N -ФОСФОРИЛИРОВАННЫЕ ПРОИЗВОДНЫЕ 3- β -ФЕНИЛИЗОПРОПИЛСИДНОНИМИНА, ОБЛАДАЮЩИЕ ПРОТИВООПУХОЛЕВОЙ АКТИВНОСТЬЮ Российский патент 1995 года по МПК C07D271/04 C07F9/24 A61K31/41 

Изобретение относится к химии 1,2,3-оксадиазолов и конкретно касается новых производных ряда 3-β-фенилизопропилсиднонимина общей формулы I:
NR₁·n·H₂O где, если Х есть атом кислорода и n= 0, то I. R₁= R₂= OCH₃ II. R₁=CH₃, R₂=OCH₃ III. R₁=R₂=N(CH₃)₂ IV. R₁= NHCH₂CH₂C₆H₅, R₂= 0^-К⁺ V. V. R₁= NO R₂= O^-K⁺, R₂=0^-K⁺ VI. R₁=R₂= N (CH₂)₂ если Х есть атом серы, то VII. R₁=R₂=0^-Na⁺, n=1 VIII. R₁=OCH₂CH₂OH, R₂=0^-Na⁺, n=1 IХ. R₁=R₂=OCH₃, n=0 обладающие противоопухолевой активностью.

В литературе не описана биологическая активность соединений ряда сиднонимина, содержащих одновременно фенилизопропильный остаток и остаток фосфорной кислоты.

В связи с этим в качестве наиболее близкого структурного аналога выбран гидрохлорид 3-β- фенилизопропилсиднонимина формулы А:
проявляющий противоопухолевые свойства (1), но известный в медицинской практике как психотропный препарат (под международным названием сиднофен), обладающий психостимулирующим и антидепрессивным действием (2).

Сиднофен обладает относительно невысокой противоопухолевой активностью, обусловленной наличием как иммуностимулирующих свойств, так и способностью повышать общую резистентность организма (ингибирование опухолевого роста не превышает 26-40%).

Цель изобретения новые производные ряда 3- β -фенилизопропилсиднонимина, обладающие улучшенными противоопухолевыми свойствами при отсутствии психотропного действия.

Поставленная цель достигается химической структурой заявляемых соединений общей формулы I, содержащих в 3-м положении оксодиазольного цикла β -фенилизопропильную группировку и в 5-м положении группу формулыN-Р(Х)^-, где Х есть атом кислорода или серы, обладающих противоопухолевой активностью.

Заявляемые соединения представляют собой атмосферные неокрашенные вещества, растворимые в воде и органических растворителях, нерастворимые в парафиновых углеводородах, гигроскопичные.

Структура соединений подтверждена элементным анализом и спектральными характеристиками (ЯМР-, ПМР-, УФ-спектры).

Противоопухолевая активность заявляемых соединений изучалась в опытах на 508 крысах и 1223 мышах с использованием указанных штаммов опухолей мышей и крыс (в скобках приведены линии и пол животных, на которых поддерживались штаммы и проводились химиотерапевтические опыты, а также исходная масса тела животных): Р388 лимфоцитарная лейкемия (мыши ДВА 2, ВДF1, самцы, 20-22 г), L1210 лимфоидная лейкемия (мыши ДВА 2, ВДF1, самцы, 20-23 г), СМ саркома мышей (мыши неинбредные, самки 18-21 г), Са 755 аденокарцинома молочной железы (мыши С 57Вl6, самки, 20-23 г), В 16 меланотическая меланома В16 (мыши ВДF1, самцы, 20-23 г), КЛЛ карцинома легких Льюис (мыши ВДF1, самцы, 20-23 г), АКАТОЛ аденокарцинома толстой кишки (мыши ВаlВ/с, самцы, 18-20 г), СИ саркома Иенсена (крысы, неинбредные обоего пола, 120-140 г), КСУ карциносаркома Уокер (крысы, неинбредные, самки, 120-140 г).

Лейкозные штаммы опухолей перевивали внутрибрюшинно, дозируя по (1,0-1,2) ^.10⁶ Кл/мышь в 0,3 мл среды 199. Солидные опухоли трансплантировали под кожу подмышечной впадины или внутримышечно (КЛЛ), вводя по 0,3 мл взвеси опухолевой ткани в среде 199 или изотоническом растворе натрия хлорида. Лечение начинали через 72-96 ч после трансплантации солидных опухолей (кроме КСУ) или через 24 ч после инокуляции лейкозов и КСУ.

