ШТАММ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА НТНIV 27 - ПРОДУЦЕНТ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА Российский патент 1996 года по МПК C12N5/00 

Описание патента на изобретение RU2067116C1

Изобретение относится к медицине и может быть использовано для диагностики СПИДа, скрининга противовирусных препаратов, а также для изучения патогенеза ВИЧ-инфекции.

Известен штамм продуцент ВИЧ-1 Н9/IIIB (R. Gallo, M. Popovic, US Patent N 4, 647, 773, Mar. 3, 1987).

Недостатком штамма является колеблющийся уровень экспрессии вирусного антигена (10 80 инфицированных клеток популяции могут быть антиген-позитивны от пассажа к пассажу), клеточной выживаемостью 65 85 и связанной с этим необходимостью периодического добавления в культуру свежих неинфицированных исходных клеток Н9.

Цель изобретения повышение выхода целевого продукта полноценного вируса иммунодефицита человека (ВИЧ) без клеточной деструкции.

Предметом изобретения является штамм культуры клеток человека НТНIV27 - продуцент вируса иммунодефицита человека.

Штамм клеток-продуцентов ВИЧ-1 НТНIV27 получен клонированием Т-лимфобластоидных человеческих клеток МТ4, инфицированных ВИЧ-1 с использованием техники лимитирующего разведения на фидерном слое.

Штамм НТНIV27 депонирован в ГКВ N 4122 от 17.ХII. 92 г. и характеризуется следующими признаками.

Морфология. Штамм НТНIV27 представлен типичными Т-лимфобластоидными морфологически однотипными клетками с центрально расположенным крупным ядром и ободком цитоплазмы, бедной органоидами. Периферия клетки покрыта большим количеством микроворсинок, кардинально отличающих этот тип клеток от всех других суспензионных Т-лимфобластоидных культур. Клетки вирус-продуцирующего штамма НТНIV27 морфологически неотличимы от их родительских клеток МТ4 неинфицированных вирусом. Они также одинаково обладают высокой способностью роста в культуре в виде крупных многоклеточных агрегатов.

Культуральные свойства. Штамм НТНIV27 непрерывно и устойчиво культивируется в суспензионной культуре в стационарных или роллерных условиях при 37oC в атмосфере 4,7 CО2 в среде RPMI 1640 с 10-ной фетальной коровьей сыворотки и 100 Ед/мл гентамицина, при соотношении жидкой и воздушной фаз 1:5. Штамм поддерживается путем серийных пассажей каждый 4 или 5-й день разделением пула клеток на 2, при посевной дозе 5 х 105 кл/мл.

Штамм НТНIV27 сохраняется неопределенно долгое время в жидком азоте (-196oС) в присутствии криоконсерванта диметилсульфоксида (DMSO), при концентрации 11 15 х 106 клеток/мл в среде следующего состава: фетальная коровья сыворотка 90 DMSO 10 антибиотики 100 Ед/мл.

Полученный штамм может быть использован для приготовления диагностических тест-систем на СПИД, скрининга противовирусных препаратов, а также для изучения фундаментальных проблем патогенеза ВИЧ-инфекции.

Пример 1. Для контроля содержания внутриклеточного антигена ВИЧ используется непрямой метод иммунофлуоресценции (НИФ) на стеклах с фиксированными клетками НТНIV27 и окрашенными последовательно поливалентной ВИЧ-позитивной антисывороткой и антивидовым конъюгатом IgG с ФИТЦ. Результаты, представленные на фиг. 1 показывают, что 100 клеток одновременно экспрессируют антиген ВИЧ-1.

Пример 2. Ультраструктурная характеристика клеток штамма НТНIV27 и продуцируемого вируса дана по результатам электронно-микроскопического анализа ультратонких срезов (фиг. 2), где показано, что даже клетка, находящаяся на стадии деления, во время которого приостановлены все биосинтетические процессы, тем не менее продуцирует вирус.

Пример 3. Характеристика антигенных свойств вируса из штамма НТНIV27 суммирована в табл. 1.

Пример 4. Сравнительная оценка антигена из клеток НТНIV27 с антигеном из клеток Н9/IIIB приведена в табл. 2.

Таким образом, сравнительная характеристика антигена двух продуцентов ВИЧ указывает на значительные преимущества такового у штамме НТНIV27 по его количественному содержанию, инфекционности и полному представительству белков в иммуноблоте.

Приведенные выше характеристики позволяют использовать штамм НТНIV27 для высокочувствительной и высокоспецифичной диагностики СПИД, а для скрининга противовирусных препаратов и решения фундаментальных проблем патогенеза ВИЧ-инфекции. ТТТ1

