ПРОБИОТИЧЕСКИЙ ПРЕПАРАТ "СТРЕПТОБИФИД" ДЛЯ ЖИВОТНЫХ Российский патент 1997 года по МПК A61K35/74 C12N1/20 C12N1/20 C12R1/46 

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии, а именно, к производству пробиотиков для животноводства и может найти применение для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний у сельскохозяйственных и домашних животных, в том числе и птицы.

Известен пробиотический препарат СБА, содержащий смесь трех видов бактерий Lactobacillus acidofilus Bifidobacterium bifidum и Streptrcoccus faccium (Антипов В.А. Ермакова Т.Н. Кошелева Е.К. Бадалян К.М. Применение СБА в качестве ростстимулирующего средства //Всес. конф. "Микроорганизмы - стимуляторы и ингибиторы роста раст. и животных". 3-5 окт.1989: Тез. докл. ч.1, Ташкент, 1989, с. 14). Однако препарат СБА обладает профилактическим эффектом при использовании его только для поросят. Кроме того, культуры L. acidofilus и B.Bifidum вследствие невысокой адгезивной активности слабо приживляются в желудочно-кишечном тракте и проходят транзитом, в результате эффект от использования препарата значительно снижается и обуславливается в основном действием молочной кислоты. Кроме того, штамм B. bifidum обладает слабыми ростовыми, ферментативными и биохимическими свойствами, что делает его малоперспективным для использования в составе ветеринарных пробиотиков.

Известен пробиотик из штамма Streptococcus faecium JMB-52, используемый для снижения значения pH в желудочно-кишечном тракте животных (патент Австрии N 383956, A (61 K 35/74, опубл. 1987). Препарат используют для лечения желудочно-кишечных заболеваний у животных и для силосования кормов. Механизм действия препарата основан на быстром физиологическом восстановлении перистальтики кишечника и не касается восстановления нормофлоры животного.

Наиболее близким аналогом является пробиотик на основе штамма Bifidobacterium globosum ВГНКИ N БФ-4-ДЕП (патент N 2031937 C 12 N 1/20, опубл. 27.03.95 г.).

Штамм обладает выраженными адгезивными свойствами и высокой антагонистической активностью. Однако использование пробиотического препарата, содержащего монокультуры штамма B. globosum, не всегда обеспечивает ожидаемый эффект при профилактике и лечении желудочно-кишечных заболеваний, что ограничивает его применение в животноводстве или требует необоснованного завышения рекомендуемых доз.

Задачей изобретения является получение эффективного пробиотического препарата для профилактики и лечения желудочно-кишечных заболеваний у всех видов животных, в том числе и птицы.

Технический результат изобретения заключается в получении препарата "Стрептобифид" с широким спектром антагонистической активности и активными биологическими свойствами, способного стабилизировать и корректировать кишечный микробиоценоз у всех видов животных, в том числе и птицы, повышающий естественную резистентность и увеличивающий продуктивность животных.

Сущность изобретения заключается в следующем. Предлагаемый пробиотический препарат "Стрептобифид" содержит штамм Bifidobacterium globosum ВГНКИ N БФ-4-ДЕП и штамм Streptococcus faccius ВГНКИ N 27-/IIB-ДЕП.

Входящие в состав препарата "Стрептобифид" штаммы оказывают синергидное действие, обладают хорошей адгезивной, антагонистической активностью по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре и активируют процессы пищеварения.

Кроме сухой бактериальной массы штаммов бифидобактерий Bifidobacterium globosum ВГНКИ N БФ-4-ДЕП и штамма Streptococcus faecium ВГНКИ N 27/IIB-ДЕП пробиотический препарат содержит углеводы, окись алюминия, гидроокись алюминия и наполнитель.

