СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ЗАБОЛЕВАНИЯ ИКРЫ И МОЛОДИ РЫБ САПРОЛЕГНИЕЙ Российский патент 1997 года по МПК A01K61/00 A61K35/80 

Изобретение относится к области искусственного разведения рыб и касается способа профилактики заболевания икры и молоди рыб сапролегнией с целью получения здорового и жизнестойкого потомства.

В практике рыбоводства, в частности лососеводства, для предупреждения заражения сапролегниевыми грибами икру перед закладкой на инкубацию и после образования пигментации глаз обрабатывают 0,5%-ным раствором формалина в течение трех минут или малахитовым зеленым в разведении 1 г на 15 л в течение 10-60 с [1]
К недостатком известного способа можно отнести то, что в указанных концентрациях формалин и малахитовый зеленый практически не ингибируют развитие сапролегниевых грибов. С увеличением концентрации препаратов увеличивается токсичность, особенно в отношении личинок рыб. Кроме того, формалин является сильным ядом для персонала, работающего с ним, так как вызывает аллергию и кожные заболевания, а при вдыхании способен накапливаться в организме.

В качестве прототипа выбран способ обработки икры форели для предупреждения заражения сапролегниевыми грибами углеводами рамнозой и арабинозой [2] Икру выдерживали в 0,1 и 0,01 М растворах углеводов с последующей инкубацией в условиях рыбозавода. Через 10 дней после начала инкубации в экстрактах зародышей определяли титр рамнозоспецифичного анти-B лектина, который заметно повышался при обработке икры 0,01 М растворами моносахаридов. Обработка же икры растворами большей концентрации (0,1 М) приводила к резкому падению титра анти-B лектина. В этом случае икра поражается сапролегниевыми грибами и почти полностью погибает.

Однако в этой работе нет конкретных цифр по выживаемости и поражаемости сопролегниевыми грибами икры и зародышей.

Задача изобретения разработка высокоэффективного способа профилактики (способа профилактики) заболевания икры и молоди рыб сапролегнией, увеличивающего жизнеспособность зародышей и мальков, что в дальнейшем должно сказаться на увеличении количества промысловых рыб.

Поставленная задача решена тем, что в способе профилактики заболевания икры и молоди рыб сапролегнией, включающем обработку икры иммуномодулятором путем выдерживания в растворе препарата, в качестве последнего используют раствор 1_→3;1_→6-β-D глюканов в концентрации 100-1000 мкг/мл, а обработку осуществляют непосредственно во время оплодотворения. В качестве 1_→3;1_→6-β-D глюканов используют ламинаран и Транслам.

Ламинаран получают из морских водорослей известным способом [3] Транслам получают путем ферментативной трансформации ламинарана [4] Способность к стимуляции иммунитета рыб, выявленная у ламинарана и Транслама, позволила использовать их в предлагаемом способе профилактики заболевания икры и молоди рыб сапролегнией. Способ позволяет значительно увеличить жизнеспособность икры и молоди рыб (кеты), уменьшить поражаемость сапролегниевыми грибами за счет активации иммунной системы по сравнению с применяемым в рыбоводной практике способом обработки икры формалином.

Сущность способа поясняется следующими примерами.