Похожие патенты RU2067116C1

название год авторы номер документа
ШТАММ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА I ТИПА, ИСПОЛЬЗУЕМЫЙ ДЛЯ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ТЕСТ-СИСТЕМ 1992
  • Черных А.И.
  • Куляндин С.А.
  • Покровский А.Г.
  • Егоричева И.Н.
  • Казаринова Ф.С.
  • Красных В.Н.
  • Гашникова Н.И.
  • Нечаев Ю.С.
  • Ломанова Г.А.
  • Покровский В.В.
RU2046138C1
ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО 1991
  • Санин А.В.
  • Данилов Л.Л.
  • Наровлянский А.Н.
  • Мальцев С.Д.
  • Моисеенков А.М.
  • Прозоровский С.В.
  • Шибаев В.Н.
  • Веселовский В.В.
  • Насташенко Т.А.
  • Мисуренко Н.К.
RU2005475C1
ПРОТИВОВИРУСНОЕ СРЕДСТВО 1991
  • Санин А.В.
  • Данилов Л.Л.
  • Мальцев С.Д.
  • Моисеенков А.М.
  • Насташенко Т.А.
  • Прозоровский С.В.
  • Веселовский В.В.
  • Шибаев В.Н.
  • Сосновская О.Ю.
  • Мисуренко Н.К.
RU2038083C1
ШТАММ HOMINIS IMMUNODEFICITI VIRUS (HIV-I) ВИЧ-1 /РОССИЯ/ГМ-12-95 (RU 1295) СУБТИПА В ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ 1996
  • Покровский В.В.
  • Кравченко А.В.
  • Юрин О.Г.
  • Ладная Н.Н.
  • Селимова Л.М.
  • Казеннова Е.В.
  • Санков М.Н.
  • Бобков А.Ф.
RU2121502C1
ШТАММ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА 1-ГО ТИПА ИВ735 СУБТИПА В ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ 2012
  • Носик Марина Николаевна
  • Киселева Ирина Алексеевна
  • Рыжов Константин Александрович
  • Носик Дмитрий Николаевич
  • Зверев Виталий Васильевич
RU2520813C2
ШТАММ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА 1-ГО ТИПА ИВ741 СУБТИПА АЕ ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ 2012
  • Носик Марина Николаевна
  • Киселева Ирина Алексеевна
  • Носик Дмитрий Николаевич
  • Бочкова Марина Сергеевна
  • Зверев Виталий Васильевич
RU2520814C2
ШТАММ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА 1-ГО ТИПА ИВ742 СУБТИПА А ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ 2012
  • Носик Марина Николаевна
  • Киселева Ирина Алексеевна
  • Кравченко Алексей Викторович
  • Носик Дмитрий Николаевич
  • Лобач Ольга Александровна
  • Чатаева Мария Семеновна
  • Зверев Виталий Васильевич
  • Покровский Вадим Валентинович
RU2513693C1
ШТАММ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА 1-ГО ТИПА ИВ710 СУБТИПА А РЕЗИСТЕНТНЫЙ К АНТИРЕТРОВИРУСНЫМ ПРЕПАРАТАМ ДЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ВАКЦИННЫХ ПРЕПАРАТОВ 2012
  • Носик Марина Николаевна
  • Киселева Ирина Алексеевна
  • Рыжов Константин Александрович
  • Носик Дмитрий Николаевич
  • Кравченко Алексей Викторович
  • Зверев Виталий Васильевич
  • Покровский Вадим Валентинович
RU2513692C1
ШТАММ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА СЕМ-К, УСТОЙЧИВЫЙ К ВИЧ-ИНФЕКЦИИ 1995
  • Карамов Э.В.
  • Пашкова Т.А.
  • Ревазова Е.С.
  • Барышников А.Ю.
  • Руднева И.А.
  • Кущ А.А.
  • Гущина Е.А.
  • Корнилаева Г.В.
RU2102477C1
ШТАММ ПЕРЕВИВАЕМЫХ КЛЕТОК МОНОЦИТОВ ЧЕЛОВЕКА - ПРОДУЦЕНТ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА I ТИПА 1988
  • Руднева И.А.
  • Карамов Э.В.
  • Горчакова Т.А.
  • Черных А.И.
  • Мамаева О.А.
  • Плясунова О.А.
  • Покровский А.Г.
SU1554370A1

Иллюстрации к изобретению RU 2 067 116 C1

Реферат патента 1996 года ШТАММ КУЛЬТУРЫ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА НТНIV 27 - ПРОДУЦЕНТ ВИРУСА ИММУНОДЕФИЦИТА ЧЕЛОВЕКА

Использование: вирусология, культура ткани. Сущность изобретения: штамм культуры клеток человека НТНIУ27 - продуцент вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), получен путем клонирования с использованием техники лимитирующего разведения на фидерном слое. Штамм обладает стабильными культуральными свойствами и оптимально высокой персистентной продукцией вируса (в 100 % клеток одновременно) без клеточной деструкции. Продуцируемый вирус высокоинфекционен для чувствительных клеток. Имеет полное представительство белков в иммуноблоте. Штамм может быть использован для высокочувствительной и высокоспецифичной диагностической системы на СПИД, для скрининга противовирусных препаратов, а также для решения фундаментальных вопросов патогенезов ВИЧ-инфекции. 2 табл., 2 ил.

Формула изобретения RU 2 067 116 C1

Штамм культуры клеток человека НТНIV27 ГКВ N 4122 продуцент вируса иммунодефицита человека.

Документы, цитированные в отчете о поиске Патент 1996 года RU2067116C1

Патент США N 4647773, кл
Способ гальванического снятия позолоты с серебряных изделий без заметного изменения их формы 1923
  • Бердников М.И.
SU12A1

RU 2 067 116 C1

Авторы

Миллер Г.Г.

Быковский А.Ф.

Покидышева Л.Н.

Титова И.В.

Даты

1996-09-27Публикация

1994-01-31Подача