Испытуемые соединения растворяли в поливинилпирролидоне (IХ) или в изотоническом растворе натрия хлорида (I-VIII) с содержанием 10 мг или 1 мг в 1 мл в зависимости от условий эксперимента. Соединения вводили внутрибрюшинно 1 раз в сутки в течение 5-9 дней (или 3 раза на 1-й, 5-й и 9-й дни опыта при L 1210).

Животных с солидными опухолями забивали через 2 сут после окончания лечения и оценивали противоопухолевый эффект путем вычисления индекса торможения (У_т) по формуле
У_т= 100 где М_к средняя масса опухоли в контроле;
М_о средняя масса опухоли в опыте.

Терапевтический эффект при лейкозах оценивали по средней продолжительности жизни (СПЖ), определяемой по формуле:
СПЖ, 100
и проценту излеченных животных, при этом излеченными считали животных, проживающих без рецидива в течение 2 мес.

Химиотерапевтический индекс (ХТИ) определяли как отношение максимальной переносимой дозы (вызывающей гибель животных до 10% или/и меньший прирост не более, чем на 15% по сравнению с контролем, наблюдающийся постоянно) к минимальной эффективной дозе.

Индекс кумуляции (ИК) вычислялся по формуле
ИК 100, где МПД максимально переносимая доза.

Токсичность соединений III и IХ оценивали путем определения минимальной дозы, вызывающей гибель мыши после однократного внутрибрюшинного введения в возрастающих дозах (1 мышь на дозу). Величину ЛД₅₀ при однократном внутрибрюшинном введении мышам для остальных соединений определяли по Литчфилду и Уолкоксону (соед. VI) или Керберу (соединения I, II, IV, V, VII, VIII) (3).

Переносимость при повторных введениях оценивали по проценту выживших животных в группе, а также путем вычисления коэффициента роста массы тела (К_р) по формуле
К_р= 100, где А и А₁ средняя масса опухоли в начале опыта,
В и В₁ средняя масса животных в конце опыта,
С и С₁ средняя масса животных в начале опыта соответственно в подопытной и контрольной группах (4).

При К_р со знаком "+" наблюдалась более выраженная прибавка массы тела или меньшее похудание подопытных животных в процессе опыта по сравнению с контрольными.

При К_р со знаком "-" отношения противоположные.

Изучение противоопухолевой активности заявляемых соединений проводили в сравнении с известным препаратом сиднофеном, проявляющим противоопухолевые свойства.

Результаты изучения представлены в табл. 1.

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили по Беленькому М. Л. (3) при уровне вероятности 95% (микрокалькулятор "ТRULY-213") или с использованием критерия Стьюдента. Разницу считали достоверной при Р ≅ 0,05 (критерий достоверности разницы с контролем).

Как видно из табл. 1, заявляемые соединения I и II токсичности (ЛД₅₀ равны 90 мг/кг (I) и 113 мг/кг (II) и по активности на опухолях СИ и КСУ сопоставимы с сиднофеном (ЛД₅₀ 123 мг/кг), но при этом проявляют эффект на опухоли Са 755 (У_т 89% (I) и 80% (II)) и на опухоли СМ /У_т 50% (II) и 48% (II)/, а также при лейкемии Р388 /СПЖ 163%) (I) и 151% (II), значительно более высокий, чем сиднофен /У_т 31% (КСУ) и 41% (СМ), СПЖ 120% (Р388)/.

Следует подчеркнуть, что увеличение срока продолжительности жизни (СПЖ) на 20% при лейкемии Р388 находится ниже границы значимости эффекта для данной модели, для модели, для которой существенным считается увеличение СПЖ на 25% и более (5).

Для соединения V характерно снижение токсичности в 8 раз (ЛД₅₀ 940 мг/кг) по сравнению с сиднофеном (ЛД₅₀ 123 мг/кг), при этом оно обнаружило сравнимую с сиднофеном активность на опухолях СИ, КСУ и СМ и значительно более выраженную активность на опухоли Са 755 /У_т 73% а для сиднофена У_т 31% / и при лейкемии Р388 (СПЖ 144% а для сиднофена СПЖ120%).

Таким образом, соединения III, IV, VIII и IХ при сравнительно равной с синдофеном противоопухолевой активности в 3-5 раз менее токсичны, чем сиднофен.

Соединения I и II при сопоставимой с сиднофеном токсичности проявляют повышенную противоопухолевую активность и новые свойства антилейкозные.

Соединения IV и V при наличии повышенной противоопухолевой активности и антилейкемических свойств значительно менее токсичны, чем сиднофен.

