ШТАММ БАКТЕРИЙ CITROBACTER FREUNDII ГИСК №255, ОБЛАДАЮЩИЙ КОМПЛЕКСОМ ФАКТОРОВ ПАТОГЕННОСТИ Российский патент 2001 года по МПК C12N1/20 A61K39/02 A61K39/40 C12N1/20 C12R1/00 C12R1/01 

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина (LT-энтеротоксина) и анатоксина при производстве вакцин, а также может использоваться как эталонный штамм Citrobacter freundii.

Техническим результатом является штамм Citrobacter freundii N 882, обладающий комплексом факторов патогенности.

Штамм был выделен из испражнений больного с острым лейкозом в 1998 году в городской клинической больнице N 8 г. Уфы и депонирован в коллекции государственного научно-исследовательского института стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А.Тарасевича и имеет регистрационный номер 255.

Citrobacter freundii ГИСК N 255 характеризуется следующими признаками.

Культуральные признаки: растет на обычных универсальных плотных питательных средах с образованием характерных изолированных колоний. На среде Эндо утилизирует лактозу. В мясопептонном бульоне вызывает равномерное помутнение с выпадением равномерного осадка.

Способы определения активности LT-энтеротоксина:
Субплантарное (модель отека лапки) введение мышам весом 15-16 г 0,05 мл центрифугата 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки с разницей более 120 мг.

Интраназальное (Войно-Ясенецкая Н.К. 1967 г.) введение 80 млн. м.т. вызывает гибель 95% белых мышей-самцов весом 15-16 г в течение 20 минут.

Внутримышечное введение 300 млн. микробных клеток 20-часовой бульонной культуры вызывает некроз кожи кролика диаметром 3,2 см.

В опыте петли тонкой кишки кролика при введении штамма в концентрации 500 млн. м.т. дает положительный результат (V/L = 1,4).

Гретый при 56^oC в течение 45 мин центрифугат 20-часовой бульонной культуры вызывает отек лапки мышей до 30 мг, не вызывает некроз кожи кролика. Гретая при 100^oC 20-часовая культура не вызывает накопления жидкости в изолированной петле тонкого кишечника кролика (V/L = 0,3).

Условия хранения: при температуре 4^oC культура после леофильной сушки или выращенной в 0,3% МПА (pH 7,2-7,4) и залитая стерильным вазелиновым маслом. Условия и состав среды для размножения - бульон Хоттингера (pH 7,2-7,4), 1,5% МПА при температуре 37^oC в течение 18-24 часов.

Пример 1. 0,1 мл 1 млрд. суспензии суточной агаровой культуры в физиологическом растворе сеют в стерильный бульон Хоттингера (5 мл pH 7,2-7,4), инкубируют в термостате при 36^oC в течение 20 часов, центрифугируют при 6000 об/мин в течение 7 минут. Полученную надосадочную жидкость (центрифугат в объеме 0,05 мл вводят субплантарно в заднюю левую лапку мышей-самцов весом 15-16 г. Через 24 часа животных умерщвляют эфиром и ампутированные по голеностопному суставу лапки взвешивают на торсионных весах. При этом центрифугат штамма ГИСК N 255 давал разницу между левой и правой лапками не менее 120 мг. Контроли - нативный стерильный бульон Хоттингера (pH 7,2-7,4) и гретый при 56^oC центрифугат 20-часовой бульонной культуры 30-35 мг соответственно.

Пример 2. Суточную агаровую культуру разводили на физиологическом растворе, при этом создавая разные концентрации микробных тел в 1 мл: 1 млрд. м. т. , 800 млн. м. т., 600 млн. м.т. ... до 25 млн. м.т. Мышей-самцов весом 16-18 г внутрибрюшинно заражали с разными концентрациями микробных тел, для определения LD₅₀. LD₅₀ у Citrobacter freundii ГИСК N 255 составил 50 млн. м. т.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения термолабильного энтеротоксина и анатоксина Citrobacter freundii при производстве вакцин. Штамм бактерий Citrobacter freundii обладает комплексом факторов патогенности, а также повышенной токсинопродуцирующей способностью.

Штамм бактерий Citrobacter freundii ГИСК 255, обладающий комплексом факторов патогенности.