ЖИВАЯ КУЛЬТУРАЛЬНАЯ ВАКЦИНА ЭПМ ПРОТИВ ЧУМЫ ПЛОТОЯДНЫХ Российский патент 1996 года по МПК A61K39/175 

Изобретение относится к и ветеринарии и может быть использовано для профилактики чумы плотоядных.

Известна живая культуральная вакцина против чумы плотоядных, содержащая вируссодержащую жидкость вакцинного штамма "ЭПМ" вируса чумы с биологической активностью 10^3,5ТПД_50/мл и стабилизатор сорбит и желатозу [1]
Однако известная вакцина содержит высокую концентрацию гетерологичных белков (около 7 мг/мл), что вызывает побочные реакции у животных после вакцинации. Кроме того, пик напряженности иммунитета достигается на 30-й день.

Задачей изобретения является разработка вакцины со сниженной концентрацией гетерологичных белков (до 0,3 мг/мл вируссодержащей жидкости) и биологической активностью вируса 10^3,7±0,2ТЦД_50/мл, обеспечивающей длительный напряженный иммунитет. Кроме того, в качестве стабилизатора используют смесь сорбита, полиглюкина и желатозы, взятых в об. ч. 0,05, 0,05 и 0,2 на 0,7 об. ч. вируссодержащей жидкости (ВСЖ).

Технический результат, получаемый в результате решения данной задачи, выражается в снижении реактогенности вакцины и повышении напряженности иммунитета после вакцинации.

Пример 1. Получение вакцины.

Для приготовления вакцины используют однослойную трипсинизированную культуру клеток тканей эмбрионов японского перепела, полученную в роллерных установках при скорости вращения 2 об/мин. Трипсинизированные клетки суспендируют в ростовой среде, состоящей из среды Игла с добавлением 8% сыворотки КРС или 2% эмбриональной сыворотки и антибиотиков В-лактамазного ряда. Взвесь разливают в ролллерные бутыли и вносят вирус в дозе не менее 100 тыс. ТЦД_50/мл на бутыль.

Инкубацию зараженной вирусом культуры клеток проводят в роллерных установках при 35^oС при скорости вращения 2 об/мин. На 5 сут после образования монослоя среду сливают и добавляют свежую ростовую среду без сыворотки. На 8 сут после заражения собирают ВСЖ во флаконы. Ко всем стерильным индивидуальным вирусным сборам с биологической активностью вируса 10^3,7ТЦД_50/мл добавляют стабилизатор из расчета 0,7 об. ч. ВСЖ и 0,3 об.ч. стабилизатора. В качестве стабилизатора используют смесь сорбита, полиглюкина и желатозы из расчета их содержания в 0,3 об.ч. 0,05, 0,05 и 0,2 об.ч. соответственно.

После разлива вакцины в ампулы или флаконы ее подвергают лиофилизации и контролю на стерильность, антигенную активность и специфичность по ЦПД и БОЕ, безвредность и иммуногенность. Одна ампула содержит одну прививочную дозу вакцины 0,5 мл.

Пример 2. Испытание вакцины.

Вакцина испытана на 300 тыс. тхорзофретках. Данный вид животных выбран в качестве модели как наиболее чувствительный к данной инфекции по сравнению с другими видами животных (лисицы, песцы и др.), что позволяет получить более достоверные данные.

В результате обследования иммунизированных тхорзофреток получены данные, свидетельствующие об отсутствии патологических реакций за счет уменьшения в вакцине концентрации гетерологичных белков до 0,3 мг/мл ВСЖ, т.е. вакцина ареактогенна.

В сыворотках крови вакцинированных животных антитела появляются на 7-й день после вакцинации. Вируснейтрализующую активность антител изучают в реакции нейтрализации на первичной культуре клеток эмбрионов японского перепела. Результаты представлены в табл.1.

У всех иммунизированных животных выявлены вируснейтрализующие антитела к вирусу чумы плотоядных, т.е. наблюдается практически 100% сероконверсия.

Однако титры антител, указывающие на наличие сероконверсии у животных, не всегда гарантируют полноту иммунитета, т.е. невосприимчивость животных к последующему заражению полевым вирулентным вирусом. Поэтому оценка вакцины только по показателю титра антител является неполноценной и, как правило, должна дополняться методом прямой защиты.

Иммуногенную активность изучали на тхорзофретках при заражении их вирулентным вирусом "Снайдер Хилл" подкожно. У вакцинированных животных после введения вирулентного штамма вируса не наблюдалось признаков заболеваний, в то время как контрольные животные погибли при наличии типичной клиники чумы. Данные исследований приведены в табл.2.

Таким образом, полученная вакцина обладает специфической иммуногенной активностью, сниженной реактогенностью и обеспечивает длительный напряженный иммунитет. ТТТ1

Использование: в ветеринарии, для профилактики чумы плотоядных. Сущность изобретения: для приготовления живой культуральной вакцины против чумы плотоядных используют вакцинный штамм "ЭПМ" вируса чумы плотоядных, который выращивают в среде Игла с сывороткой КРС или с эмбриональной сывороткой и антибиотиками. Повторное выращивание вируса проводят в бессывороточной среде, что позволяет снизить концентрацию гетерологичных белков до 0,3 мг/мл ВСЖ. 0,7 об. ч. ВСЖ с биологической активностью вируса 10^3,7-0,2ТЦД_50/мл смешивают с 0,3 об. частями стабилизатора, представляющего смесь сорбита 0,05 об.ч., полиглюкина 0,05 об.ч. и желатозы 0,2 об.ч. Вакцину разливают в ампулы или флаконы по 0,5 мл и лиофилизируют. 2 табл.

Живая культуральная вакцина против чумы плотоядных, содержащая вируссодержащую жидкость вакцинного штамма "ЭПМ" вируса чумы плотоядных с примесью гетерологичных белков, сорбит и желатозу, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит полиглюкин, вируссодержащую жидкость она содержит с концентрацией гетерологичных белков до 0,3 мг/мл вируссодержащей жидкости и биологической активностью вируса 10^3,7±^0,2 ТЦД _50/мл при следующем количественном соотношении компонентов, об.ч.

Вируссодержащая жидкость вакцинного штамма "ЭПМ" вируса чумы с концентрацией гетерологичных белков до 0,3 мг/мл вируссодержащей жидкости с биологической активностью 10^3,7±^0,2 ТЦД_50/мл 0,7
Сорбит 0,05
Полиглюкин 0,05
Желатоза 0,2