Штамм стрептококка Streptococcus faecium депонирован в коллекции микроорганизмов ВГНКИ под N 27-/IIB-ДЕП. Он выделен из кишечника здоровых поросят путем направленной селекции. Штамм Streptococcus faecium ВГНКИ N 27-/IIB-ДЕП характеризуется следующими свойствами:
морфологические признаки: типичные для микроорганизмов, представителей семейства стрептококков. При микроскопии мазка, окрашенного по Граму штамм имеет вид сферических овальных грамположительных клеток, расположенных поодиночке или собранных в цепочки;
культуральные признаки: штамм хорошо растет на жидких питательных средах, используемых для культивирования стрептококков (казеиново-дрожжевой среде, бульоне Хоттингера, мясопептонном бульоне), вызывая равномерное помутнение среды с выпадением белого рыхлого осадка, разбивающегося при встряхивании в равномерную взвесь. На поверхности плотных питательных сред образует мелкие белые или голубовато-белые колонии S-формы;
физиологические признаки: желатин не разжижает, индол и сероводород не образует. Каталазоотрицательный. Лакмусовое молоко свертывает и восстанавливает. Метиленовое молоко редуцирует. Микроаэрофил. Не растет в присутствии теллурита натрия. Растет в гидролизованном молоке с 6,5% хлористого натрия и 40% желчи. Свертывает стерильное обезжиренное молоко через 6-8 ч культивирования при температуре 38±1^oC с образованием плотного ровного сгустка без разрывов и отделения сыворотки;
ферментативные свойства: сбраживает глюкозу, лактозу, мальтозу, сахарозу, маннит, галактозу. Не сбраживает сорбит, дульцит, арабинозу.

генетические особенности: устойчив к метациклину, полимиксину, мономицину. Слабо чувствителен к эритромицину, фузидину, ристомицину, стрептомицину, рифампицину, неомицину, левомицетину. Не растет в присутствии тетрациклина, линкомицина, доксациллина;
серологические свойства позволяют отнести его к Ленсфильдской серологической группе D. Штамм непатогенен суточная живая и убитая культура штамма не вызывает гибели белых мышей при внутрибрюшинном введении в дозе 500 млн. микробных клеток в течение 10 суток наблюдения;
антагонистическая активность: штамм обладает выраженной антагонистической активностью по отношению к патогенным штаммам эшерихий и сальмонелл. Зоны задержки роста тест-штаммов E. coli: 1075/0149 K91 K88, 722/0141 K87 K88; 722/0141 K87 K88; 292/0149 K91 K88; 292/0149 K91 K88; S. enteritidis, S. cholera-suis составляет от 21±1,6 до 29,5±6,4 мм;
ростовые свойства: штамм обладает высокой ростовой активностью на обычных жидких питательных средах (МПБ, бульоне Хоттингера) казеионово-дрожжевой среде, молоке, обрате, молочной сыворотке, заменителях цельного молока. Скорость накопления бакмассы составляет не менее 10⁹-10¹¹ м.к./мл за время культивирования 12-14 ч.

Пример 1. Препарат "Стрептобифид", содержащий культуру штамма стрептококка ВГНКИ N 27/IIB-ДЕП и бифидобактерий Bifidobacterium grobosum ВГНКИ N БФ-4-ДЕП, готовят на основе сухой бактериальной массы, полученной путем раздельного глубинного культивирования микроорганизмов на жидких питательных средах, принятых для культивирования бифидобактерий и стрептококков или на средах на основе ферментативного гидролизата казеина с добавлением дрожжевого автолизата.

За время культивирования в течение 16±2 ч достигается выход биомассы каждого вида бактерий не менее 10 млрд. живых микробных клеток в 1 мл культуральной взвеси.

Полученные культуры концентрируют в 10-15 раз в зависимости от плотности культуральной взвеси, отмывают от продуктов метаболизма на сепараторах или микрофильтрационных установках.

Сконцентрированные бактериальные суспензии высушивают сублимационным способом по общепринятой технологии.

В полученных сухих полуфабрикатах содержится не менее 500 млрд. живых микробных клеток в 1 г.

Далее сухую бакмассу каждого штамма смешивают между собой в соотношении 1: 1 и добавляют углевод, окись и гидроокись алюминия и наполнитель (мука, крахмал, сухая молочная сыворотка, сухое молоко и заменитель цельного молока) при следующем соотношении компонентов на 1 кг, в г:
Сухая бакмасса штамма стрептококка с содержанием 30-1000 млрд. живых микробных клеток/г 2,0-4,0
Сухая бакмасса штамма бифидобактерий с содержанием 30-1000 млрд. живых микробных клеток/г 2,0-4,0
Углевод (лактозу или сахарозу) 2,0-4,0
Окись алюминия 10-30
Гидроокись алюминия 100-300
Наполнитель До 1000
Указанный состав позволяет получать препарат с общим значением КОЕ стрептококков и бифидобактерий при равном их количественном соотношении от 120 млн. до 8 млрд. в 1 г.