Наиболее активным из ряда заявляемых соединений оказалось соединение VI. При сравнении с сиднофеном оно показало значительно повышенный противоопухолевый эффект (У_т 83-100%) на всех опухолевых моделях при пониженной токсичности (ЛД₅₀ 200 мг/кг, ЛД₅₀ сиднофена 123 мг/кг, а также обнаружило антилейкозные свойства (у сиднофена они отсутствуют).

Кроме того, поскольку это соединение имеет наибольшее чем другие заявляемые соединения сходство с широко применяемым в мировой онкологической практике противоопухолевым препаратом тиофосфамидом (2), так же как и соединение VI, содержащим в молекуле этилениминные группировки, определяющие в основном противоопухолевую активность, мы сочли правомерным провести дополнительное сопоставление соединения VI и тиофосфамида. Тиофосфамид (N^I, N^II, N^III-три(этилен)-триамид тиофосфорной кислоты) формулы Б:
N N обладает высокой противоопухолевой и антилейкозной активностью благодаря выраженному цитостатическому действию на быстро пролиферирующие, в том числе опухолевые ткани.

Однако тиофосфамид характеризуется малой избирательностью действия на опухолевые клетки, обусловленной высокой токсичностью /при однократном внутрибрюшинном введении мышам ЛД₅₀ тиофосфамида составляет 25 мг/кг (6)/.

Тиофосфамиду присущи малая терапевтическая широта действия и выраженная кумуляция.

Данные, полученные при изучении переносимости противоопухолевой и антилейкозной активности соединения VI, проведенном в сравнении с тиофосфамидом (использован лиофилизированный тиофосфамид в ампулах по 0,01), представлены в табл. 2-5.

Соединение VI и тиофосфамид вводили в дозах, одинаково относящихся к ЛД₅₀ каждого из них.

Показано, что соединение VI при однократном внутрибрюшинном введении мышам в 8 раз менее токсично, чем тиофосфамид (ЛД₅₀ соединения VI составляет 200 ± 22 мг/кг, тиофосфамида 25 мг/кг).

Значительный интерес представляют данные сравнительного изучения переносимости соединения VI и тиофосфамида при повторном применении. Наблюдаются токсические явления (плохое общее состояние, похудание, гибель части животных в опыте) при ежедневных внутрибрюшинных введениях тиофосфамида в разовых дозах, составляющих 0,125 ЛД₅₀ для крыс, 0,2 ЛД₅₀для мышей с солидными опухолями (табл. 2) и 0,3 ЛД₅₀ с лейкозами (табл. 3). Однократная доза, равная 0,25 ЛД₅₀ для крыс оказалась летальной.

В отличие от тиофосфамида животные хорошо переносили соединение VI в тех дозах, которые оказались токсичными для тиофосфамида. Относительная к ЛД₅₀ доза, являющаяся летальной для тиофосфамида (0,25 ЛД₅₀ для крыс и 0,4 ЛД₅₀ для мышей) является максимальной переносимой для соединения VI.

Продолжительность жизни мышей с лейкозами при повышении дозы соединения VI возрастала, а в случае увеличения дозы тиофосфамида уменьшалась.

Свидетельством меньшей токсичности соединения VII являются результаты определения широты его терапевтического действия (ХТИ для соединения VI равен 20, для тиофосфамида -3).

Индекс кумуляции (ИК) соединения VI (равен 150) значительно меньше, чем у тиофосфамида (ИК=900).

При значительно более хорошей переносимости соединение VI проявляет равную с тиофосфамидом противоопухолевую активность по отношению к саркоме Иенсена и карциносаркоме Уокер у крыс (табл. 4). Оба вещества в оптимальных дозах полностью или почти полностью тормозят рост этих опухолей. Соединение VI вызывает более выраженное, чем тиофосфамид торможение развития меланомы В16 (до 95% по ср. с 73%), карциномы 755 (до 98% ср. 91%), рака легкого Льюис (до 83% ср. 53%) и несколько менее значительное аденокарциномы толстой кишки АКАТОЛ (83% ср. 89%) табл. 5.

Существенно более активно соединение VI у мышей с лейкозами (табл. 3). Продолжительность жизни у мышей с лейкемией L 1210, получавших соединение VI возрастает почти в 3 раза (при введении тиофосфамида в 1,6), у мышей с лейкемией Р388 в 2,5 раза (при введении тиофосфамида в 1,8 раза). Увеличение дозы тиофосфамида приводит к снижению и затем полному исчезновению антилейкозного эффекта в связи с токсическими проявлениями.

Таким образом соединение VI обладает более выраженной или равной активностью с тиофосфамидом при значительно лучшей переносимости.

Поскольку исследуемые соединения (I-IХ) представляют собой фосфорилированные производные оригинального отечественного психотропного препарата сиднофен, представлялось необходимым оценить их влияние на центральную нервную систему (ЦНС) животных в эксперименте.

