СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ЭНЗИМОТЕРАПЕВТИЧЕСКОГО, ПРОТИВОВИРУСНОГО И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕГО ПРЕПАРАТА И ЭНЗИМОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЙ, ПРОТИВОВИРУСНЫЙ И ИММУНОМОДУЛИРУЮЩИЙ ПРЕПАРАТ Российский патент 1997 года по МПК A61K35/66 C12N9/52 

Изобретение относится к биологии и медицине, а именно к способам получения препаратов для лечения и профилактики онкологических, сердечно-сосудистых, медленных вирусных инфекций, включая СПИД, и хронических патологических и предраковых состояний при помощи энзимов-метаболитов симбионтных бактерий.

Предлагаемый препарат способствует возобновлению функционирования природных энзиматических систем организма человека, инициируемых действием бактериальных энзимов-биокатализаторов, ускоряющих прохождение процессов в живом организме. Одним из необходимых энзимов, утраченных человеческим организмом в процессе эволюции, является фибринолитический энзим стрептокиназа, отсутствие которого создает в организме человека состояние приобретенной энзимопении и выражается в депрессии фибринолиза.

В настоящее время в медицинской практике в качестве фибринолитических препаратов широко используются патентованные препараты стрептокиназы под разными наименованиями (варидаза США, стрептаза ФРГ и др.).

Наиболее близким аналогом патентуемого препарата является японский бактериальный препарат ОК-432, выделенный из убитых бактериальных клеток гемолитических стрептококков группа А (1). Испытания этого препарата показали, что его использование не создает необходимого состояния непрерывной антигенной стимуляции иммунной системы.

Сущность изобретения состоит в том, что препарат получают не из убитой (в прототипе), а из живой ослабленной (аттенуированной) культуры биохимически- и иммуногенноактивных штаммов бактерий β -гемолитических стрептококков группы А штамм "Гуров" (коллекция НИИСтандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича, г.Москва).

Основа способа получения указанного препарата состоит в том, что лиофилизированная культура штамма "Гуров" после вскрытия ампул смачивается 0,15-0,3 мл стерильного физиологического раствора, смешивается с мясо-пептонным бульоном (5 мл) и 0,15-0,25% глюкозы при pH 7,4-7,8, затем пробирка со смесью помещается в термостат и выдерживается при температуре 37-38^oC в течение 24-36 ч до образования хлопьевидного осадка (придонный рост).

После появления хлопьевидного осадка инкубированная культура переносится на подготовленную твердую среду 5% кровяной агар, 0,7-0,8 мл инкубированной культуры на каждую чашку Петри и вновь инкубируется при температуре 37-38^oC в течение 24-36 ч до образования колоний. Выращенная культура смывается с чашек Петри стерильным физиологическим раствором, подводится под оптический прибор и доводится до определенной концентрации бактериальных клеток (стандарт мутности).

Лабораторный контроль препарата осуществляется при идентификации цепочек b -гемолитических стрептококков группы А под микроскопом.

Пример. В пробирку с 5 мл полужидкого агара, нагретого до 37^oC, добавляют 1 мл инактивированной человеческой сыворотки и вносят лиофилизированную культуру штамма b -гемолитического стрептококка группы А штамма Гурова. Пробирку с культурой помещают в термостат при 37^oC. После образования в пробирке хлопьевидного осадка (24-36 ч) культуру переносят на заранее приготовленные чашки с твердым кровяным агаром с дефибринированной человеческой кровью и помещают в термостат при 37^oC на 24-36 ч.

После образования колоний культура осторожно смывается стерильным физиологическим раствором и сравнивается со стандартом мутности для установления необходимой концентрации бактериальных клеток. Культура сохраняет жизнеспособность в течение 4-5 ч. Для подготовки новой дозы вакцины культура вновь пересевается. Долговременное сохранение культуры до одного года проводится при замораживании ее при температуре -15^oC в пробирках с мясо-пептонным бульоном.

Полученный таким способом препарат относится к биологически активным, экологически обусловленным для организма человека веществом. Действующими началами препарата являются иммуностимуляторы (полисахариды клеточной стенки бактерий) и энзимы, вызывающие восстановление функционирования энзиматических систем организма человека за счет непрерывной продукции их бактериальными клетками, персистирующими в лимфосистеме. Действие препарата основано на фундаментальных биологических законах эволюции. Фармакологические, фармакинетические и иммуногенные свойства, а также диапазон их индикации изучались нами с 1974 г. по настоящее время (с 1974 по 1978 г. доклинические испытания, с 1978 по 1994 г. клинические испытания).

Испытания показали, что применение препарата приводит к снятию состояния энзимопении и недостаточности иммунной системы, что выражается в быстром и устойчивом улучшении здоровья больных. Данное явление объясняется восстановлением функционирования природных, созданных в процессе эволюции энзиматических систем организма человека и непрерывной продукцией необходимых энзимов метаболитов b -гемолитического стрептококка группы А, которого можно отнести к нормальным эндосимбионтам организма человека.

Отрицательных действий препарата не обнаружено.

В настоящее время по результатам многолетних исследований готовится заявка на изобретение по способам лечения различных заболеваний с помощью патентуемого препарата.

Использование: биотехнология, медицина. Сущность изобретения: энзимотерапевтический и противовирусный препарат представлен живой культурой слабовирулентного биохимически активного штамма "Гуров" β - гемолитических стрептококков группы А в стерильном физиологическом растворе при концентрации 1-2 млрд/мл бактериальных клеток. Для реализации способа указанную культуру смешивают с мясо-пептонным бульоном и глюкозой при pH 7,6-7,8. После образования хлопьевидного осадка культура переносится на твердый кровяной агар и инкубируется. Живая культура снимается с поверхности кровяного агара стерильным физиологическим раствором до содержанию в суспензии 1-2 млрд микробных клеток на 1 мл. 2 с.п. ф-лы.

1. Способ получения энзимотерапевтического, противовирусного и иммуномодулирующего препарата, заключающийся в том, что лиофилизированную живую культуру аттенуированного стрептокиназоактивного штамма "Гуров" β-гемолитических стрептококков группы А смачивают 0,15 0,30 мл стериального физиологического раствора, смешивают с мясопептонным бульоном в присутствии 0,15 0,25% глюкозы, инкубируют до образования хлопьевидного осадка, после чего инкубированную культуру переносят на твердый кровяной агар, инкубируют до образования колоний, затем смывают стерильным физиологическим раствором и доводят до содержания в суспензии 1 2 млрд микробных клеток на 1 мл. 2. Энзимотерапевтический, противовирусный и иммуномодулирующий препарат, представляющий собой суспензию 1 2 млрд. микробных клеток на мл физиологического раствора живой культуры аттенуированного стрептокиназоактивного штамма "Гуров" β-гемолитических стрептококков группы А, выращенной в мясопептонном бульоне с 0,15 0,25% глюкозы до образования хлопьевидного осадка и на твердом кровяном агаре до образования колоний.