СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ ЭНТЕРОВИРУСНЫХ УВЕИТОВ У ДЕТЕЙ В ОТДАЛЕННЫЕ СРОКИ Российский патент 1999 года по МПК G01N33/569 

Предлагаемое изобретение относится к офтальмологии, а именно, к способам диагностики энтеровирусных увеитов у детей.

Энтеровирусные увеиты (ЭУ) занимают в настоящее время одно из ведущих мест в этиологической структуре раноприобретенных увеитов у маленьких детей и являются одним из важных факторов снижения зрения и развития инвалидности с раннего возраста. По материалам НИИ глазных болезней им.Гельмгольца удельный вес ЭУ среди всех увеитов у детей до 3 лет составляет 54%.

Малозаметное начало увеита, возникающего на фоне тяжелой общесоматической инфекции, затрудняет его раннюю диагностику, что способствует развитию тяжелых запущенных форм увеитов.

Отличительной особенностью ЭУ является прогрессирующий характер развития осложнений без признаков активности воспалительного процесса в глазу, что по-видимому связано с персистенцией вируса в тканях глаза.

За ближайший аналог принят способ диагностики ЭУ, основанный на выявлении характерных клинических признаков и обнаружении в сыворотке крови антител против возбудителя (ECHO 11 и ECHO 19) в титре выше 1:64-1:128. С этой целью у больного из локтевой вены берут 2 мл крови и отсасывают сыворотку. Эту сыворотку исследуют в реакции нейтрализации вируса в культуре ткани. За титр сыворотки принимают наибольшее разведение сыворотки, нейтрализующее 100 ТЦД₅₀ вируса.

Антитела в крови, как показали наши исследования, держатся в течение нескольких лет, поэтому этот метод подходит и для ретроспективной диагностики. Однако он очень трудоемок, требует наличия специализированной лаборатории, постоянного пассирования музейных штаммов вирусов и ведения культур клеток, что очень дорого. Результат при постановке реакции нейтрализации вируса учитывают только через неделю, что снижает эффективность данного метода для клинической практики (Лашкевич В.А. и др. Вспышка энтеровирусного увеита у детей в Омске в 1987-1988 гг. Вопр.вирусол., 1990, N. 1, с. 33-38).

Ранее нами было показано, что в острый период увеита у 7-25% больных с изолированными эндогенными увеитами антиген возбудителя попадает в конъюнктиву век. Однако, экспериментально-клинические исследования выявили, что в отличие от вируса простого герпеса, антигены увеитогенных штаммов энтеровирусов как правило попадают в конъюнктиву не в начальный острый период заболевания, а в отдаленные сроки спустя 2 и более лет. Проведение своевременной диагностики и назначение адекватной терапии в острый период заболевания представляет большие трудности, поэтому большинство больных детей направляются в МНИИ ГБ им. Гельмгольца с диагнозом увеит неясной этиологии.

Сущность предлагаемого способа состоит в исследовании соскобов с конъюнктивы век у детей с увеитами предположительно энтеровирусной этиологии с помощью прямого метода иммунофлуоресценции для выявления антигенов энтеровирусов.

Способ осуществляется следующим образом. После предварительной анестезии 0,5% раствором дикаина у ребенка с конъюнктивы нижнего века тупым скальпелем берут соскоб. Материал (в основном клетки эпителия) наносят равномерно на обезжиренное стекло, подсушивают на воздухе, фиксируют в холодном (+4^oC) 96^o этиловом спирте и хранят в холодильнике при 4^oC не более 7 дней. Перед исследованием препарат промывают проточной водой 20 минут, удаляют избыток жидкости и наносят на соскоб меченную ФИТЦ смесь гипериммунных антисывороток против ECHO 11 и ECHO 19 в рабочем разведении. Окраску проводят во влажной камере при 37^oC в течение 30 минут, затем препарат вновь промывают проточной холодной водой 60 минут и просматривают в люминесцентном микроскопе ЛЮМАМ И2 с водной иммерсией (объектив х70) (Муравьева Т.В. Применение метода флуоресцирующих антител для диагностики некоторых заболеваний глаз (трахома, паратрахома, герпес. Канд.дисс., 1967).

Проведенные исследования у 32 детей с эндогенными увеитами с давностью заболевания от 3 до 10 лет позволили установить диагноз "ЭУ" у 9 детей (табл. 1).

У всех детей с положительными результатами иммунофлуоресцентного обследования в крови выявлены высокие титры антител (1:128- 1:32000) к энтеровирусу ECHO 11, что подтверждает данные МФА.

Клинические примеры.