Влияние на ЦНС оценивали по показателям, характеризующим центральное стимулирующее действие: влияние на общее состояние и поведение животных, влияние на спонтанную двигательную активность (8), поведенческую депрессию, обусловленную неизбегаемой стрессовой ситуацией (9), влияние на эффекты резерпина (гиподинамия, гипотермия, блефароптоз).

Известно (10, 11), что сиднофен оказывает психостимулирующее и антидепрессивное действие на ЦНС. В эксперименте на животных сиднофен в дозах 12,5 мг/кг внутривенно и 25 мг/кг внутрь вызывает возбуждение ЦНС, которое выражается в усилении аудиогенной и тактильной гиперрефлексии, агрессивном поведении, при увеличении доз до 50 мг/кг эти явления усиливаются. Спонтанную двигательную активность сиднофен в указанных дозах изменял незначительно. В дозе 25 мг/кг сиднофен эффективно антагонизируют к центральным эффектам резерпина, уменьшая птоз на 1,5 балла, гипотермию на 1,5^оС, и восстанавливает гиподинамию до уровня, соответствующего спонтанной двигательной активности контрольных животных. На модели поведенческой депрессии у мышей сиднофен в дозе 12,5 и 25 мг/кг внутрь в 2,5-3 раза по сравнению с контрольной группой увеличивает количество активных попыток избегания в данной ситуации.

Изучение соединений I-IХ в дозах, составляющих 1/10 от их ЛД₅₀ при введении внутрь, показало, что соединения не обладают спектром фармакологической активности, который характерен для сиднофена. Элементы антидепрессивной активности отмечаются только у соединений I-VI в тесте, характеризующем поведенческую депрессию, и не являются в полной мере решающими для характеристики психотропного действия, так как по остальным показателям (влияние на локомоторную активность и эффекты резерпина) они практически не отличались от контрольного уровня (табл. 6). Определенные изменения в поведении животных (гиперрефлексия, агрессивность и гиподинамия), если и отмечались, то только в дозах, превышающих 1/10 от ЛД₅₀ в 2-2,5 раза.

Таким образом, проведенные исследования заявляемых соединений (фосфорилированных производных сиднофена) по влиянию на ЦНС показатели, что соединения I-IХ не обладают характерным для сиднофена стимулирующим влиянием на ЦНС в экспериментах на животных. Элементы антидепрессивной активности, отмеченные у соединений I-VI, хотя и свидетельствуют о некотором активирующем влиянии, но проявляются в дозах, превышающих сиднофен в 4-6 раз.

В заключение можно сделать вывод, что в результате изучения биологических свойств заявляемых соединений установлено, что впервые в ряду сиднониминов обнаружены соединения, проявляющие наряду с противоопухолевыми свойствами также и антилейкозные, что ранее было несвойственно соединениям этого ряда, при этом не обладающие психотропными свойствами, характерными для сиднофена, структурного аналога заявляемых соединений.

Заявляемые соединения получают различными способами.

Соединение I, II получают взаимодействием метанола с неописанными ранее N⁶-(дихлорфосфорил)-3-β- фенилизопропилмиднонимином (1а) или N⁶-(хлорметилфосфонил)-3- β -фенилизопропилсиднонимином (Па) в среде бензола в присутствии триэтиламина при комнатной температуре:
NCl +
+ CH₃OH H(CH₃)
I а (R₁ CI) I(R₁ R₂ OCH₃) IIа (R₁ CH₃) II(R₁ CH₃; R₂ OCH₃)
Исходные соединения Iа, Па новые, ранее неописанные в литературе, получают in situ взаимодействием N-нитрозо-2-( β-фенилизопропиламино)ацетонитрила с хлорокисью фосфора или дихлорфосфонатом в абс. ацетонитриле при 70^оС, т. е. в условиях, аналогичных описанным ранее для реакции N-нитрозо-2-(β-фенилизопропиламино)ацетонитрила с тиофосфорилхлоридом, приводящей в N⁶-(дихлортиофосфорил)-3-β -фенилизопропилмиднонимину (12).

Заявляемое соединение III получают взаимодействием Ia с избытком диметиламина в бензоле при комнатной температуре.

Заявляемые соединения IV и V получают путем взаимодействия соответствующего первичного и вторичного амина с Ia в присутствии триэтиламина в бензоле при комнатной температуре с последующей обработкой образующегося имидоамидохлорфосфата (IVa, Va) гидроксидом калия в среде диоксан-вода.

