВ -1300. Культивирование проводят в стационарных условиях методом поверхностной пленки при 28±1°С в течение 7 сут.

В табл. 2 приведены результаты измерений активностей монофенол-монооксигеназы (КФ 1.14.18.1), пероксидазы (КФ 1.11.1.7), эндо-1,4- -глюкана- зы (КФ 3.2.1.4), способности комплек- са ферментов к осахариванию фильтровальной бумаги (ФГ)-активность) и растворимой карбоксиметилцеллюлозы

.,Pp, 0,3; MgSO

(КМД-активность) в культуральных фильтратах, полученных после отделения мицелия и остатков твердого субстрата.

Пример 2. Готовят питательные среды следующего состава, г: 1,8; КНдРО 0,5;

О,А; лиофилизированный зеленьш сок люцерны 5-40; вода водопроводная - до 1 л.

В качестве продуцента внеклеточных ферментов используют высщий базидиаль- ный гриб Funalia trogii (Berk.) Bond, et Sing. 0146.

Результаты, полученные для 7-суточ- ной культуры, приведены в табл. 3.

П р и м е р 3. Состав питательных сред и условия культивирования аналогичны примеру 1.

Активности внеклеточных ферментов Coriolus hirsutus (Fr.) Quel, 069, Stereum purpureum (Pers.) Fr. 030, Coriolus versicolor (Fr.) Quel. 087, Fomes. fomentarius (Fr.) Kickx. 0117

однозамещеиный фосфат аммония, одио- замещениый фосфат калия, двузамещенный фосфат калия, сульфат магния и воду, о тличающаяся тем, что, с целью повьппения активности монофенол-монооксигеназы и пероксидазы при сохранении целлюлозной активности, в качестве источника углерода и стимулятора биосинтеза среда содержит лиофилизироваиный сок зеленой массы люцерны при следующем соотно- щении компонентов, г/л воды:

Однозамещенный

фосфат аммония 1,8-2,0

Однозамещенный

фосфат калия0,5-0,6

Двузамещенный

фосфат калия

Сульфат магния Лиофилизированный зеленый сок люцерны

0,3-0,4 0,4-0,5

10-20

Компоненты

Сухое вещество

Сырой протеин

Белок

Сырой жир

Сырая клетчатк

Сырая зола

БЭВ

Сахара

Кальций

Фосфор

Натрий

Калий

Каротин

Сапонины

Хлорофилл (суммарный) 14,2-14,3 мг/кг

ть ь

Бензидин

ед/л

КМЦ

||

Фильтровальнаябумага

% деполимеризации

мг % глюкозы

||

Содержание, % на сухую массу

93,8-95,7

24,3-25,1

15,3-15,5

1,91-1,94

2,76-2,77 18,40-19,0 50,80-51,90

5,90-5,99

4,64-4,66

0,26-0,27

0,30-0,32

4,50-4,52 90,18-91,34мг/к 164,0-168,Оед/г

Таблица 2

70,0140,0140,0122,2

70,0112,0140,0128,8

20,022,522,520,8

13,916,628,325,9

119,1117,580,480,0

Бензидин

ед/л

,

43,7

кмц

% деполимеризации15,6

КМЦ-актив- ность

ФБ-актив- ность

мг % глюкозы 27,8 36,8 35,5 35,0

Фильтровальная бумага

|Т

6,2 8,8

Coriolus hirsutus (Fr.) Quel. 069

Бензидин

ед/л

КМЦ

% деполимеризации

КМЦ-актив- ность

ФБ-а1стив- ность

Фильтровальная бумага

мг % глюкозы 16,1 12,3 12,2 10,6

6,022,7 15,S|О

Stereum purpureiim (Pers) Fr. 030

Бензидин

ед/л

ТаблицаЗ

,50,0108,0 106,6

43,750,9 112,0 110,6

56,3 40,6 40,0

6,2 8,8

Таблица 4

12,7 14,7 15,1 14,4

13,3 18,5 18,0 17,6

25,0 21,2 21,0 20,2

14,014,7 14,510,0

18,617,5 18,012,2

КМЦ

% деполимеризации

КМЦ-актив- ность

ФБ-актив- ность

мг % глюкозы 1 А,1

9,1 9,

Фильтровальная бумага

2,4 О О Coriolus versicolor (Fr.) Quel. 087

Монофенол-мо- нооксигеназа

Пероксидаза

Эндо-1,4-/- глюканаэа

КМЦ-актив- ность

ФБ-актив- ность

Бензидин ti

КМЦ КМЦ

Фильтровальная бумага

ед/л

6,7 8,5

13.318,9

17.418,9

% деполимеризации9,6

2,4 26,2 14,4 Fomes fomentarius (Fr.) Kickx. 0117

14,5 17,5

9,6 12,510,9

мг % глюкозы 10,616,7 22,020,0

3,9

Бензидин ед/л

КМЦ

% деполимеризации

КМЦ

мг % глюкозы 14,1

Фильтровальная бумага - ВНИИПИ Заказ 3021/24 Тираж 499

Произв.-полигр. пр-тие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

17,3 21,2 22,0 23,0

9,1 9,5

9,0

13.318,9

17.418,9

14,5 17,5

9,6 12,510,9

3,9

23,3 27,3 13,7 25,5 39,0 24,4

18,0

7,97,311,0

2,22,6

Подписное

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к питательным средам для культивирования базидиальных грибов - продуцентов комплекса ферментов, осуществляющих деструкцию лигноцеллюлозного сырья. Целью изобретения является повышение активности монофенол-монооксигеназы и пероксида- зы при сохранении целлюлозной активности. Сущность изобретения заключается в том, что питательная среда, содержащая минеральные соли и воду, содержит в качестве источника углерода лиофилизированный сок зеленой массы люцерны в количестве 1-2 мас.%. Изобретение позволяет более чем в 2 раза повысить активность монофенол- монооксигеназы и пероксидазы. 4 табл. (Л