СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ИММУНОГЛОБУЛИНОВ Российский патент 1999 года по МПК A61K35/14 A61K39/395 

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии и биотехнологии, и может быть использовано при получении иммуноглобулинов, антитоксических, противомикробных и противовирусных сывороток и биологических иммунодиагностических препаратов.

Известен способ получения иммуноглобулинов, включающий разделение крови на фракции и извлечение иммуноглобулинов из сыворотки (1).

Недостатком способа является невысокий выход иммуноглобулинов, т.к. эритроцитарная масса крови не используется.

Известен способ получения иммуноглобулинов из эритроцитарной массы, включающий обработку ее раствором реагента, отделение плазмы от форменных элементов и извлечение иммуноглобулинов. В качестве реагента использован раствор неионного детергента (2).

Недостатком известного способа является невысокий выход целевого продукта.

Задача изобретения - создание способа получения иммуноглобулинов, характеризующегося большей производительностью при сохранении высокого качества целевого продукта.

Она достигается тем, что в способе получения иммуноглобулинов, преимущественно из эритроцитарной массы, включающем обработку их раствором реагента, отделение плазмы от форменных элементов крови и извлечение иммуноглобулинов, в качестве реагента использован неионный детергент.

Предлагаемый способ осуществляется следующим образом:
К эритроцитарной массе крови добавляют растворенный в физиологическом растворе (pH 4,5-8,2) неионный детергент, отделяют плазму от форменных элементов крови путем спиртового фракционирования. Дополнительный выход иммуноглобулинов достигает 35%.

Пример 1. Со станции переливания крови были получены лейкомасса, эритроцитарная взвесь и взята эритроцитарная масса. Все 3 клеточные суспензии в течение 10 мин. центрифугировали на холоде при 3000 об/мин для отделения остаточных количеств сыворотки. Затем клетки крови смешивали в соотношении 1:1 с лизирующим раствором с тремя разными значениями pH: 4,5 (1 серия); 7,2 (2 серия) и 8,2 (3 серия) с неионным детергентом - 0,5% твин 80. В сыворотке и образцах лизатов клеток крови определяли уровни иммуноглобулинов классов A, M и G. ВО всех случаях по указанному методу получали дополнительные количества иммуноглобулинов любого класса.

Пример 2. Кровь от 5 гипериммунизированных лошадей-продуцентов противостолбнячных иммуноглобулинов собирали по 300 мл. с добавлением 4% цитрата натрия в соотношении 1:10. Кровь центрифугировали при 3000 об/мин в течение 15 мин., а из осадка брали пробы по 10 мл. и добавляли к ним по 10 мл. соответственно физиологического раствора с pH 7,2, 4,5, 8,2 с неионным детергентом - 0,5% твин 20. В лизате клеток крови определяли содержание общего белка, количество иммуноглобулина класса G, уровни специфических противостолбнячных антител. Наибольший выход иммуноглобулинов был получен при использовании физиологических растворов с pH 4,5 и 3,2. Количество иммуноглобулинов класса G и лизатах колебалось от 15% до 30% по отношению к его содержанию в сыворотке, что подтверждается данными определения концентрации белка.

В физиологическом растворе с детергентом антитела к возбудителю столбняка выявлены в титрах, превышающих значения, полученные в сыворотке крови. Наличие высокого уровня иммуноглобулинов и специфических антител, присутствовавших в клетках крови, указывает на реальные возможности использования данного метода при производстве специфических антитоксических сывороток и иммуноглобулинов.

Могут быть использованы другие неионные детергенты с подбором соответствующих разведений, позволяющих получить значительно более высокий выход иммуноглобулинов.

Источники информации, принятые во внимание:
1. Очистка и стандартизация препаратов крови человека. - М.: 1980, с. 123.

2. Заявка CH N 95810596.7, 22.09.95.

Изобретение относится к области медицины, в частности к иммунологии и биотехнологии и может быть использовано при получении иммуноглобулинов, антитоксических, противомикробных и противовирусных сывороток и биологических иммунодиагностических препаратов. Способ осуществляется следующим образом. К эритроцитарной массе крови добавляют растворенный в физиологическом растворе (pH 4,5-8,2) неионный детергент, отделяют плазму от форменных элементов крови путем спиртового фракционирования и извлекают иммуноглобулины. Дополнительный выход иммуноглобулинов достигает 35%. Технический рззультат получения иммуноглобулинов характеризуется большей производительностью при сохранении высокого качества целевого продукта.

Способ получения иммуноглобулинов, включающий обработку фракций крови раствором неионного детергента с последующим извлечением иммуноглобулинов общепринятыми приемами, отличающийся тем, что обрабатывают цельную кровь и/или фракции форменных элементов крови, а в качестве неионного детергента используют раствор твин 20 и твин 80 при рН 4,5 и рН 8,2.