СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СТЕПЕНИ ВЗАИМНОГО УСИЛЕНИЯ АНТИМИКРОБНОЙ АКТИВНОСТИ АНТИСЕПТИКОВ ПРИ ИХ СОЧЕТАНИИ Российский патент 1998 года по МПК G01N33/48 

Изобретение относится к микробиологии, в частности к экспериментальной химиотерапии инфекционных болезней.

Как известно, антимикробная активность любого химиотерапевтического средства в отношении того или иного потенциального возбудителя бактериальной инфекционной болезни выражается в минимальных бактериостатических дозах /МБД/, т.е. тем определяемым методом серийных разведений в оптимальном питательном субстрате минимальным количеством биологически активного вещества в мкг/мл, которое полностью подавляет развитие соответствующего микроба. При этом, чем меньше МБД, тем больше антимикробная активность испытуемого антисептика.

Таким же образом, ориентируясь на лабораторное определение МБД, можно получить общее представление об эффективности химиотерапевтического препарата, представленного комбинацией двух химических совместимых антисептиков. Однако при этом, в случае регистрации синергизма антимикробного действия ингредиентных антисептиков /взаимного усиления антимикробных свойств/, невозможно сделать заключение о степени повышения активности каждого сочетаемого биологически активного вещества под воздействием другого. /Данющенкова Н.М., 1988/.

Специальной методики определения степени взаимного усиления активности антисептиков при их сочетании пока нет. Между тем, при решении конкретных задач экспериментальной химиотерапии почти постоянно возникает потребность давать сравнительную оценку степени взаимного усиления антимикробной активности ингредиентных антисептиков, когда дело касается подлинно научно обоснованного отбора наиболее эффективного в отношении того или иного тест-микроба комбинированного химиотерапевтического препарата.

Сущность изобретения заключается в раздельном определении на первом этапе методом серийных разведений в оптимальном питательном субстрате максимальных пороговых небактериостатических доз, т.е. неактивных доз /НАД/ в мкг/мл ингредиентных антисептиков в отношении тест-микроба, в постановке после этого качественной пробы на синергизм антимикробного действия сочетаемых антисептиков путем регистрации при наличии такового отсутствия признаков роста тест-микроба в оптимальном питательном субстрате, содержащем смесь испытуемых биологически активных веществ в ранее оттитрованных НАД, в последующем титровании при положительных результатах пробы методом серийных разведений минимальных бактериостатических доз /МБД/ в мкг/мл каждого антисептика в присутствии НАД другого сочетаемого вещества, в определении на заключительном этапе степени взаимного усиления антимикробной активности антисептиков при их сочетании, которая количественно для каждого вещества в отдельности, будет выражаться отношением его НАД к МБД.

Пример. В соответствии с примерной целевой установкой исследования предполагается дать сравнительную характеристику степени взаимного усиления антистафилококковой активности ингредиентных антисептиков в пяти водорастворимых хинозолсодержащих двухкомпонентных химиотерапевтических препаратах, представленных комбинацией хинозола с такими антибиотиками, как пенициллин, стрептомицин, эритромицин, ристомицин, мономицин.

Для этого по предлагаемому способу первоначально методом серийных разведений в питательном бульоне раздельно определяют максимальные пороговые нестафилостатические дозы /НАД/ для каждого испытуемого антисептика /табл. 1/.

Затем применительно каждого сочетания антисептиков ставят качественную пробу на констатацию синергизма антистафилококкового действия путем посева тест-микроба в питательный бульон, содержащий биологически активные вещества в ранее оттитрованных НАД, и последующей регистрации отсутствия признаков микробного роста в положительных случаях /табл. 2/.

По результатам качественной пробы исключено из дальнейших испытаний сочетание хинозола с пенициллином как неэффективное по признаку взаимного усиления антистафилококкового действия ингредиентных антисептиков.

В остальных четырех случаях, где синергизм антистафилококкового действия ингредиентных антисептиков был зарегистрирован, осуществляют раздельное титрование методом серийных разведений в питательном бульоне минимальной бактериостатической дозы /МБД/ в мкг/мл вначале хинозола в присутствии ранее определенной и представленной в табл. 1 НАД соответствующего антибиотика, а затем, наоборот, титрование аналогичным образом МБД ингредиентного антибиотика в присутствии НАД теперь уже хинозола.

Результаты такого рода титрований МБД применительно каждому испытуемому сочетанию антисептиков представлены в табл. 3.

В итоге степень взаимного усиления антимикробного действия одного ингредиентного антисептика под воздействием другого количественно будет выражаться для каждого сочетаемого вещества отношением обозначенной для него в табл. 1 неактивной дозы /НАД/ к его же МБД, отраженной в табл. 3.

Табл. 4 дает наглядное представление о финальных результатах приведенного в данном примере испытания.

Полученные данные используются в соответствии с целевой установкой исследования.

Так, например, если предполагалось по результатам наблюдения подобрать антибиотик, способный в наибольшей степени повышать активность хинозола, то таковым в данном случае будет мономицин; если же, наоборот, предстояло определить активность каких антибиотиков больше всего усиливает хинозол, то выбор в равной степени остановится на стрептомицине и ристомицине.

Использование: в микробиологии, в частности в экспериментальной химиотерапии. Технический результат: возможность точно оценивать степень взаимного усиления антимикробной активности антисептиков. Сущность: раздельно титруют методом серийных разведений в питательной среде максимально пороговые небактериостатические для тест-микроба дозы в мкг/мл ингредиентных антисептиков, т.е. неактивные дозы (НАД), затем ставят качественную пробу на синергизм в действии антисептиков, свидетельством чего будет подавление микробного роста в среде, содержащей смесь испытуемых веществ в концентрациях, соответствующих НАД, после чего одинаковым образом титруют методом серийных разведений в питательной среде минимальные бактериостатические дозы (МБД) в мкг/мл веществ, вначале одного в присутствии НАД другого, а затем наоборот, выражая количественно для каждого вещества степень взаимного повышения активности отношением его НАД к его же МБД. 4 табл.

Способ определения степени взаимного усиления антимикробной активности антисептиков при их сочетании, отличающийся тем, что устанавливают в отношении тест-микроба методом серийных разведений в оптимальном питательном субстрате максимальные небактериостатические дозы, т.е. пороговые неактивные дозы (НАД) в мкг/мл ингредиентных антисептиков, после чего ставят качественную пробу на констатацию синергизма антимикробного действия сочетаемых биологически активных веществ в условиях добавления их к питательной среде в концентрациях, соответствующих НАД, и при положительном результате, т.е. при регистрации подавления микробного роста, осуществляют одинаковым образом раздельное титрование методом серийных разведений в питательной среде минимальной бактериостатической дозы (МБД) в мкг/мл вначале одного вещества в присутствии НАД другого, а затем наоборот, выражая количественно степень взаимного повышения активности для каждого антисептика отношением его НАД к МБД.