Промежуточные соединения IVa и Va новые, в литературе не описаны, охарактеризованы данными спектров ЯМР³¹Р.

Заявляемое соединение VI получают взаимодействием Ia с небольшим избытком этиленимина в присутствии триэтиламина (молярное соотношение реагентов 1:2, 2:2) в бензоле при комнатной температуре.

Заявляемое соединение VII получают взаимодействием описанного ранее (12) N⁶-(дихлортиофосфорил)-3- β-лсиднонимина (VII) с гидроксидом натрия в бинарном растворителе диоксан-вода (объемное соединение 1:1,5) при комнатной температуре.

Заявляемое соединение VIII получают взаимодействием описанного ранее (13) N⁶-(1,3,2-диоксофосфолан-2-ил)-3- β-фенилизопропилсиднонимина и серы в бензоле при 60^оС с последующей обработкой образующегося тиопроизводного VIIIа (нового, неописанного в литературе) гидроксидом натрия согласно схеме:
N +
+ NaOH
Заявляемое соединение IХ получают взаимодействием VIIа с метилом в присутствии избытка гидроксида натрия в бинарном растворителе метанол-диоксан (объемное соотношение 1,5:1) при комнатной температуре.

П р и м е р 1. Синтез N⁶-(метоксиметилфосфонил)-3-β-фенилизопропилсиднонимина (II).

К 3,0 г (10 ммоль) IIа и 1,7 мл (12 ммоль) триэтиламина в 15 мл абс. бензола прикапывают 0,46 мл (11 ммоль) абс. метанола в 4 мл бензола. Через 3 ч смесь фильтруют, упаривают, остаток дважды переосаждают из бензола петролейным эфиром.

Получают 2,33 г (79%) II в виде бесцветного аморфного гигроскопичного вещества, растворимого в воде и органических растворителях, т. пл. 84-86^оС.

Найдено, С 52,59; Н 6,33; Р 10,16.

С₁₃Н₁₈N₃O₃Р.

Вычислено, С 52,88; Н 6,14; Р 10,49.

Спектры ЯМР³¹Р (С₆Н₆, δ м.д.): 29,5.

Спектр ПМР (СДСI,δ м.д.): 1, 406, 1,415(3Н,∂.∂ РСН₃, ³J (РН) 17,0 Гц); 1,56(3Н, ∂, СН₃), 3,10(2Н,М,СН₂), 3,504; 3,556(3Н, ∂.∂ OCН₃, ³J (РН) 11, 6 Гц), 4,65(IH, м, СН), 7,0-7,3(6Н,м,С₆Н₅,С⁴Н). УФ-спектр (Н₂O): λ 317нм (ε 6900).

Аналогично из Ia получен N⁶-диметоксифосфорил)-3-β-фенилизопропилсиднонимин (I). Выход 67% Т. пл. 45,5-47,5^оС (из смеси бензол-гексан). Бесцветное аморфное гигроскопическое вещество, растворимое в воде и органических растворителях.

Найдено, С 49,82; Н 5,89; Р 9,72.

С₁₃Н₁₈N₃O₄Р.

Вычислено, С 50,16; Н 5,83; Р 9,95.

Спектр ЯMР³¹Р (С₆Н₆, ∂ м.д.): 6,9.

Спектр ПМР (СДСl, δ м.д.): 0,975, 0,980 (1:2) (3Н,∂ ∂ СН₃), 2,68(2Н,м, СН₂), 3,685, 3,692, 3,712 и 3,717 (1: 2:1:2)(6Н,∂ ∂ ∂ ∂ ³J(РН)11,3Гц), 4,60(1Н,м,СН), 6,9-7,2(5Н,м,С₆Н₅), 7,96(1Н,с,С⁴Н).

УФ-спектр (Н₂O): λ 310 нм ( ε 9000).

П р и м е р 2. Синтез N⁶-(бисдиметиламидофосфорил)-3- β- фенилизопропилсиднонимина (III).

К раствору 6,4 г (20 ммоль) Ia в 20 мл абс. бензола прикапывают 4,0 г (88,7 ммоль) диметиламина в 10 мл бензола. Через 5 ч смесь упаривают, остаток растворяют в 40 мл бензола, раствор фильтруют, отгоняют избыток растворителя, продукт дважды переосаждают тз бензола пентаном.

Получают 5,6 г (83%) III в виде аморфного бесцветного вещества, устойчивого на воздухе и в нейтральных водных растворах, растворимого в органических растворителях. Т. пл. 98-99^оС.

Найдено, С 53,25; Н 7,02; Р 9,27.

С₁₅Н₂₄N₅O₂Р.

Вычислено, С 53,40; Н 7,17; Р 9,18.

