ШТАММ БАКТЕРИЙ MORGANELLA MORGANII - ПРОДУЦЕНТ ТЕРМОЛАБИЛЬНОГО ЭНТЕРОТОКСИНА Российский патент 1998 года по МПК C12N1/20 A61K39/02 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (ЛТ-энтеротоксина) и анатоксина M. Morganii; при производстве вакцин.

Целью изобретения является штамм Morganella morganii N 2223, обладающий повышенной токсинпродуцирующей способностью.

Штамм Morganella morganii N 2223 выделен от больного ребенка с кишечной инфекцией, депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича и имеет регистрационный номер 240.

Штамм M. Morganii ГИСК 240 характеризуется следующими признаками:
Морфологические признаки. При окраске по Граму - грамотрицательные палочки располагаются в мазке отдельно или попарно.

Культуральные признаки. При выращивании на 1,5%-ном мясопептонном агаре (pH 7,2 - 7,4), содержащем 5% эритроцитов кролика, при температуре 35 - 36^oC штамм растет с крупных колоний, имеющих ровные края. При выращивании в бульоне Хоттингера (pH 7,2 - 7,4), температура 35 - 36^oC, в течение 20 ч дает диффузное помутнение и нежную пленку на поверхности среды.

Образует фенилаланидезаимназу и индол, не ферментирует лактозу и ферментирует с образованием кислоты и газа глюкозу, расщепляет мочевину, продуцирует орнитиндекарбоксилазу.

Серологические свойства. Серотип 01ab.

Способы определения активности ЛТ-энтеротоксина. Субплантарное введение мышам весом 15 - 16 г 0,05 мл центрифугата 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки не менее 140 (Аксенова Е.В., 1980).

Интраназальное введение 0,05 мг 20-часовой бульонной культуры вызывает гибель 95% мышей-самцов весом 15 - 16 г в течение 20 мин при язвенных тонических судорогах и асфиксии (Войно-Яеснецкая Н.К., 1957).

Внутримышечное введение 300 млн. микробных клеток 20-часовой бульонной культуры вызывает некроз кожи кролика диаметром 3,5 см.

В опыте петля тонкой кишки кролика дает положительный результат V/l = 1,1.

Гретый при 56^oC в течение 45 мин центрифугат 20-часовой бульонной культуры вызывает "отек лапки" мышей до 30 мг, не вызывает некроза кожи кролика. Гретая при 100^oC 20-часовая бульонная культура не вызывает накопления жидкости в изолированной петле тонкого кишечника кролика (V/l = 0,3).

Условия хранения культуры после леофильной сушки или выращенной в 0,3%-ном МПА (pH 7,2 - 7,4), залитом стерильным вазелиновым маслом, при температуре 4^oC.

Среды для размножения - бульон Хоттингера (pH 7.2 - 7,4), содержащий 5% эритроцитов кролика при температуре 35 - 36^oC в течение 20 ч.

Генетические особенности: Hly⁺, Ent⁺, pen R. Устойчив к пенициллину, тетрациклину, гентамицину, стрептомицину, метициллину.

Пример 1. 0,1 мл 1 млрд. суспензии суточной агаровой культуры в физиологическом растворе сеют в стерильный бульон Хоттингера (5 мл, pH 7,2 - 7,4) инкубируют в термостате при 36^oC в течение 20 ч, центрифугируют при 6000 об/мин в течение 7 мин. Полученную надосадочную жидкость (центрифугат) в объеме 0,05 мл вводят субплантарно в заднюю лапку мышей-самцов весом 15 - 16 г. Через 24 ч животных умерщвляют эфиром и ампутированные по голеностопному суставу лапки взвешивают на торсионных весах. При этом центрифугат штамм ГИСК 240 давал разницу между левой и правой лапками не менее 140 мг. А остальные 20 штаммов, способные продуцировать ЛТ-энтеротоксины, 50 - 100 мг. Контроль - нативный стерильный бульон Хоттингера (pH 7,2 - 7,4) и гретый при 56^oC центрифугат 20-часовой бульонной культуры 30 - 35 мг соответственно.

Результаты представлены в таблице.

Пример 2. 0,1 мл 1 млрд. суспензии суточной агаровой культур сеют в бульон Хоттингера (pH 7,2 - 7,4), инкубируют в термостате при 36^oC в течение 20 ч и 500 млн.м.т. суспензию в объеме 1 мл вводят в сегмент изолированной петли тонкого кишечника кролика. Через 16 ч животных умерщвляли воздушной эмболией и рассчитывали отношение объема эксудата к длине сегмента (V/l). При этом 20-часовая бульонная культура штамма M. morganii ГИСК 240 оказалась способной давать накопление жидкости в большом объеме и показатель V/l составил 1,1. У остальных 20 штаммов, способных продуцировать ЛТ-энтеротоксин, показатель V/1 колеблется в пределах 0,6 - 1,0. При введении стерильного бульона Хоттингера и гретой при 100^oC 20-часовой бульонной культуры отношение объема наполненной жидкости к длине сегмента составляло 0,25 и 0,3 соответственно.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина и анатоксина Morganella morganii при производстве вакцин. Штамм Morganella morganii N 2223 выделен от больного ребенка с кишечной инфекцией, депонирован в коллекции Государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских и биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича и имеет регистрационный номер 240. Штамм бактерий Morganella morganii ГИСК 240 является продуцентом термолабильного энтеротоксина. Штамм обладает повышенной токсинпродуцирующей способностью. Штамм устойчив к пенициллину, тетрациклину, гентамицину, стрептомицину, метициллину. Штамм обладает высокой токсинпродуцирующей способносностью. 1 табл.

Штамм бактерий Morganella morganii ГИСК 240 - продуцент термолабильного энтеротоксина.