Пример 1. Икру и молоди для эксперимента взяли от зрелых текучих рыб на забойной станции, расположенной в 15 км от рыбоводного завода "Рязановский" вниз по руслу реки. К полученной от нескольких самок икре добавляют сперму нескольких самцов, делят на 5 партий. В контрольную партию 1 добавляют воду. В оставшиеся партии вместо воды добавляют водный раствор ламинарана (в концентрации 1000; 500; 100 и 50 мкг/мл). Икру выдерживают в растворах в течение трех минут, после оплодотворения промывают от избытка спермы и оставляют набухать в проточной воде на 2 ч. После набухания перевозят для дальнейшей инкубации на рыбоводный завод. За инкубационный период несколько раз определяют процент погибшей икры, размер и вес молоди. Об иммунном статусе рыб судят как визуально, учитывая количество поражений сапролегниевыми грибами икры, так и по определению титра анти-В лектина (реакцией гемагглютинации) в экстрактах зародышей кеты, который определяют дважды: через 10 и 45 дней после обработки. Формалином (контроль 2) икру обрабатывают через сутки после оплодотворения, пользуясь инструкцией, которую применяют на рыбоводном заводе [1]
В представленной таблице показаны результаты проделанной работы, откуда видно, что после обработки ламинараном (концентрация 10000; 500 и 100 мкг/мл) отход икры уменьшается в 2-3,5 раза по сравнению с контролями 1 и 2. Как видно из таблицы, ламинаран в тех же концентрациях оказывает особенно существенное влияние на сохранность икры при транспортировке на завод. Так, по сравнению с контролем 1, отход икры после перевозки уменьшается в 2-4 раза. Ламинаран в меньшей концентрации (50 мкг/мл) уже не оказывает существенного влияния на изменение количества отхода. После обработки ламинараном (концентрация 10000; 500 и 100 мкг/мл) количество сапролегниевых грибов, поражающих икру, уменьшается в 2-5 раза по сравнению с контролями 1 и 2. Обработка ламинараном в концентрации 50 мкг/мл не дает существенных результатов и рост сапролегниевых грибов мало отличается от необработанной партии.

Иммуностимулирующее действие ламинарана подтверждается количеством анти-В лектина в экстрактах зародышей. Через 10 дней после обработки реакция с тест-эритроцитами наблюдается до разведения 1/64 (в концентрации 1000; 500 мкг/мл), тогда как в контролях 1 и 2 лишь до разведения 1/4. Через 45 дней в контроле 1 титр лектина уменьшился до разведения 1/2, а после обработки ламинараном в концентрации 500 мкг/мл почти сохранился (1/32). В партии икры, обработанной формалином, уровень лектина остался на прежнем уровне (1/4). Это указывает на то, что в икре, обработанной ламинараном, иммунитет повышается и это состояние сохраняется достаточно длительной время.

После выклева личинок дважды измеряли прирост после поднятия личинок на плав и перед выпуском в бассейны. В первом случае молодь была крупнее после обработки ламинараном в концентрации 100 мкг/мл, а перед выпуском более крупная молодь отмечалась в партиях, обработанных большей концентрацией ламинарана. Так, после обработки ламинараном в концентрации 500 мкг/мл молодь была на 20% крупнее, чем в контроле 1. Обработка формалином почти не оказывает влияние на размер молоди (см. таблицу).

Пример 2. Икру обрабатывают так же, как в примере 1, но в этом варианте применяют Транслам. После обработки трансламом в концентрациях 1000 и 500 мкг/мл отход икры по сравнению с контролями 1 и 2 уменьшился в 2 и 3 раза соответственно (см. табл. ). При транспортировке оплодотворения икра лучше всего сохраняется после обработки трансламом в концентрациях 100 и 500 мкг/мл (отход икры в 3,5 раза меньше, чем в контроле 1). Уменьшение концентрата действующего вещества до 50 мкг/мл не оказывает существенного влияния на отход икры и рост сапролегниевых грибов. Поражаемость сапролегниевыми грибами меньше всего после обработки трансламом в концентрациях 1000 и 500 мкг/мл. Это подтверждается данными по определению титра анти-В лектина. После обработки икры трансламом в этих концентрациях титр анти-В лектина в экстрактах зародышей кеты через 10 дней после обработки наблюдался до разведения 1/64, а через 45 дней 1/16, тогда как в первом контроле он был 1/4 и 1/2 соответственно. После обработки меньшей концентрацией транслама титр анти-В лектина изменялся с разведением 1/32 до 1/8 при 100 мкг/мл; 1/8 до 1/4 при 50 мкг/мл. Обработка формалином, как и в первом примере, с течением времени (45 дней) уровень лектина не изменяли и этот уровень мало отличался от уровня контроля 1. Отсюда видно, что транслам, как и ламинаран, вызывает и длительное время поддерживает повышенную устойчивость иммунитета. В то же время самая крупная молодь была после обработки икры трансламом в концентрации 500 мкг/мл (после поднятия на плав 10% перед выпуском на 45% крупнее, чем в контролях 1 и 2).

