СПОСОБ ИЗГОТОВЛЕНИЯ АНТИРАБИЧЕСКОЙ ВАКЦИНЫ ИНАКТИВИРОВАННОЙ КУЛЬТУРАЛЬНОЙ Российский патент 1997 года по МПК A61K39/205 

Изобретение относится к области вирусологии, в частности к способу изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной, и может быть использовано для специфической профилактики бешенства животных.

Известна вакцина антирабическая инактивированная сухая культуральная из штамма Щелково-51 [1] которая эффективна и вызывает у животных иммунитет не менее 2^x лет. Готовится в сухом виде. Для получения вирусного сырья используют вакцинный штамм Щелково-51 и перевиваемую линию культуры клеток ВНК-21, которая обладает потенциальными онкогенными свойствами. Вирус инактивируют β--пропилактоном. Для стимулирования иммунитета у животных готовят специальный растворитель РКАВ.

Известна также инактивированная вакцина РОН-МЕРЬЕ Rabisin [2]которая высокоэффективна и вызывает у собак и кошек иммунитет до 3^x лет. Готовится в жидком виде. Основой для ее получения служат фиксированный штамм PV 11-PM вируса бешенства и клеточная линия неврального происхождения (NiL2 - нервная ткань эмбрионов хомячков). Вакцину очищают от клеточных белков методом фильтрации. Вирус инактивируют β-пропилактоном. Вирусный белок сорбируют гидроокисью алюминия.

В вирусном сырье вышеуказанных вакцин содержится сыворотка млекопитающего, которую используют при выращивании вируса в культуре клеток.

С 1973 г. ВОЗ рекомендует использовать инактивированные культуральные антирабические вакцины. Однако производство антирабических вакцин на гетероплоидных клетках связано с низким выходом вируса и использованием сывороток млекопитающих в культуральной среде во время выращивания вируса. В ветеринарии используют перевиваемую культуру клеток ВНК-21, хотя в медицине эта клеточная линия для производства антирабических вакцин из-за онкогенных потенций не используется.

Целью настоящего изобретения является разработка простого и экономичного способа изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной, пригодной для иммунизации животных против бешенства.

Поставленная цель достигается тем, что вакцинный штамм ТС-80 вируса бешенства впервые выращивают в перевиваемой культуре клеток почки сайги (ПС) без сыворотки млекопитающего, так и в присутствии ее в культуральной жидкости. Инфекционная активность вируса достигает 7,5 8,0 лог МЛД 50/мл. Использование отечественного препарата А-24 позволяет полностью инактивировать вирус, сохранив иммуногенные свойства препарата. Разработанная технология производства вакцины позволяет получать вирусное сырье в больших объемах и готовить вакцину в жидком и сухом виде. В качестве растворителя сухой вакцины служит стерильная дистиллированная или кипяченая вода.

Пример конкретного выполнения.

Для приготовления вакцины используют перевиваемую культуру клеток ПС с посадочной концентрацией 120 ± 10 тыс.кл/мл, которую получают роллерным способом в виде кругового монослоя в бутылях, используя среду Игла (МЭМ). Монослой клеток на стенках роллерных бутылей формируется в течение 42 48 часов при температуре 37 ± 0,5^oC при пролиферативной активности клеток 1:5 и рН 7,3 7,4.

Культуру клеток ПС инокулируют вакцинным штаммом ТС-80 вируса бешенства при множественности заражения 0,1 МЛД50/мл на клетку. Бутыли с вируссодержащей культуральной жидкостью замораживают при температуре минус 40 60^oC. Затем через 18 24 часа размораживают при комнатной температуре, вируссодержащее сырье объединяют и вирус инактивируют препаратом А24 (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) не менее 18 часов при содержании его в сырье 0,1 0,15% Затем добавляют гидроокись алюминия до 2,5% концентрации в препарате и готовят жидкую или лиофилизированную вакцину.

По предлагаемому способу изготовлено 6 серий (3 жидкой и 3 лиофилизированной) антирабической вакцины инактивированной культуральной по 5 8 тыс. доз в каждой серии. Полученные вакцинные препараты испытаны согласно Требованиям ВОЗ.

Результаты исследований, отображенные в таблице, свидетельствуют о высокой иммуногенной активности антирабической вакцины инактивированной культуральной. Указанная вакцина как после двукратной, так и однократной иммунизации защищает собак и кошек на 100% от заражения уличным штаммом "Rabies 777M" вируса бешенства и морских свинок на 90 100% после инокуляции стандартным референс штаммом "CV5".

Одновременно установлены стерильность, безвредность приготовленных вакцинных препаратов и полная инактивация вируса. Указанная вакцина сохраняет свои свойства в течение 1,5 лет (срок наблюдения).

Предлагаемая технология изготовления вакцины проста в исполнении и может быть промышленно применима.

(57) Использование: вирусология. Сущность изобретения: вакцинный штамм вируса бешенства выращивают в перевиваемой культуре клеток почки сайги в бессывороточной питательной среде. Инфекционная активность вируса достигает 7,5 - 8,0 логарифмов МЛД 50/мл. Вирус инактивируют препаратом А-24 (1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодекан) не менее 18 часов при концентрации его в сырье 0,1 - 0,15%. Добавляют гидроокись алюминия и готовят жидкую или лиофилизированную вакцину. 1 табл.

1 Способ изготовления антирабической вакцины инактивированной культуральной, включающий культивирование вируса в культуре клеток, инактивацию и сорбцию, отличающийся тем, что из вирусов используют вакцинный штамм вируса бешенства ТС-80, культивированный в роллерной культуре перевиваемой линии клеток почки сайги в бессывороточной среде до активности 7,5 8,0 lg МЛД 50/мл, инактивацию проводят 1,8,3,6-диэндометилен-1,3,6,8-тетраазациклодеканом в 0,1 0,15% -ной концентрации не менее 18 ч и готовят в жидком или лиофилизированном виде.