Спектр ЯМР³¹Р(С₆Н₆, δ м.д.): 20,7.

Спектр ПМР (СДСl, δ н.д.): 1,53 (3Н, δ СН₃), 2,54, 3,53(12Н, ∂,∂ СН₃), ³J(РН), 10,5 Гц); 3,08(2Н,м,СН₂), 4,57(1Н,м,СН), 7,0-7,2(6Н,м, С₆Н₆, С⁴Н).

УФ-спектр (Н₂O): λ 317 нм ( ε 8100).

П р и м е р 3. Синтез 3- β-фенилизопропилсиднонимидо- β-фенетиламидофосфата калия (IV).

К раствору 6,4 г (20 ммоль) Ia и 3,5 мл (25 ммоль) триэтиламина в 15 мл абс. бензола прикапывают 2,6 мл (21 ммоль) β-фенетиламина в 6 мл бензола. Через 5 ч раствор фильтруют, маточник упаривают досуха. Остаток дважды переосаждают из бензола пентаном.

Получают 6,5 г (80%) IVа в виде вязкого масла, растворимого в органических растворителях.

Спектр МР³¹Р (С₆Н₆, δ м.д.): 18,0.

6,1 г (15 ммоль IVа в 12 мл диоксана прикапывают при перемешивании к 1,68 г (30 ммоль) гидроксида калия в 8 мл воды. Через 3 ч отгоняют избыток растворителя при пониженном давлении. Водный раствор фильтруют и отгоняют воду из маточника азеотропной перегонкой с абс. бензолом. Остаток промывают бензолом, растворяют в 15 мл хлороформа, раствор сушат над хлористым кальцием, фильтруют, упаривают. Продукт затирают с гексаном, сушат в пистолете Фишера над пятиокисью фосфора при 60^оС.

Получают 5,5 г IV (87% считая на IVа, или 70% считая на исходное Ia). Т. пл. 201^оС (с разл.).

Найдено, С 53,45; Н 5,40; Р 6,90.

С₁₉Н₂₂N₄O₃РК.

Вычислено, С 53,76; Н 5,22; Р 7,30.

Спектр ЯМР³¹Р (СНСl, δ м.д.): 7,2.

Спектр ПМР (СДСl₃, δ м.д.): 1,62 (3Н, ∂ СН₃), 2,7-3,0(4Н,м,СН₂СН₂), 3,16(2Н,м,СН₂), 4,71(1Н,м,СН), 7,0-7,25(6Н,м,С₆Н₅,С⁴Н).

УФ-спектр (Н₂O): λ 327 нм ( ε 6600).

Аналогично получают:
а) N⁶-(морфолидохлорфосфорил)-3-β -фенилизопропилсидноимин (Va).

Выход 75%
Спектр ЯМР³¹Р(С₆Н₆, δ м.д.): 16,1.

б) 3-β-фенилизопропилсиднонимидо-морфолидофосфат калия (V).

Выход 60% считая на Ia. Т. пл. 186-189^оС.

Найдено, С 45,93; Н 5,38; Р 7,53.

С₁₅Н₂₀N₄O₄РК.

Вычислено, С 46,14; Н 5,16; Р 7,93.

Спектр ЯМР³¹Р(СНСl₃, δ м.д.): 7,5.

Спектр ПМР (СДСl₃, δ м.д.): 1,54(3Н, ∂ СН₃), 2,82(4Н,м,NСН₂), 2,9-3,3(2Н, м,СН₂), 3,53(4Н,м,OCН₂), 4,68(1Н,м,СН), 7,0-7,3(5Н,м,С₆Н₅), 7,34(1Н, с,С⁴Н).

УФ-спектр (Н₂0): λ 326 нм ( ε 8400).

П р и м е р 4. Синтез N⁶-(бисэтиленимидофосфорил)-3- β- фенилизопропилсиднонимида (VI).

К 4,5 г (14 ммоль) Ia и 4,2 мл (30 ммоль) триэтиламина в 20 мл абс. бензола при перемешивании медленно прикапывают 1,8 мл (35 ммоль) этиленимина в 10 мл бензола. Смесь выдерживают 4 ч при комнатной температуре, фильтруют и упаривают досуха.

Получают 4,1 г (88%) VI в виде гигроскопического аморфного вещества растворимого в воде и органических растворителях, слабо растворимого в эфире и диоксане, неустойчивого к действию кислотных реагентов. Нейтральные водные растворы устойчивы в течение нескольких недель. Т. пл. 90-92^оС.

Найдено, С 53,83; Н 5,96; Р 9,03.

С₁₅Н₂₀N₅O₂Р.