Таким образом показано, что ламинаран и транслам обладают значительно большей эффективностью для предупреждения заражения икры и молоди рыб сапролегниевыми грибами, чем используемый в настоящее время для этой цели формалин. В оптимальном случае (обработка 1_→3;1_→6-β-D глюканами в концентрации 500 мкг/мл) отмечено в 5 раз меньше количество сапролегниевых грибов, чем в контроле 1; тогда как после обработки формалином разница с контролем 1 была совсем незначительна (на 0,5% см. таблицу).

Сравнивая действие ламинарана и транслама, видим, что несмотря на то, что в отличие от теплокровных, где транслам является лучшим иммуностимулятором [5,6] чем ламинаран, для хладнокровных (рыбы) иммуностимулирующие эффекты этих двух веществ довольно близки. Поэтому возможно использование как транслама, так и более доступного и дешевого ламинарана для профилактики против заражения сапролегниевыми грибами. Оптимальной концентрацией для обработки икры является концентрация 500 мкг/мл. Уменьшение концентрации препаратов (ниже 100 мкг/мл) почти снимает эффект иммунизации зародышей кеты. Обработка икры 1_→3;1_→6-β-D глюканами в концентрациях от 100 до 1000 мкг/мл значительно увеличивает сохранность икры при перевозке (отход в 2-4 раза меньше, чем в контроле 1). Увеличение сохранности икры при перевозке, возможно, еще одно проявление иммуностимуляции икры, обработанной 1_→3;1_→6-β-D
глюканами.

Литература.

1. Инструкция по искусственному разведению тихоокеанских лососей. Гос. комитет по рыбному хозяйству при СНХ СССР. Главрыбвод, 1963 г.

2. Балахнин И. А. и Лукьяненко В.И. Активация неспецифических факторов защиты рыб углеводами. Доклады Академии наук СССР, 1991, т. 318. N 5, с. 1254-1256.

3. Звягинцева Т.Н. Сундукова Е.В. и Елякова Л.А. Патент РФ N 1642725, С О8 В 37/18 "Способ получения ламинарана". 1990 г.

4. Звягинцева Т.Н. Исакова В.В. и Елякова Л.А. Ферментативное превращение ламинаранов в 1,3; 1,6-β-D-глюкан, обладающий иммуностимулирующей активностью. "Биоорганическая химия". 1995, т. 21. N 3, с.218-225.

5. Кузнецова Т. А. и др. Влияние транслама на некоторые показатели естественной резистентности облученного организма. Радиобиология. 1994, N 2, с. 236-238.

6. Игнатенко Л.А. и др. Стимуляция регенерации гемопоэза мышей под действием транслама. 1990. т. 30. с. 555-556.

Использование: в рыбоводстве при искусственном разведении рыб для профилактики заболевания икры и молоди рыб сапролегнией и получения тем самым здорового и жизнестойкого потомства. Сущность изобретения: икру рыб во время оплодотворения выдерживают в растворе 1_→3;1_→6-β-D - глюканов, таких как ламинаран и транслан в концентрации 100-1000 мкг/мл. Обработка икры этими препаратами приводит к увеличению жизнеспособности икры и молоди рыб и уменьшению повреждаемости сапролегниевыми грибами за счет активации иммунной системы. 1 табл.

Способ профилактики заболевания икры и молоди рыб сапролегнией, включающий обработку икры иммуномодулятором путем выдерживания в растворе препарата, отличающийся тем, что в качестве последнего используют
1 _→ 3; 1 _→ 6-β-Д-
глюканы в концентрации 100 1000 мкг/мл, а обработку осуществляют непосредственно во время оплодотворения.