ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ФТ-ЗЕЛЕНАЯ ДЛЯ ВЫДЕЛЕНИЯ ЧУМНОГО МИКРОБА Российский патент 1996 года по МПК C12Q1/04 

Изобретение относится к области микробиологии и может быть использовано при диагностике чумы.

Наиболее близким к объекту изобретения выделению чумного микроба является питательная среда, содержащая агар рН 7,2 с добавлением 0,25% сульфита натрия и спирто-водного раствора генцианвиолета в конечном разведении 1/100 тыс. 1/400 тыс. (1), которая выбрана нами в качестве прототипа.

Однако известная среда не позволяет выделять чумной микроб из загнивших органов павших животных, содержимого кишечника, объектов внешней среды, так как предлагаемые концентрации генцианвиолета не способны полностью подавлять рост антагонистов чумного микроба: микробов рода эшерихий (2), протеев (З), а некоторые его серии подавляют рост чумы. В связи с этим каждая новая партия ингибитора подлежит контролю по определению его допустимых концентраций, подавляющих банальную флору и не влияющих на рост возбудителя чумы, что в значительной мере затрудняет его применение.

Предлагаемая нами среда предназначена для выделения чумного микроба из органов загнивших павших животных, содержимого кишечника, объектов внешней среды.

Указанная питательная среда ФТ-зеленая для выделения чумного микроба содержит агар Хоттингера, аминный азот 80-120 мг% рН 7,2, антибиотик фосфомицин в концентрации 50-100 мкг/мл, теллурит калия 4-5 мкг/мл, бриллиантовый зеленый 1,5-2 мкг/мл и гемолизированную кровь 0,1-0,5%
Антибиотик фосфомицин является ингибитором пептидогликанов клеточной стенки бактерий и способен угнетать рост многих граммположительных и граммотрицательных бактерий (4), но не оказывает ингибирующего действия на рост чумного микроба.

Теллурит калия оказывает ингибирующее действие на рост кишечной палочки и вульгарного протея (5), но не ингибирует чумной микроб. Колонии чумного микроба вырастают на этой среде, имея типичную морфологию и черный центр за счет восстановления металлического теллура.

Краситель бриллиантовый зеленый оказывает фунгистатическое действие подобно малахитовому зеленому (6).

Заявляемая питательная среда ФТ-зеленая характеризуется высокой чувствительностью, позволяя выделять возбудитель чумы из малых посевных доз (10² м. к. /мл). Морфология колоний чумного микроба, выросших на предлагаемой питательной среде, во всех экспериментах была типичной.

Питательную среду ФТ-зеленую готовят следующим образом: фосфомицин, теллурит калия, бриллиантовую зелень добавляют в виде рабочих растворов в расплавленный и остуженный до 45-50^oС агар еx temporae. В качестве стимуляторов роста используют гемолизированную кровь 0,1-0,5% Для растворения фосфомицина используют 1% азотную кислоту, для растворения теллурита калия - дистиллированную воду, бриллиантового зеленого этиловый спирт 1% концентрации, затем дистиллированную воду.

Пример 1. Готовят бактериальную взвесь штамма вульгарного протея 19 в 0,9% растворе хлористого натрия концентрацией 10⁶ м.к./ /мл и смешивают с взвесью культуры штамма чумного микроба 629 "М" концентрацией 10³ м.к./мл в одной пробирке в объемных соотношениях 1:1. Затем 0,1 мл смеси высевают на питательную среду ФТ-зеленая и посевы инкубируют в термостате 24-48 часов (таблица),
Пример 2. Бактериальную взвесь штамма кишечной палочки К-12 в 0,9% растворе хлористого натрия концентрацией 10⁶ м. к. /мл смешивают с взвесью культуры штамма чумного микроба 629 "М" концентрацией 10³ м.к./мл в соотношении 1: 1. Смесь по 0,1 мл высевают на питательную среду ФТ-зеленая, посевы инкубируют в термостате 24-48 часов (таблица).

Питательная среда ФТ-зеленая одновременно подавляет рост антагонистов чумного микроба при больших посевных дозах. Она может быть использована для выделения возбудителя чумы из органов загнивших павших животных, содержимого кишечника и объектов внешней среды. ТТТ1

Использование: биотехнология, микробиология, диагносгика. Сущность изобретения: питательная среда ФТ-зеленая для выделения чумного микроба основана на применении в качестве селективной добавки к агару Хоттингера рН 7,2 антибиотика фосфомицина в концентрации 50-100 мкг/мл, теллурита калия 4-5 мкг/мл, бриллиантового зеленого 1,5-2 мкг/мл, гемолизированной крови 1000-5000 мкг/мл. Исследуемый материал высевают на указанную среду, инкубируют при 28^oС и учитывают результат через 24-48 часов. Питательная среда ФТ-зеленая характеризуется высокой разрешающей способностью в отношении возбудителя чумы, оказывает надежное ингибирующее действие на микробы-антагонисты чумного микроба. Данную среду рекомендуется использовать при проведении бактериологического анализа. 1 табл.

Питательная среда для выделения чумного микроба, содержащая питательный агар, ингибитор роста сопутствующей микрофлоры и гемолизированную кровь, отличающаяся тем, что в качестве питательного агара она содержит агар Хоттингера, а в качестве ингибитора роста фосфомицин, теллурит калия и бриллиантовый зеленый при следующих соотношениях ингредиентов:
Фосфомицин 50 100 мкг/мл
Теллурит калия 4 5 мкг/мл
Бриллиантовый зеленый 1,5 2 мкг/мл
Гемолизированная кровь 1000 5000 мкг/мл
Агар Хоттингера рН 7,2 100 мл