Вычислено, С 54,05; Н 6,05; Р 9,29.

Спектр ЯМР³¹Р(С₆Н₆, δ м.д.): 28,3.

Спектр ПМР(СДCl₃, δ м.д.): 1,62(3Н, ∂ СН₃), 2,0-2,2(8Н,м,NСН₂), 3,16(2Н, м,СН₂), 4,67(1Н,м,СН), 7,0-7,35(6Н,м,С₆Н₅, ⁴СН).

УФ-спектр (Н₂O): λ 312 нм ( ε 8700).

П р и м е р 5. Синтез динатриевой соли 3-β-фенилизопропилсиднонимидотиофосфорной кислоты моногидрата (VII).

3,36 г (10 ммоль) VIIа в 8 мл диоксана прикапывают к 1,60 г (40 ммоль) гидроксида натрия в 12 мл воды, через 12 ч к раствору добавляют 150 мл ацетона, смесь выдерживают 48 ч при 0^оС, фильтруют. К осадку добавляют 5 мл метанола, раствор фильтруют и упаривают при пониженном давлении.

Получают 3,14 г (87% считая на безводную соль) VII в виде аморфного гигроскопического вещества, растворимого в воде и метаноле. Т, пл. 238^оС (с разл.).

Найдено, С 36,30; Н 4,10; Р 8,17.

С₁₁Н₁₂N₃O₃РSNa₂^. Н₂O.

Вычислено, С 36,57; Н 3,90; Р 8,57.

Спектр ЯМР³¹Р(Н₂O, δ м.д.): 35,7.

Спектр ПМР(Д₂O, δ м.д.) 1,43(3Н ∂СН₃), 3,01(2Н, м,СН₂), 4,65 (1Н,м,СН), 6,9-7,2 (5Н,м,С₆Н₅).

УФ-спектр (Н₂O): λ 338 нм ( ε 8100).

П р и м е р 6. Синтез 3- β-фенилизопропилсиднонимидо-β-оксиэтилфосфата натрия моногидрата (VIII).

Суспензию 2,93 г (10 ммоль) N⁶-(1,3,2-диоксафосфолан-2-ил)-3- β-фенилизопропилсиднонимина (VIIIа) в 15 мл абс. бензола и 0,38 г (12 ммоль) серы перемешивают 60 мин при 60^оС. После фильтрации и отгонки растворителя образовавшееся св.-желтое масло затирают с абс. метанолом.

Получают 3,1 г (95%) N⁶-(2-тио-1,3,2-диоксофосфолан-2-ил)-3- β-фенилизопропилсиднонимина VIIIб в виде светло-желтого аморфного вещества, растворяющегося в органических растворителях. Т. пл. 91,5^оС (из метанола).

Спектр ЯМР³¹Р (СНСl₃, δ м.д.): 81,6.

Спектр ПМР (СДСl₃, δ м. д.): 1,58(3Н, ∂,СН₃); 3,11(2Н,м,СН₂), 4,29, 4,30(4Н, ∂. ∂ OCН₂СН₂O, ³J(РН) 11,6 Гц), 4,71(1Н,м,СН), 7,0-7,2(5Н,м,С₆Н₅), 7,54(1Н, ∂ СН, ⁴J(РН), 1,1 Гц).

ИК-спектр (нуйол, см^-1): 1630 (С=N), 3150 (С⁴Н).

УФ-спектр (СН₃СN): λ 323 нм (ε 8300).

К 3,0 г (9,2 ммоль) VIIIб в 10 мл диоксана при 60^оС прикапывают при перемешивании 0,40 г (10 ммоль) гидроксида натрия в 5 мл воды. Смесь выдерживают 2 ч, отгоняют растворитель при пониженном давлении. Остаток растворяют в 25 мл хлороформа. Раствор выдерживают над свежепрокаленным сульфатом натрия, фильтруют, отгоняют растворитель. Продукт растворяют в 5 мл воды, раствор фильтруют через плотный слой ваты, упаривают и повторяют процедуру сушки.

Получают 2,3 г VIII (66), считая на VIIIб, или 56% считая на исходный VIIIa, в виде аморфного гигроскопического вещества, склонность к растворению которого в воде снижается после дегидратации, т. пл. 68-69^оС.

Найдено, С 40, 43; Н 5,30; Р 7,64.

С₁₃Н₁₇N₃O₄РSNa ^. Н₂O.

Вычислено, С 40,73; Н 5,00; Р 8,08.

Спектр ЯМР³¹Р(СДСl₃, δ м.д.): 52,8 и 53,1(1:1).