Пример 2. Испытывают: профилактическую эффективность препарата, полученного по примеру 1, с общей концентрацией бактерий в 1 г 180 млн.м.к. профилактическую эффективность препарата, полученного по примеру 1, с общей концентрацией бактерий в 1 г 600 млн.м.к.

В качестве биологической модели для испытания препарат используют новорожденных поросят в хозяйстве, неблагополучном по желудочно-кишечным заболеваниям, в том числе бактерийной этиологии.

В помещении одного цеха формируют три группы новорожденных поросят, подбирая гнезда с примерно одинаковым количеством поросят у свиноматки.

Первой группе поросят задают перорально методом индивидуального выпаивания с водой или ЗЦМ 2 раза в сутки в течение 10 дней по 1 г на один прием препарата, приготовленного по примеру 1 с концентрацией КОЕ 180 млн.м.к./г. Второй группе поросят задают аналогично в течение 10 дней по 1 г препарата, приготовленного по примеру 1 с концентрацией КОЕ 600 млн.м.к./г. Третью группу поросят используют в качестве контрольной. Поросятам контрольной группы назначают симптоматическую и антибактерийную терапию.

Учитывают количество заболевших желудочно-кишечными заболеваниями поросят путем ежедневной регистрации числа поросят с клиникой диарейного синдрома, общую сохранность поросят 11 дней после начала применения испытуемого препарата и результатов бактериологических исследований по частоте высеваемости патогенных штаммов эшерихий, выделенных из трупов павших поросят. Данные представлены в табл.1.

Из табл. 1 следует, что препарат "Стрептобифид" обладает эффектом при профилактике желудочно-кишечных заболеваний у новорожденных подсосных поросят, повышает общую сохранность, снижает заболеваемость желудочно-кишечными заболеваниями и частоту высеваемости патогенных штаммов эшерихий.

Пример 3. Испытывают: профилактическую эффективность препарата "Стрептобифид", полученную по примеру 1, с общей концентрацией KOE бактерий в 1 г препарата 180 млн. микробных клеток; профилактическую эффективность препарата, полученного по примеру 1 с общей концентрацией бактерий в 1 г 600 млн. микробных клеток.

В качестве биологической модели используют цыплят начиная с 1- и до 10-дневного возраста.

В птицеводческом хозяйстве промышленного типа, неблагополучном по желудочно-кишечным заболеваниям, в том числе и бактерийной этиологии, в помещении одного птичника с напольным содержанием формируют три группы цыплят начиная с суточного возраста.

Первой группе цыплят задают ежедневно в течение 10 дней препарат с общей концентрацией 180 млн.м.к./г из расчета 1 г препарата на 10 голов птицы, добавляя его в корм. Второй группе цыплят задают аналогично препарат с общей концентрацией бактерий 600 млн.м.к./г из расчета 1 г препарата на 10 голов птицы.

Третью группу цыплят используют в качестве контрольной и в профилактических целях применяют антибиотик тетрациклин по схеме, применяемой в хозяйстве.

Учет показателей эффективности проводят на 11-й день после начала дачи препарата по общей сохранности, проценту падежа, не связанного и связанного с заболеваниями, в том числе и желудочно-кишечными, частоте регистрации признаков желудочно-кишечных заболеваний по данным патологоанатомического вскрытия, проводимого ежедневно в течение опыта.

Полученные результаты приведены в табл. 2.

Вывод: применение препарата "Стрептобифид" способствует повышению общей сохранности цыплят до 10-дневного возраста и снижает процент падежа цыплят, связанный с желудочно-кишечными заболеваниями.

Пример 4. Испытывали профилактическую эффективность препарата "Стрептобифид" на щенках 1-3-месячного возраста, поступивших в клинику с диагнозом острой или хронической диспепсии неинфекционной этиологии.