Больной Н. , 1984 г.р. В первый месяц после рождения перенес пневмонию, по поводу которой он лечился в стационаре в течение 40 дней. Изменения в правом глазу (OD) выявили в 8 месяцев. Обратился в ННИИ ГБ им.Гельмгольца в 1994 г. (10 лет) с диагнозом "увеит неясной этиологии, вторичная глаукома OD". При обследовании выявили изменения, патогномоничные для ЭУ: лизис радужки с остатками дистрофически измененной стромы вокруг зрачка и обнаженным пигментным листком на периферии, щелевидная колобома на 9 часах, смещение зрачка к 5 часам, иридокорнеальные сращения, мелковатая передняя камера, отложение пигмента на передней и задней капсуле хрусталика. Глазное дно без патологии. ВГД OD - 25-30 мм рт.ст. Левый глаз (OS) здоров.

При обследовании в МНИИ ГБ им.Гельмгольца в соскобе конъюнктивы OD выявлен антиген вируса ECHO 11. В сыворотке крови обнаружены антитела к вирусу ECHO 11 в высоком титре (1:1024). Результаты обследования на другие инфекции отрицательные. На основании клинико-лабораторных данных поставлен диагноз "ЭУ OD в стадии ремиссии, вторичная некомпенсированная глаукома", что позволило назначить адекватное лечение.

Больная Л., 1988 г.р. В 1,5 месяца перенесла обструктивную пневмонию, в то же время отмечали частый жидкий стул и впервые отметили изменения обоих глаз. Диагностировали увеит обоих глаз (OU) неясной этиологии. В 3 года выявили повышение ВГД OD. В 1995г. обратилась в МНИИ ГБ им.Гельмгольца. При осмотре выявлен лизис стромы радужки больше в OS, имеются участки обнажения пигментного листка, на 2-3 часах полная колобома, зрачок смещен несколько вниз, пигментная кайма отсутствует. Нежная деструкция стекловидного тела. ВГД OD-24 мм рт.ст., OS-37 мм рт.ст.

В соскобе с конъюнктивы OU выявлен антиген энтеровируса ECHO 11. Титр антител к вирусу ECHO 11 в крови 1:4096. Результаты обследования на другие инфекции отрицательные. На основании результатов клинико-лабораторного обследования диагностирован энтеровирусный увеит OU, вторичная некомпенсированная глаукома OS.

Больная П., 1981 г.р. В 10 месяцев перенесла ОРЗ с высокой температурой, после чего стал краснеть и болеть OD. По месту жительства диагностировали увеит OD неясной этиологии, после 6 лет отмечали периодическое повышение ВГД. В мае 1995 г. покраснел OD. В связи с этим ребенка направили на консультацию в МНИИ ГБ им.Гельмгольца.

При обследовании выявлены дистрофические изменения роговицы у лимба на 3 и 9 часах, дистрофические изменения стромы радужки, отложение пигмента на радужке, зрачок запаян пигментом и фибрином, глубжележащие среды не видны. При исследовании соскоба с конъюнктивы OD антигены энтеровирусов не выявлены. Титр антител в крови к ECHO 11 и ECHO 19 меньше 1:16. На основании обследования энтеровирусная этиология исключена. Диагностирован раноприобретенный увеит неясной этиологии, заращение зрачка.

Таким образом, обследование детей с увеитами различного генеза показало, что выявление антигенов офтальмотропных штаммов энтеровирусов ECHO 11 и ECHO 19 в соскобе конъюнктивы в отдаленные сроки после начала заболевания глаз коррелирует с уровнем антител к данным вирусам в крови, анамнестическими данными и клиническими признаками увеита.

Учитывая, что диагностика раноприобретенных увеитов чрезвычайно трудна и как правило в квалифицированные учреждения дети попадут спустя длительное время (несколько лет) после начала увеита, с неустановленной этиологией заболевания, предлагаемый способ диагностики, основанный на выявлении антигенов энтеровирусов в конъюнктиве век, позволяет быстро (3 часа) установить этиологию увеита спустя 2-10 лет после его начала, даже в период ремиссии. В отличие от серодиагностики, требующей специализированной лаборатории, и 7 дней для получения ответа, иммунофлуоресцентное исследование доступно более широкому кругу лечебных учреждений, просто в исполнении и позволяет проводить экспресс-диагностику.

Изобретение относится к офтальмологии, а именно к способам диагностики энтеровирусных увеитов. Диагностику осуществляют по наличию антигенов офтальмотропных штаммов энтеровирусов ЭХО 11 и ЭХО 19 в соскобе с конъюктивы век с помощью метода флуоресцирующих антител. Способ является простым, доступным и позволяет осуществить диагностику в отдаленные сроки после начала заболевания. 1 табл.

Способ диагностики энтеровирусных увеитов у детей в отдаленные сроки, отличающийся тем, что диагностику осуществляют по наличию антигенов офтальмотропных штаммов энтеровирусов ЭХО 11 и ЭХО 19 в соскобе с коньюктивы век с помощью метода флуоресцирующих антител.