Спектр ПМР(СДСl₃, δ м. д. ): 1,38 и 1,39(3Н, ∂ СН₃), 3,06(2Н,м,СН₂), 3,6-4,0(6Н, м, РOCH₂, СН₂O, Н₂O), 5,40(1Н,с,OН), 7,0-7,2(5Н,м,С₆Н₅), 7,48 и 7,57(1:1) (1Н,С⁴Н).

ИК-спектр (нуйол, см^-1): 1640 (С=N).

УФ-спектр (Н₂O): λ 325 нм ( ε 6500).

П р и м е р 7.

Синтез N⁶-(диметокситиофосфорил)-3- β-фенилизопропилсиднонимина (IХ).

К 6,7 г (0,12 моль) гидроксида калия в 30 мл метанола добавляют при перемешивании 10,0 г (29,7 ммоль) VIIа в 20 мл диоксана. Через 30 мин отгоняют растворитель в вакууме. Остаток растворяют в 50 мл хлороформа, раствор промывают водой, сушат над хлористым кальцием. Масло, образовавшееся после отгонки хлороформа, затирают с небольшим количеством триэтиламина и отмывают пентаном.

Получают 9,3 г (96% ) IХ в виде аморфного гигроскопического вещества, растворимого в органических растворителях. Т. пл. 53-55^оС.

Найдено, С 47,90; Н 5,49; Р 9,61.

С₁₃Н₁₈N₃O₃РS.

Вычислено, С 47,70; Н 5,54; Р 9,46.

Спектр ЯМР³¹Р (СН₃OН),δ м.д. 68,2.

Спектр ПМР (СДСl₃, δ м.д.): 1,62 (3Н, ∂СН₃), 3,16(2Н,м,СН₂), 3,58 и 3,68 (3Н, ∂∂ OCН₃, ³J(РН) 11,2 Гц), 4,77(1Н,м,СН), 7,05-7,25(5Н,м,С₆Н₅), 7,38(1Н, с,С⁴Н).

УФ-спектр (СН₃OН): λ 318 нм ( ε 8600).

Использование: новые соединения проявляют противоопухолевую и противолейкемическую активность. Сущность изобретения: N⁶ (метоксиметилфосфонил)-3- β -фенилизопропилсиднонимин, БФ C₁₃H₁₈N₃O₃P выход 79% , т. пл. 84 - 86°С; N⁶ (диметоксифосфосфорил)-3 β -фенилизопропилсиднонимин, БФ C₁₃H₁₈N₃O₄P выход 67%, 45,5 - 47,5°C; N⁶ -(бисдиметиламидофосфорил)-3- β -фенилизопропилсиднонимин. БФ C₁₅H₂₄N₅O₂P выход 83%, т. пл. 98 - 99°С; 3- β -фенилизопропилсиднонимидо- b -фенетиламидофосфат калия, БФ C₁₃H₂₂N₄O₃PK выход 70%, т. пл. 201°С (с разложением); 3 β -фенилизопропилсиднонимидоморфолинофосфат калия, БФ C₁₅H₂₀N₄O₄PK выход 60% т. пл. 186 - 189°С; N⁶ (бисэтиленимидофосфорил)-3- β -фенилизопропилсиднонимид, БФ C₁₅H₂₀N₅O₂P выход 88%, т. пл. 90 - 92°С; динатриевая соль 3- β -фенилизопропилсиднонимидотиофосфорной кислоты моногидрат, БФ C₁₁H₁₂N₃O₃PSNa₂·H₂O выход 87%, т. пл. 238°С (с разложением); 3- β -фенилизопропилсиднонимидо- b -оксиэтилфосфат натрия моногидрат, БФ C₁₃H₁₇N₃O₄PSNa·H₂O выход 56%, т. пл. 68 - 69°С; N⁶ -(диметокситиофосфорил)-3- β -фенилизопропилсиднонимин, БФ C₁₃H₁₈N₃O₃PS выход 96%, т. пл. 53 - 55. 6 табл.

N⁶ Фосфорилированные производные 3- b -фенилизопропилсиднонимина общей формулы I

где, если Х кислород и n 0, то
I. R₁ R₂ OCH₃;
II. R₁ CH₃; R₂ OCH₃;
III. R₁ R₂ N (CH₃)₂;
IV. R₁ N HCH₂CH₂C₆H₅; R₂ - O^-K⁺;

VI. R₁ R₂ N (CH₂)₂, если Х сера, то
VII. R₁ R₂ O^-Na⁺, n 1;
VIII. R₁ OCH₂CH₂OH; R₂ O^-Na⁺, n 1;
IX. R₁ R₂ OCH₃; n 0,
обладающие противоопухолевой активностью.