Препарат "Стрептобифид", приготовленный по примеру 1 с общей концентрацией живых микробных клеток 180 млн.м.к./г задают 8 щенкам по 1 г на прием 2 раза в день с кормом в течение 10 дней.

Препарат "Стрептобифид", приготовленный по примеру 1, с общей концентрацией живых микробных клеток 600 млн.м.к./г задают 10 щенкам аналогично в течение 10 дней.

В качестве контрольной используют группу из 12 щенков, которым назначают симптоматическую и антибактерийную терапию. Наблюдение за щенками первой группы показало, что диспепсические явления на 10-й день после начала дачи препарата наблюдались у 2 щенков из 8. У остальных животных акт дефекации, его частота и консистенция фекалий соответствовали физиологической норме. У щенков был отмечен хороший аппетит и общее состояние.

Во второй группе на 10-й день дачи препарата диспепсические явления полностью исчезли у всех 10 щенков. Щенки подвижны, аппетит восстановлен полностью.

В третьей группе, получавшей симптоматическую и антибактерийную терапию, у 5 из 12 щенков признаки нарушения деятельности желудочно-кишечного тракта сохранились, профузный понос у этих животных сменился нерегулярным актом дефекации, характеризующимся чередованием поноса с запорами. Щенкам назначено долечивание пробиотическими препаратами в том числе и препаратом "Стрептобифид".

Из приведенных данных следует, что препарат "Стрептобифид", изготовленный из штамма бифидобактерий Bifidobacterium globosum ВГНКИ N БФ-4-ДЕП и штамма стрептококков Streptococcus faecium ВГНКИ N 27-/IIВ-ДЕП, обладает профилактической и лечебной эффективностью при испытании его на животных с целью предупреждения развития желудочно-кишечных заболеваний, в том числе и бактерийной этиологии.

Уменьшение дозы препарата снижает его профилактическую эффективность, а увеличение может привести к нерациональным расходам.

Использование: биотехнология, ветеринария, пробиотик для животных, стрептококк, бифидобактерии. Сущность изобретения: пробиотический препарат "Стрептобифид" содержит сухую бакмассу штаммов Bifidobacterium globosum ВГНКИ N БФ-4-ДЕП и Streptococcus faecium ВГНКИ N 27-/ПВ-ДЕП, наполнитель взятый в определенном количественном соотношении. При этом из углеводов он содержит сахарозу или латозу, из наполнителей - муку, крахмал, сухую сыворотку молока, сухое молоко и заменитель цельного молока. Входящие в состав препарата "Стрептобифид" штаммы оказывают синергидное действие, обладают хорошей адгезивной, антагонистической активностью по отношению к условно-патогенной и патогенной микрофлоре и активируют процессы пищеварения. Кроме того, пробиотический препарат стабилизирует и коррегирует кишечный микробиоценоз у всех видов животных, в том числе и птицы, повышает естественную резистентность и увеличивает продуктивность животных. 2 з.п. ф-лы, 2 табл.

1. Пробиотический препарат для животных, содержащий сухую бакмассу бифидобактерий штамма Bifidobacterium globosum ВГНКИ N БФ-4-ДЕП, отличающийся тем, что дополнительно содержит сухую бакмассу штамма Streptococcus faecium ВГНКИ N 27/11В-ДЕП, углеводы, окись алюминия, гидроокись алюминия и наполнитель при следующем соотношении компонентов, г на 1 кг препарата:
Сухая бакмасса штамма Bifidobacterium globosum ВГНКИ N БФ-4-ДЕП с содержанием 30 1000 млрд. м.к./г 2,0 4,0
Сухая бакмасса штамма Streptococcus faecium ВГНКИ N 27/11В-ДЕП с содержанием 30 1000 млрд.м.к./г 2,0 4,0
Углеводы 20 40
Окись алюминия 10 30
Гидроокись алюминия 100 300
Наполнитель До 1000
2. Препарат по п. 1, отличающийся тем, что из углеводов он содержит лактозу или сахарозу. 3. Препарат по п. 1, отличающийся тем, что в качестве наполнителей он содержит пищевые порошкообразные добавки из сырья растительного происхождения или из продуктов переработки молока, молочной сыворотки.