АНТИАГРЕГАЦИОННЫЕ СРЕДСТВА Российский патент 1997 года по МПК A61K31/44 

Изобретение относится к химическим соединениям гетероциклического ряда, а именно к 5-фенил-3-(пирид-2-ил)-, 5-фенил-3-(пирид-3-ил)- и 5-фенил- 3-(пирид-4-ил)изоксазолам общей формулы (I)

обладающим антиагрегационной активностью, что может быть использовано в клинических медицинских исследованиях.

Ближайшими структурными аналогами предлагаемых соединений являются 5-оксиметил-3-(пирид-2-ил)изоксазол (авт. св. N 1624958) и 5-оксиметил-3-(пирид-3-ил)изоксазол (соединение II) /авт. св. N 1746676/.

За аналог предлагаемого соединения по биологической активности был выбран также препарат индометацин, используемый в качестве базового объекта [Машковский М. Д. Лекарственные средства. 1984, М. т.1. с.199] Индометацин обладает выраженной антиагрегационной активностью [Biochimica et Biophysica Acta, 1982, v. 175, N 2, pp.246-249,
5-Фенил-3-пиридилизоксазолы были синтезированы ранее с целью изучения региоселективности реакции дикетонов с гидроксиламином для получения изоксазолов [Heterocycles, 1983, N 3, p.501-504]
Данные соединения были получены по реакции 1,3-циклоприсоединения с использованием хлорангидридов пиридилгидроксамовых кислот с терминальными ацетиленами, структура предлагаемых соединений была установлена методами ЯМР- и масс-спектрометрии.

Целью изобретения является поиск биологически активных соединений в ряду производных изоксазола, обладающих ярко выраженной антиагрегационной активностью и низкой токсичностью.

Цель достигается 5-фенил-3-(пирид-3-ил)изоксазолом (соединение I), который превосходит 5-оксиметил-3-(пирид-3-ил)изоксазол по антиагрегационной активности в 2 раза, а также соединениями 5-фенил-3-(пирид-2-ил)изоксазолом и 5-фенил-3-(пирид-4-ил)изоксазолом, которые превосходят по активности 5-оксиметил-3-(пирид-2-ил)изоксазол.

Для соединения I нижняя граница концентрации соединения, при которой наблюдается 100% -ное ингибирование агрегации тромбоцитов (1C₁₀₀), составляет 20-50 мкМ, а для соединения II 50-100 мкМ. Для 5-фенил-3-(пирид-2-ил)- и 5-фенил-3-(пирид-4-ил)изоксазолов 1C₁₀₀ составляет менее 200 мкМ.

Высокая антиагрегационная активность соединений неочевидна и не вытекает из их структурных формул и, следовательно, предлагаемое техническое решение отвечает критерию изобретения "существенные отличия".

Предлагаемые соединения обладают антиагрегационной активностью в концентрациях 10^-6-10^-3 М, то есть в фармакологически приемлемом диапазоне, и могут являться основой для создания новых лекарственных препаратов. Таким образом, заявляемое техническое решение соответствует критерию изобретения "положительный эффект".

Пример 1. Синтез 5-фенил-3-(пирид-3-ил)изоксазола.

К раствору 0,62 г гидрохлорида пиридил-3-гидроксамоилхлорида и 1,63 г фенилацетилена в 40 мл абсолютного этилового спирта прибавляют по каплям при перемешивании раствор 0,65 г триэтиламина в 10 мл абсолютного этилового спирта. Реакционную смесь перемешивают 3 ч при комнатной температуре, затем упаривают растворитель в вакууме. Полученный осадок растворяют в бензоле, твердый остаток отделяют. Фильтрат упаривают и перекристаллизовывают из смеси ацетон-вода. Выход 0,27 г (38,0%), т. пл. 142-143^oC.

ПМР-спектр (ДМСО-d₆, δ, м.д.): 9,13 (d, IH, 2-H); 8,73 (dd, IH, 6-H); 8,32 (dt, IH, 4-H); 7,94 (dd, IH, 5-H); 7,74(c, IH, 4-H изокс.); 7,6 (м, 5Н, фенил).

C₁₄H₁₀N₂O.

Найдено, С 74,13; H 4,37; N 12,9.

Вычислено, С 75,68; H 4,51; N 12,62.

Пример 2. Синтез 5-фенил-3-(пирид-2-ил)изоксазола.

К раствору 0,62 г гидрохлорида пиридил-2-гидроксамоилхлорида и 1,63 г фенилацетилена в 35 мл абсолютного этилового спирта прибавляют по каплям при перемешивании раствор 0,65 г триэтиламина в 12 мл абсолютного этилового спирта при 0^oC. Затем смесь доводят до комнатной температуры и перемешивают 3 ч. Растворитель упаривают в вакууме, вещество извлекают кипящим гексаном. Перекристаллизовывают из гексана. Выход 0,21 г (30%), т.пл. 129-130^oC.

ПМР-спектр (ДМСО-d₆, d, м.д.): 8,7 (dd, IH, 6-H); 8,06 (dd, IH, 3-H); 7,99 (dt, IH, 4-H); 7,9 (ddd, IH, 5-H); 7,5(c, IH, 4-H изокс.); 7,45-7,6 (м, 5Н, фенил).

C₁₄H₁₀N₂O.

Найдено, С 76,9; H 4,47; N 11,86;
Вычислено, С 75,68; H 4,51; N 12,62.

Пример 3. Синтез 5-фенил-3-(пирид-4-ил)изоксазола.

К раствору 0,62 г гидрохлорида пиридил-4-гидроксамоилхлорида и 1,63 г фенилацетилена в 50 мл абсолютного этилового спирта прибавляют по каплям при перемешивании раствор 0,65 г триэтиламина в 10 мл абсолютного этилового спирта при 0^oC. Реакционную смесь доводят до комнатной температуры, перемешивают 5 ч. Полученный осадок растворяют в бензоле, твердый остаток отделяют. Фильтрат упаривают и перекристаллизовывают из бензола, промывают холодной водой. Выход 0,19 г (27%), т.пл. 164-165^oC.

ПМР-спектр (ДМСО-d₆, d, м.д.): 8,8 (dd, 2H, 2-H, 3-H); 8,7 (dd, 2H, 5-H, 6-H); 7,94, 7,5 (м, 5Н, фенил); 7,86(dd, 2H, 5-H, 6-H); 7,8 (dd, 2H, 2-H, 3-H); 7,45(c, IH, 4-H изокс.).

C₁₄H₁₀N₂O.

Найдено, С 74,96; H 4,24; N 13,17;
Вычислено, С 75,68; H 4,52; N 12,61.

Пример 4. Проведение биологических испытаний 5-фенил-3-пиридилизоксазолов на наличие антиагрегационной активности.

Методика проведения эксперимента.

Тромбоцитарную плазму получали центрифугированием свежеполученной донорской крови от здоровых мужчин возраста 20-35 лет (антикоагулянт 0,38 цитрат натрия) в течение 15 мин при 200 g при комнатной температуре. Бестромбоцитарную плазму получали центрифугированием тромбоцитарной плазмы 10 мин при 1000 g. В качестве индуктора агрегации использовали свежеприготовленный раствор арахидоновой кислоты (Sigma) в бестромбоцитарной плазме. Агрегацию тромбоцитов проводили в агрегометре, изготовленном в СП "БиоХимМак", Москва. Условия проведения эксперимента по агрегации тромбоцитов: 37^oC, объем тромбоцитарной плазмы 0,5 мл, скорость перемешивания 100 об/мин, концентрация арахидоновой кислоты 500 мкМ, время прединкубации с препаратом ингибитора 2 мин, концентрация диметилсульфоксида во всех экспериментах 0,5 об. Количественной характеристикой степени агрегации служило относительное изменение коэффициента светопропускания тромбоцитарной плазмы через 5 мин после добавления индуктора агрегации. В отсутствии ингибитора агрегации эта величина принималась за 100% Длина волны зондируемого светового потока 660 нм. В опытах, где в качестве индуктора агрегации тромбоцитов использовали АДФ, наблюдалось подавление "второй волны агрегации" под действием тех же доз ингибитора, что и в опытах с арахидоновой кислотой.

Были проведены эксперименты сравнения свойств веществ. Данные приведены в табл. 1-6 экспериментов. Соединение I 5-фенил-3-(пирид-3-ил)изоксазол; соединение II 5-оксиметил-3-(пирид-3-ил)изоксазол.

Во всех этих экспериментах индометацин ингибирует агрегацию в концентрациях от 5 до 25 мкМ.

На основании полученных экспериментальных данных строят график зависимости агрегации тромбоцитов от концентрации ингибитора (соединение I, соединение II) /см. чертеж/. На чертеже показаны преимущества соединения I по сравнению с соединением II: одинаковую степень ингибирования соединение I вызывает в меньшей концентрации, чем соединение II.

Разброс по IC₁₀₀ для экспериментов объясняется тем, что в каждом отдельном эксперименте брался индивидуальный образец плазмы поскольку кровь разных доноров отличается по составу, количеству и свойствам форменных элементов крови, статистический разброс по значениям неизбежен.

Результаты проведенных экспериментов свидетельствуют о том, что 5-фенил-3-пиридилизоксазолы обладают антитромбоцитарной активностью, причем механизм их действия отличается от механизма действия индометацина - ингибитора циклооксигеназы, что было подтверждено экспериментами по ингибированию циклооксигеназы.

Таким образом, 5-фенил-3-пиридилизоксазолы являются мощным антиагрегационными средствами, что может быть использовано в медицине и ветеринарии.

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, а именно к средствам ингибирования агрегации тромбоцитов. Для этой цели использовали 5-фенил-3-пиридилизоксазолы. Активность указанных соединений сопоставима с активностью индометацина. 1 ил., 6 табл.

Применение 5-фенил-3-пиридилизоксазолов формулы

в качестве антиагрегационных средств.